做ELISA確定抗原**佳包被濃度，做方陣滴定具體怎么做呢？選擇好一份已知為陽性和陰性背景的標(biāo)本，將你的抗原用1*CBPH=*PBPH=（8個條件）后加入96孔板每孔100ul。（一般包被濃度100ng抗原或抗體/孔，**優(yōu)包被條件需進(jìn)行試驗選擇）4度過夜取出后甩干，加入20%NBS封閉每孔200ul。37度2h熱封，甩去后拍干即可。將你HRP或AP標(biāo)記的抗原或二抗用酶標(biāo)稀釋液進(jìn)行稀釋（倍比稀釋4個梯度）即可。棋盤滴定就是板酶交叉,同時帶上陽性、陰性通過試驗確定**佳P/N的包被搭配E的試驗2．抗原和抗體**佳工作濃度的確定?抗原抗體反應(yīng)要求在**適比例條件下進(jìn)行，ELISA反應(yīng)試劑多，其工作濃度不同對結(jié)果影響較大，因此必須對包被抗原(抗體)和酶標(biāo)抗體(抗原)進(jìn)行**佳工作濃度的滴定和選擇，以達(dá)到**佳的測定條件。?1）方陣(棋盤)滴定法選擇包被抗原的工作濃度用包被液將抗原作一系列稀釋。試述緩沖溶液在實驗中的作用？四川HBSS緩沖液有哪些

當(dāng)往某些溶液中加入一定量的酸和堿時，有阻礙溶液pH變化的作用，稱為緩沖作用，這樣的溶液叫做緩沖溶液。弱酸及其鹽的混合溶液（如HAc與NaAc），弱堿及其鹽的混合溶液（如NH3.H2O與NH4Cl）等都是緩沖溶液。由弱酸HA及其鹽NaA所組成的緩沖溶液對酸的緩沖作用，是由于溶液中存在足夠量的堿A-的緣故。當(dāng)向這種溶液中加入一定量的強酸時，H離子基本上被A-離子消耗：所以溶液的pH值幾乎不變；當(dāng)加入一定量強堿時，溶液中存在的弱酸HA消耗OH-離子而阻礙pH的變化。廣東HBSS緩沖液采購使用pH計可以更準(zhǔn)確地測量pH值的變化，判斷是否為緩沖溶液。

在前面提到，將等式同時取對數(shù)，并簡化就可以得到： 或者這就是Henderson-Hasselbalch方程。值得注意的是，式子中酸及其共軛堿的濃度都是平衡時的濃度，除了酸性過于強的情況下，由于同離子效應(yīng)的存在，一般都可用此式計算，根據(jù)此式可得出下列幾點結(jié)論：1 緩沖液的pH值與該酸的電離平衡常數(shù)Ka及鹽和酸的濃度有關(guān)。弱酸的pKa值衡定，但酸和鹽的比例不同時，就會得到不同的pH值。酸和鹽濃度相等時，溶液的pH值與PKa值相同。2 酸和鹽濃度等比例增減時，溶液的pH值不變。3 酸和鹽濃度相等時，緩沖液的緩沖效率為比較高，比例相差越大，緩沖效率越低，緩沖液的一般有效緩沖范圍為pH=pKa±1,pOH=pKb±1。 [1]

    Buffer組份濃度：137mMNaCl,mMKCl,10mMNa2HPO4,2mMKH2PO4配制量：1L配制方法：1.稱量下列試劑，置于1L燒杯中。2.向燒杯中加入約800ml的去離子水，充分?jǐn)嚢枞芙狻?.滴加濃鹽酸將pH值調(diào)節(jié)至，然后加入去離子水將溶液定容至1L。4.高溫高壓**后，室溫保存。注意：上述Buffer中無二價陽離子，如需要，可在配方中補充1mMCaCl2和mMMgCl2。10M醋酸銨組份濃度：10M醋酸銨配制量：100ml配制方法：1.稱量g醋酸銨置于100～200ml燒杯中，加入約30ml的去離子水?dāng)嚢枞芙狻?.加去離子水將溶液定容至100ml。3.使用mm濾膜過濾**。4.密封瓶口于室溫保存。注意：醋酸銨受熱易分解，所以不能高溫高壓**。Tris-HCl平衡苯酚配制方法：1.使用原料：大多數(shù)市售液化苯酚是清亮無色的，無需重蒸餾便可用于分子生物學(xué)實驗。但有些液化苯酚呈粉紅色或黃色，應(yīng)避免使用。同時也應(yīng)避免使用結(jié)晶苯酚，結(jié)晶苯酚必須在160℃對其進(jìn)行重蒸餾除去諸如醌等氧化產(chǎn)物，這些氧化產(chǎn)物可引起磷酸二酯鍵的斷裂或?qū)е翿NA和DNA的交聯(lián)等。因此，苯酚的質(zhì)量對DNA、RNA的提取極為重要，我們推薦使用高質(zhì)量的苯酚進(jìn)行分子生物學(xué)實驗。2.操作注意：苯酚腐蝕性極強，并可引起嚴(yán)重灼傷，操作時應(yīng)戴手套及防護(hù)鏡等。PBS緩沖液是一種常用的緩沖劑,用于調(diào)節(jié)pH值和保持溶液的穩(wěn)定性。

pH標(biāo)準(zhǔn)液如何正確使用及其主要作用（二）

pH標(biāo)準(zhǔn)液的主要作用是什么？  1、pH測量前標(biāo)定校準(zhǔn)pH計   2、用以檢定pH計的準(zhǔn)確性，將pH電極插入pH9.18溶液中，檢查儀器顯示值和標(biāo)準(zhǔn)溶液的pHs值是否一致；   3、在一般精度測量時檢查pH計是否需要重新標(biāo)定。pH計標(biāo)定并使用后也許會產(chǎn)生漂移或變化，因此在測試前將電極插入與被測溶液比較接近的標(biāo)準(zhǔn)緩沖液中，根據(jù)誤差大小確定是否需要重新標(biāo)定。   4、檢測pH電極的性能。 緩沖體系來抵抗在代謝過程中出現(xiàn)的pH變化.廣東HBSS緩沖液采購

緩沖液的濃度會影響其緩沖能力。四川HBSS緩沖液有哪些

    常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見的緩沖體系有：1、弱酸和它的鹽（如HAc---NaAc）2、弱堿和它的鹽（NH3·H2O---NH4Cl）3、多元弱酸的酸式鹽及其對應(yīng)的次級鹽（如NaH2PO4---Na2HPO4）的水溶液組成。而生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、巴比妥酸、Tris（三羥甲基氨基甲烷）等系統(tǒng)，生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系，因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值，而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥甲基甲烷等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學(xué)反應(yīng)。硼酸鹽：硼酸鹽與許多化合物形成復(fù)鹽、如蔗糖。檸檬酸鹽：檸檬酸鹽離子容易與鈣結(jié)合，所以存在有鈣離子的情況下不能使用。磷酸鹽：在有些實驗，它是酶的抑止劑或甚至是一個代謝物，重金屬易以磷酸鹽的形式從溶液中沉淀出來。而且它在。三羥甲基氨基甲烷：它可以和重金屬一起作用，但在有些系統(tǒng)中也起抑制作用。其主要缺點時溫度效應(yīng)。這點往往被忽視，在室溫pH是，4℃時是，37℃時是，因此，4℃配制的緩沖液在37℃進(jìn)行測量時，其氫離子濃度就增加了10倍。在，其緩沖能力極為不理想。 四川HBSS緩沖液有哪些