EDTA-胰蛋白酶的配制1、胰酶是，就是說，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據細胞消化的難易程度自己調整。EDTA并不是必須的，容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾除菌。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時間和濾器，用的時候對上滅菌PBS即可。8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會，因為加的量很少，所以一般不會凍壞細胞。9、消化時。 胰酶顏色的變化是由PH值的變化引起，歸因于使用干冰運輸。陜西胰酶產品介紹

    產品簡介產品簡介：產品編號產品名稱產品包裝產品價格C0201胰酶細胞消化液100ml碧云天生產的胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含。該消化液經過過濾**，可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化，或者一些**的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點，通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數貼壁細胞。包裝清單：產品編號產品名稱包裝C0201胰酶細胞消化液100ml―說明書1份保存條件：4℃保存，一年有效。注意事項：在使用胰酶細胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被**污染。胰酶細胞消化液消化細胞時間不宜過長，否則細胞鋪板后生長狀況會較差。為了您的安全和**，請穿實驗服并戴一次性手套操作。使用說明使用說明：1.貼壁細胞的消化：a)吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。b)加入少量胰酶細胞消化液，略蓋過細胞即可，室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。c)顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化；或者用***吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來。此時吸除胰酶細胞消化液。加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液，吹打下細胞，即可直接用于后續(xù)實驗。d)如果發(fā)現消化不足。陜西胰酶產品介紹0.25%胰酶消化液（含有EDTA，含酚紅）pH值為7.2-7.8。

胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點,通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數貼壁細胞。使用說明：貼壁細胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細胞消化液（含酚紅）,略蓋過細胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細胞發(fā)現細胞剛好可以被吹打下來；此時吸除胰酶細胞消化液；加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。4、如果發(fā)現消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。

胰蛋白酶是一種肽鏈內切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動物的胰臟提取，經過純化后獲得結晶，再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個氨基酸，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機溶劑。胰蛋白酶的等電點pH值為10.1，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時不可逆失活。鈣離子對胰蛋白酶的酶活具有保護和***作用。[1]胰酶細胞消化液含 0.25%胰酶和 0.02%EDTA。

1、細胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細胞膜上與培養(yǎng)皿壁結合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時，細胞由于自身內部細胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點2、使用胎牛血清培養(yǎng)細胞，在使用胰酶消化時發(fā)現血清可以終止此過程，這是什么原因？血清終止的原理其實是競爭抑制，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結合，使胰酶失去消化細胞蛋白的機會。3、為什么使用了胰蛋白酶消化，細胞還是成團的，這可能是什么原因導致的？①消化時間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲不當，或者使用了過期胰酶消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的？浙江胰酶價格對比

為什么收到的胰酶會有顏色差異？陜西胰酶產品介紹

品名：0.25%胰蛋白酶溶液，1X分類：細胞消化試劑規(guī)格：100ML用途：消化試劑，如胰蛋白酶，被用于將粘附細胞從其附著的表面或底物上分離和降解，以及將組織進行游離，以開展原代細胞培養(yǎng)。產品包括2種常用濃度的γ照射豬胰蛋白酶（1：250）以及一種新型非哺乳動物豬胰蛋白酶替代品，稱為ThermoScientificHyQTaseTM.HyQTase是一種蛋白水解酶和膠原水解酶的混合超濾溶液，可以快速消化，同時不損傷細胞。其非哺乳動物配方使它適用于無血清應用，不需要失效或對酶抑制劑。此試劑可使細胞被快速分離，形成單細胞懸浮物，保持高細胞活力，并使傳代時的變異減至**小。陜西胰酶產品介紹