胰蛋白酶是一種肽鏈內(nèi)切酶，屬于絲氨酸蛋白酶家族，不僅可以水解堿性氨基酸（精氨酸或賴氨酸）羧基端的肽鍵，還可以水解由堿性氨基酸的羧基形成的酰胺鍵或酯鍵。胰蛋白酶可以從牛、豬等哺乳動物的胰臟提取，經(jīng)過純化后獲得結(jié)晶，再制成凍干制劑。牛的胰蛋白酶有223個氨基酸，分子量為23800道爾頓，活性部位的絲氨酸殘基是不可缺少的絲氨酸蛋白酶。胰蛋白酶溶于水，不溶于乙醇、甘油和三氯甲烷等有機溶劑。胰蛋白酶的等電點pH值為10.1，**適pH值范圍在7.8~8.5左右，pH值大于9.0時不可逆失活。鈣離子對胰蛋白酶的酶活具有保護和***作用。[1]0.25%胰酶細胞消化液(含有EDTA，含酚紅)消化細胞時間不宜過長。湖北EDTA胰酶市場報價

1、胰酶是，就是說PBS,注意，盡量不要用水來溶，因為要保持滲透壓。2、EDTA的工作液溶度是－，根據(jù)細胞消化的難易程度自己調(diào)整。EDTA并不是必須的，容易消化的細胞可不加。EDTA對細胞貼壁性有影響，因此使用時要甚重。如果影響貼壁，但消化時必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對貼壁沒影響，那么可不離心。3、EDTA的濃度也是質(zhì)量體積比。和胰酶一起溶于PBS。4、注意，血清可終止胰酶的作用，但不能終止EDTA的作用，對有些細胞來說，終止消化后的離心是必要的。5、胰酶和EDTA在pH為8左右的時候**易溶解，在配制時可先滴幾滴NaOH將pH調(diào)至8，注意，胰酶可使溶液變酸，所以要邊溶邊測pH，隨時調(diào)整。注意，不可加過量NaOH，否則過堿，細胞會受不了。6、胰酶EDTA相對比較難溶，可用磁力攪拌器，或放入4度冰箱過夜，待溶解后過濾**。7、可配2－3乘的胰酶，這樣比較節(jié)約時間和濾器，用的時候?qū)ι?*PBS即可。8、儲存液放在－20度冰箱凍存，使用液放在4度，用的時候不要放在27度水浴鍋溫浴，因為這樣會讓胰酶很快失效，使用前放在室溫下一會。甘肅重組胰酶哪家便宜胰酶濃度：常用0.25%胰酶+0.02%EDTA作為消化液。

胰酶中的酚紅有哪些作用？酚紅在培養(yǎng)基中被用來作為pH指示劑，中性時為紅色，酸性時為黃色，堿性時為紫色。研究表明：酚紅可以模擬固醇類***（特別是雌***）的作用。為避免固醇類反應(yīng)，培養(yǎng)細胞尤其是哺乳類細胞時，建議用不含酚紅的培養(yǎng)基。由于酚紅干擾檢測，在做流式細胞檢測時，也會使用不含酚紅的培養(yǎng)基或者胰酶。圖 2. Phenol red test圖片來源網(wǎng)絡(luò)8、在做細胞凋亡檢測時，細胞為什么不能用含有EDTA的胰酶消化？Annexin V（膜聯(lián)蛋白）是Ca2+依賴的蛋白，EDTA會螯合Ca2+從而影響Annexin V，進而影響結(jié)果，因此需選用不含EDTA的胰酶。建議放入培養(yǎng)箱中進行消化，時間可以長一點。隨時觀察細胞情況，避免消化過度；也可使用細胞刮刀將細胞刮下，后用***吹勻，比消化簡單，還可避免使用胰酶帶來的傷害。

細胞培養(yǎng)的優(yōu)點:1.研究的對象是活細胞在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達到比較均一性通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。EDTA是乙二胺四乙酸，一種金屬螯合劑。

    ①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解，然后進行真空過濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進行稀釋，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷卻至室溫。然后稱取，加入10L異辛烷，在攪拌下使其形成均勻的分散液，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉(zhuǎn)速下處理2h，獲得濃度為。使用時用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次，，在300-400r/min的轉(zhuǎn)速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后，均進行離心分離，離心機轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min，時間10-15min收集、合并離心上層清液，進行反萃取，下層萃余液用于制備胰脂肪酶。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，在攪拌下加入等體積的反萃取液進行反萃取15-20min萃取液為0．。如此反萃取3次，每次萃取完成后，均進行離心分離，離心機轉(zhuǎn)速為4000-6000r/min,時間為15-20min。分別收集、合并離心上層清液和下層反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶。 胰酶可在-20℃下保存一年。湖北EDTA胰酶市場報價

含EDTA的胰酶消化活力會比不含EDTA的強。湖北EDTA胰酶市場報價

細胞傳代消化時所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑)，半貼壁細胞或者對胰酶敏感的細胞，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進行細胞消化。由于細胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性，常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細胞貼壁不是非常緊密，也可用不含有螯合劑的胰酶進行細胞消化。胰酶對細胞膜上粘附蛋白的損害比較大，如果進行細胞膜上蛋白的研究，建議選擇溫和的細胞消化試劑，盡量減少對細胞膜上蛋白的損傷。此外，由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融，拿到手中的大瓶胰酶進行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA)。湖北EDTA胰酶市場報價