在253nm的波長處測定吸光度，必要時可用上述底物原液或磷酸鹽緩沖液調(diào)節(jié)，使吸光度在～，作為底物溶液。制成后應在2小時內(nèi)使用。供試品溶液的制備精密稱取本品適量，加～60胰蛋白酶單位的溶液。測定法取底物溶液，加μl，混勻，作為空白。另取供試品溶液200μl，加底物溶液（恒溫于℃±℃），立即計時，混勻，使比色池內(nèi)的溫度保持在25℃±℃，照紫外－可見分光光度法（2010年版*典二部附錄ⅣA），在253nm的波長處，每隔30秒鐘讀取吸光度，共5分鐘。以吸光度為縱坐標，時間為橫坐標，作圖；每30秒鐘吸光度的改變應恒定在～，呈線性關系的時間不得少于3分鐘。若不符合上述要求，應調(diào)整供試品溶液的濃度，再作測定。在上述吸光度對時間的關系圖中，取成直線部分的吸光度，按下式計算：式中P為每1mg供試品中含胰蛋白酶的量，單位；A1為直線上終止的吸光度；A2為直線上開始的吸光度；T為A1至A2讀數(shù)的時間，分；W為測定液中含供試品的量，mg；，吸光度每分鐘改變，即相當于1個胰蛋白酶單位。胰蛋白酶制劑注射用胰蛋白酶[3]胰蛋白酶胰蛋白酶的醫(yī)學檢查胰蛋白酶檢查名稱胰蛋白酶胰蛋白酶分類血液生化檢查>酶類測定胰蛋白酶胰蛋白酶的測定原理同酶速率法測定。EDTA是一種化學螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細胞分離。中國香港國產(chǎn)胰酶哪個好

胰蛋白酶(Trypsin)是由胰臟產(chǎn)生沒有活性的胰蛋白酶原分泌到小腸后，小腸內(nèi)的腸肽酶會活化該酶原，形成胰蛋白酶。胰蛋白酶的特點在于已經(jīng)活化的胰蛋白酶，能夠繼續(xù)活化更多胰蛋白酶原，這種過程即自動催化。胰蛋白酶在小腸工作，它會將蛋白質(zhì)水解為肽進而分解為氨基酸，其**適溫度約為 37°℃。Trypsin solution(2.5%)由 2.5%胰酶組成，不含 EDTA，經(jīng)過濾除菌。本試劑可以直接用于培養(yǎng)細胞的消化，或者一些組織的消化，通常室溫下 1min 左右就可以消化下大多數(shù)貼壁細胞。該溶液濃度較高，可以稀釋到相應濃度后使用。中國香港國產(chǎn)胰酶哪個好胰酶用0.05%還是0.25%的？需不需要含酚紅的？

細胞傳代消化時所用胰酶的濃度越高是越好 貼壁細胞的消化：  常用的消化方法主要有酶消化法、離子螯合劑、物理法和冷凍法。其中**常用的是酶消化法。酶消化法：貼壁干細胞酶消化傳代時通常采用兩種方式：1、加入胰酶等干細胞脫落后，再加培養(yǎng)基中止胰酶作用，離心傳代；2、加入胰酶后，鏡下觀察待干細胞開始脫落時，棄去胰酶，加入培養(yǎng)液并分瓶。但前者太麻煩，而后者有可能對干細胞施加胰酶選擇，因為總是貼壁不牢的干細胞先脫落。

0.25%胰酶和加了EDTA胰酶區(qū)別是什么詳細說明

細胞之間是通過CAM（細胞粘性分子）相連的，而很多粘性分子只有在有+2價金屬離子，如Ca2+,Mg2+，的存在下才能行使這種功能。EDTA是鈣離子的鰲合劑，在胰酶中加入EDTA的作用簡單的說就是為了增加胰酶的消化作用，尤其適用于比較難于消化的細胞；同時可以減少胰消化時間，以減少酶對細胞的損傷作用。加入EDTA的消化反應不能通過加入培養(yǎng)液終止，必須離心才能去除EDTA，所以要掌握好消化時間。 胰蛋白酶可以用于原代細胞的傳代過程中分散組織。

    胰酶消化液(TrypsinSolution)操作步驟(一)獲得目的基因1、通過PCR方法:以含目的基因的克隆質(zhì)粒為模板,按基因序列設計一對引物(在上游和下游引物分別引入不同的酶切位點),PCR循環(huán)獲得所需基因片段。2、通過RT-PCR方法:用TRIzol法從細胞或組織中提取總RNA,以mRNA為模板,逆轉(zhuǎn)錄形成cDNA***鏈,以逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板進行PCR循環(huán)獲得產(chǎn)物。(二)構(gòu)建重組表達載體1、胰酶消化液(TrypsinSolution)載體酶切:將表達質(zhì)粒用限制性內(nèi)切酶(同引物的酶切位點)進行雙酶切,酶切產(chǎn)物行瓊脂糖電泳后,用膠回收Kit或凍融法回收載體大片段。2、PCR產(chǎn)物雙酶切后回收,在T4DNA連接酶作用下連接入載體。(三)獲得含重組表達質(zhì)粒的表達菌種1、將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5α,根據(jù)重組載體的標志(抗Amp或藍白斑)作篩選,挑取單斑,堿裂解法小量抽提質(zhì)粒,雙酶切初步鑒定。2、測序驗證目的基因的插入方向及閱讀框架均正確,進入下步操作。否則應篩選更多克隆,重復亞克隆或亞克隆至不同酶切位點。3、以此重組質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)化表達宿主菌的感受態(tài)細胞。(四)誘導表達1、胰酶消化液(TrypsinSolution)挑取含重組質(zhì)粒的菌體單斑至2mlLB(含Amp50μg/ml)中37℃過夜培養(yǎng)。2、按1∶50比例稀釋過夜菌。 淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？甘肅國產(chǎn)胰酶價格信息

胰酶細胞消化液(不含EDTA)消化細胞時間不宜過長,否則細胞鋪板后生長狀況會較差。中國香港國產(chǎn)胰酶哪個好

    胰蛋白酶用法用量1.每次～5mg，用蒸餾水5～10ml溶解。2.一般應用：1次5000單位，每日1次肌注，用量酌情而定。為防止疼痛，可加適量普魯卡因。局部用*視情而定，可配成溶液制劑（～，微堿性時活性**強）、噴霧劑、粉劑、油膏等，用作體腔內(nèi)注射、患部注射、噴霧、濕敷、涂搽等。3.治蛇毒：取注射用結(jié)晶胰蛋白酶2000單位1～3支，加～（或注射用水）4～20ml稀釋，以牙痕為中心，在傷口周圍作浸潤注射，或在腫脹部位上方作環(huán)狀封閉1～2次。如病情需要可重復使用。若傷肢腫脹明顯，可于注射本品30分鐘后，切開傷口排毒減壓（嚴重出血者例外），也可在腫脹部位針刺排毒。如傷口已壞死、潰爛，可用其***胰蛋白酶注意事項1.不可作靜注。用前需作劃痕試驗，應注意可能產(chǎn)生過敏反應。2.吸取注射液后應另換針頭，以免注射時疼痛。3.外用時，可采用注射用制劑以緩沖液溶解，但必須在3小時內(nèi)用畢。胰蛋白酶不良反應：1．注射局部疼痛、硬結(jié)。2．本品可引起組胺釋放，產(chǎn)生全身反應，有寒戰(zhàn)、發(fā)熱、***、頭暈、胸痛、***、皮疹、血管神經(jīng)性水腫、呼吸困難、眼壓升高、白細胞減少等。癥狀輕時不影響繼續(xù)***，給予抗組胺*和對癥*物即可控制，嚴重時應即停*。3．本品偶可致過敏性休克。中國香港國產(chǎn)胰酶哪個好