①制備粗酶液稱取定量粗胰酶，其胰蛋白酶活性為，胰淀粉酶活性為，胰脂肪酶活性為。將其用pH值為、濃度為0．2mol/L的乙酸-乙酸鈉緩沖液溶解，然后進行真空過濾，收集濾液并用磷酸緩沖液進行稀釋，使胰蛋白酶活性為3-10U/mg，備用。②制備反膠束將AOT置于100℃烘箱中干燥至恒重，放入干燥器中冷卻至室溫。然后稱取，加入10L異辛烷，在攪拌下使其形成均勻的分散液，再加入定量蒸餾水，在200r/min的轉速下處理2h，獲得濃度為。使用時用異辛烷稀釋10倍。③萃取將稀釋10倍的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，按照AOT異辛烷反膠束：粗酶溶液體積比為（2-3):1的比例加入粗酶溶液萃取3-4次，，在300-400r/min的轉速下萃取5-10min。如此每次萃取完成后，均進行離心分離，離心機轉速為4000-6000r/min，時間10-15min收集、合并離心上層清液，進行反萃取，下層萃余液用于制備胰脂肪酶。④反萃取將荷載胰蛋白酶的AOT-異辛烷反膠束置于萃取器中，在攪拌下加入等體積的反萃取液進行反萃取15-20min萃取液為0．。如此反萃取3次，每次萃取完成后，均進行離心分離，離心機轉速為4000-6000r/min,時間為15-20min。分別收集、合并離心上層清液和下層反萃取液，前者再生后可再次萃取胰蛋白酶。 在消化酶中，胰酶主要用于促進消化。廣西EDTA胰酶

胰酶細胞消化液(Trypsin-EDTASolution)含0.25%胰酶（Trypsin）、0.02%EDTA和酚紅,不含Ca2＋和Mg2＋。該消化液已用0.22μm濾膜過濾除菌,可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化,或者一些組織的消化。本胰酶細胞消化液具有方便快速的特點,通常室溫消化1分鐘左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。使用說明：貼壁細胞的消化：1、吸去培養(yǎng)液,用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。2、加入少量胰酶細胞消化液（含酚紅）,略蓋過細胞即可,室溫放置30秒至2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同。3、顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化,或者用***吹打細胞發(fā)現(xiàn)細胞剛好可以被吹打下來；此時吸除胰酶細胞消化液；加入含血清的完全細胞培養(yǎng)液,吹打下細胞,即可直接用于后續(xù)實驗。4、如果發(fā)現(xiàn)消化不足,則加入胰酶細胞消化液重新消化。5、如果發(fā)現(xiàn)細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養(yǎng)器皿底部脫落,直接用胰酶細胞培養(yǎng)液把細胞全部吹打下來。1000-2000g離心1分鐘,沉淀細胞,盡量去除胰酶細胞消化液后,加入含血清的完全培養(yǎng)液重新懸浮細胞,即可用于后續(xù)實驗。河南重組胰酶進口胰酶在細胞培養(yǎng)中的作用和在消化酶中的作用？

胰蛋白酶的作用是使細胞間的蛋白質水解從而使細胞離散。不同的組織或者細胞對胰酶的作用反應不一樣胰酶分散細胞的活性還與其濃度、溫度和作用時間有關，在pH為8.0、溫度為37°℃時，胰酶溶液的作用能力**強。使用胰酶時，應把握好濃度、溫度和時間，以免消化過度造成細胞損傷。因Ca2+、Mg2+和血清、蛋白質可降低胰酶的活性，所以配制胰酶溶液時應選用不含Ca2+、Mg2+的BSS，如:D-Hanks液。終止消化時，可用含有血清培養(yǎng)液或者胰酶抑制劑終止胰酶對細胞的作用。

細胞傳代消化時所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑、物理法和冷凍法。其中**常用的是酶消化法。酶消化法：貼壁干細胞酶消化傳代時通常采用兩種方式：1、加入胰酶等干細胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；2、加入胰酶后，鏡下觀察待干細胞開始脫落時，棄去胰酶，加入培養(yǎng)液并分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對干細胞施加胰酶選擇，因為總是貼壁不牢的干細胞先脫落。消化同種細胞時含EDTA的胰酶消化時間會比不含EDTA時間短。

細胞傳代消化時所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑)，半貼壁細胞或者對胰酶敏感的細胞，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進行細胞消化。由于細胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性，常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細胞貼壁不是非常緊密，也可用不含有螯合劑的胰酶進行細胞消化。胰酶對細胞膜上粘附蛋白的損害比較大，如果進行細胞膜上蛋白的研究，建議選擇溫和的細胞消化試劑，盡量減少對細胞膜上蛋白的損傷。此外，由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會自己剪切自己,建議胰酶不要反復凍融，拿到手中的大瓶胰酶進行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA)。胰蛋白酶屬于其中一種活性成分，主要用于促進消化吸收。廣西EDTA胰酶

消化使用的胰酶是含EDTA還是不含的？廣西EDTA胰酶

    (不含EDTA含酚紅)性質、用途與生產工藝背景胰酶又名胰醇素、胰液素。白色或淡黃色無定形粉末。系從各種動物胰臟制取的混合物，主要是蛋白酶、脂酶、淀粉酶。溶于水呈微渾溶液。不溶于醇、醚。有引濕性，遇酸、堿及熱即喪失活力，水溶液遇酸、熱、重金屬或單寧酸時產生沉淀。為助消化藥，用于缺乏胰液的***癥。也用于皮革工業(yè)和紡織印染，主要用于酶法脫毛。將絞碎的豬胰漿經***、提取、沉淀、脫脂、干燥、粉碎而得。簡介(不含EDTA含酚紅)為細胞培養(yǎng)基，1.不含EDTA含酚紅：含酚紅，（1：250）溶于HBSS溶液，不含鈣鎂。-20℃保存。胰(不含EDTA含酚紅)含，不含EDTA和酚紅，溶于無鈣鎂平衡鹽溶液中，經過濾除菌，可以直接用于培養(yǎng)細胞和組織的消化，通常室溫消化2分鐘左右就消化下大多數(shù)貼壁細胞。使用方法(不含EDTA含酚紅)使用說明---貼壁細胞Chemicalbook的消化：a)吸去培養(yǎng)液，用無菌的PBS、Hanks液或無血清培養(yǎng)液洗滌細胞一次，以去除殘余的血清。b)加入少量胰蛋白酶消化液，蓋過細胞即可，室溫放置1-2分鐘。不同的細胞消化時間有所不同，對于貼壁牢固的細胞可適當延長消化時間。c)顯微鏡下觀察，細胞明顯收縮，并且肉眼觀察培養(yǎng)器皿底部發(fā)現(xiàn)細胞的形態(tài)發(fā)生明顯的變化。 廣西EDTA胰酶