一、試驗原理1,ELISA試劑盒是以免疫學反響為基礎,將抗原、抗體的特異性反響與酶對底物的催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技能。免疫酶技能是將酶標記在抗體/抗原分子上,構成酶標抗體/酶標抗原,稱為酶結合物。該酶結合物的酶在免疫反響后,作用于底物使之呈色,依據(jù)色彩的有無和深淺,定位或定量抗原/抗體。2,ELISA法是免疫酶技能的一種,其特點是利用聚苯乙烯微量反響板(或球)吸附抗原/抗體,使之固相化,免疫反響和酶促反響都在其間進行。在每次反響后都要反復洗刷,這既確保了反響的定量聯(lián)絡,也避免了末反響的游離抗體/抗原的別離進程。在ELISA法中.酶促反響只進行一次,而抗原的免疫反響可進行一次或數(shù)次,即可用二抗(抗抗體)、三抗再次進行免疫反響。elisa試劑盒具有靈敏度高、特異性強、重復性好等特點。海寧瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
酶聯(lián)免疫吸附試驗為免疫學中的經(jīng)典實驗,通常其基本原理是:首先將一抗體包被到某固相載體表面,再將另一抗體與某酶連接成酶標抗體。在測定時,把受檢標本和酶標抗體按不同的步驟與包被抗體結合形成復合物。洗滌除去復合物以外的物質(zhì),結合在固相載體上的酶量與標本中受檢物質(zhì)的量成一定的比例。加入酶反應的底物后,底物被酶催化變?yōu)橛猩a(chǎn)物,產(chǎn)物的量與標本中受檢物質(zhì)的量直接相關,故可根據(jù)顏色反應的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高,故可極大地放大反應效果,從而使測定方法達到很高的敏感度。連云港睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子(CNTF)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)Elisa 試劑盒的檢測特異性較強。
小鼠二氫硫辛酸脫氫酶(DLD)檢測系列試劑盒樣品收集、處理及保存方法:1.血清:使用不含熱原和內(nèi)的試管,操作過程中避免任何細胞刺激,收集血液后,3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。2.血漿:EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。3.細胞上清液:3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。5.保存:假如樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝,凍存于-20℃,避免反復凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
ELISA檢測試劑盒應用定性夾心免疫檢測技術,用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國型HEV毒株中心氨基酸序列中抗原性很強的肽段,分別來自于該毒株的開放閱讀框2和開放閱讀框3。將樣品或標準品加入孔中并孵育,如果其中存在HEVIgM抗體,這些抗體就會與HEV的多肽抗原結合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP(辣根過氧化物酶)酶結合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結合物就會與一次孵育結合上的HEVIgM抗體相結合,洗板除去未結合的酶結合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時會發(fā)生酶-底物反應,只有那些含有HEVIgM抗體和酶結合物所形成的復合物的孔才會發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應,并且在波長:450nm處測量O.D.值,按照本HEVIgM抗體elisa試劑盒的測試標準,O.D.值大于或等于Cut-Off值的樣品被認為是初試陽性。Elisa 試劑盒的靈敏度可滿足多種需求。
小鼠蛋白激酶操作步驟:1.從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。2.設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;3.樣本孔中加入待測樣本50μL;空白孔不加。4.除空白孔外,標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶(HRP)標記的檢測抗體100μL,用封板膜封住反應孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。5.棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL),靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板5次(也可用洗板機洗板)。6.每個孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。Elisa試劑盒的質(zhì)量和穩(wěn)定性對檢測結果的準確性和可靠性至關重要。靖江乳脂球表皮生長因子8(MFGE8)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
Elisa 試劑盒可檢測生物樣本中的酶。海寧瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)
elisa試劑盒操作所需主要設備,包被緩沖液(PH9.60.05M碳酸鹽緩沖液)洗滌緩沖液,稀釋液,終止液,底物緩沖液,TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液,ABTS使用液,抗原、抗體和酶標記抗體。正常人血清和陽性對照血清。聚苯乙烯塑料板(簡稱酶標板)40孔或96孔,elisa試劑盒檢測儀,50μl及100μl加樣器,塑料滴頭,小毛巾,洗滌瓶。小燒杯、玻璃棒、試管、吸管和量筒等。4℃冰箱,37℃孵育箱。試驗原理,試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(elisa試劑盒).已知濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測??梢韵葘⑸锼貥擞浀目贵w同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。海寧瘦素(LEP)檢測試劑盒(酶聯(lián)免疫吸附試驗法)