然而傳統(tǒng)的針對(duì)單一靶點(diǎn)的研究方法已經(jīng)難以適應(yīng)一些多基因疾病和病毒等相關(guān)藥物的研究。而基于細(xì)胞水平的高內(nèi)涵篩選(high content screening, HCS)技術(shù)實(shí)現(xiàn)了對(duì)化合物多靶點(diǎn)多參數(shù)的同時(shí)檢測(cè),從疾病相關(guān)基因調(diào)控通路和網(wǎng)絡(luò)水平上研究藥物的作用機(jī)制、代謝途徑和潛在毒性等,也使在細(xì)胞水平評(píng)價(jià)活性化合物的成成為可能。從篩選載體上看,HCS和HTS并沒(méi)有的區(qū)別,它的檢測(cè)體積并未因檢測(cè)指標(biāo)增加而增高,操作步驟同樣簡(jiǎn)單可行、可自動(dòng)化。故HCS在新藥研發(fā)中發(fā)揮越來(lái)越重要的作用。高通量篩選的主要目的是什么。寧夏高通量篩選奇數(shù)
熒光共振能量轉(zhuǎn)移(FRET)是指在兩個(gè)不同的熒光基團(tuán)中,如果一個(gè)熒光基團(tuán)(供體Donor)的發(fā)射光譜與另一個(gè)基團(tuán)(受體Acceptor)的吸收光譜有一定的重疊,當(dāng)這兩個(gè)熒光基團(tuán)間的距離合適時(shí),就可觀察到熒光能量由供體向受體轉(zhuǎn)移的現(xiàn)象,即以前一種基團(tuán)的激發(fā)波長(zhǎng)激發(fā)時(shí),可觀察到后一個(gè)基團(tuán)發(fā)射的熒光。常見(jiàn)的供體-受體對(duì)之間的有效距離通常為2-6nm,適用于許多蛋白質(zhì)相互作用。染料通常是有機(jī)分子,如與蛋白質(zhì)偶聯(lián)的熒光素和羅丹明,或與感興趣的蛋白質(zhì)融合的熒光蛋白。吉林霉菌高通量篩選高通量篩選是什么技術(shù)。
一種廣泛應(yīng)用的HTS技術(shù)是熒光各向異性(FA)/熒光偏振光(FP)。FA和FP方法實(shí)際上通過(guò)測(cè)量了染料所經(jīng)歷的旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間或翻滾時(shí)間的變化來(lái)表征分子量。在這些技術(shù)中,用偏振光激發(fā)熒光團(tuán),并用平行或垂直于入射光偏振的偏振器測(cè)量熒光發(fā)射。隨著時(shí)間的推移,染料標(biāo)記的分子下降,發(fā)射信號(hào)去極化。與大分子結(jié)合降低了熒光團(tuán)的遷移率,從而增加了極化或各向異性,并允許定量結(jié)合。根據(jù)所涉及的質(zhì)量,選擇染料的壽命以比較大化結(jié)合后的信號(hào)變化。熒光素和羅丹明等有機(jī)染料的壽命約為3-4ns,它們?cè)谶B接到分子量在0.5-10kDa范圍內(nèi)的生物分子時(shí)為敏感。
時(shí)間分辨熒光共振能量轉(zhuǎn)移(TR-FRET)原理為具有長(zhǎng)壽命熒光(通常為100秒的毫秒至毫秒)的鑭系配合物用作FRET供體,熒光蛋白或有機(jī)熒光團(tuán)(例如,別藻藍(lán)素或Cy5)用作受體。普通熒光的半衰期為納秒級(jí),鑭系元素的半衰期為毫秒級(jí),有6個(gè)數(shù)量級(jí)的差別。所以在檢測(cè)時(shí),TR-FRET有一個(gè)時(shí)間延遲~100微秒,從而使反應(yīng)體系內(nèi)普通背景熒光信號(hào)消耗掉,因此TR-FRET的背景信號(hào)非常低,能夠反映樣品實(shí)際情況?;诩?xì)胞水平的篩選的關(guān)鍵特征之一是可以一次篩選多個(gè)靶標(biāo)。基于細(xì)胞的篩選常用于以下情況下:1)所需的分子靶標(biāo)未知,2)靶標(biāo)無(wú)法在生化測(cè)定中充分重組,3)所需的表型只存在于細(xì)胞環(huán)境中,例如從一種細(xì)胞類(lèi)型分化到另一種細(xì)胞類(lèi)型?;诩?xì)胞的檢測(cè)貫穿于藥物發(fā)現(xiàn)的所有階段:靶標(biāo)選擇和驗(yàn)證、初步篩選、先導(dǎo)化合物識(shí)別、先導(dǎo)化合物優(yōu)化以及安全和毒理學(xué)篩選。介紹一些細(xì)胞水平分析的方法:細(xì)胞活力、報(bào)告基因、第二信使和高內(nèi)涵成像等。高通量篩選技術(shù)的優(yōu)點(diǎn)。
我國(guó)進(jìn)行藥物高通量篩選的優(yōu)勢(shì)首先是化合物來(lái)源,且多為天然;其次是對(duì)化合物生物活性的篩選目的較明確,無(wú)目的合成的化合物較少;第三,我國(guó)傳統(tǒng)藥物為篩選研究提供了一個(gè)巨大的資源庫(kù),可從中藥中提取分離篩選新的化合物。這些優(yōu)勢(shì)為藥物的高通量篩選打下了堅(jiān)實(shí)基礎(chǔ)。我國(guó)藥物高通量篩選初現(xiàn)規(guī)模:藥物高通量篩選工作在我國(guó)起步較晚,且不規(guī)范。近幾年,我國(guó)進(jìn)行了外引內(nèi)聯(lián)的整體化、規(guī)?;A(chǔ)建設(shè),已初見(jiàn)成效。1996年中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院引進(jìn)國(guó)內(nèi)臺(tái)Biomek2000型實(shí)驗(yàn)自動(dòng)化工作站;1998年又引進(jìn)臺(tái)Topcount微量閃爍計(jì)數(shù)器,使放射配基實(shí)驗(yàn)、放射免疫實(shí)驗(yàn)等技術(shù)微量化、自動(dòng)化。上海藥物研究所、北京醫(yī)學(xué)科學(xué)院分別成立了藥物篩選專(zhuān)門(mén)機(jī)構(gòu),開(kāi)始從事大規(guī)模篩選工作。高通量篩選技術(shù)的靶點(diǎn)是。寧夏高通量篩選奇數(shù)
高通量篩選藥物分析儀。寧夏高通量篩選奇數(shù)
高通量篩選的實(shí)驗(yàn)方法分子水平和細(xì)胞水平的實(shí)驗(yàn)方法(或稱(chēng)篩選模型)是實(shí)現(xiàn)藥物高通量篩選的技術(shù)基礎(chǔ)。由于藥物高通量篩選要求同時(shí)處理大量樣品,實(shí)驗(yàn)體系必須微量化,而這些微量化的實(shí)驗(yàn)方法應(yīng)根據(jù)新的科研成果來(lái)建立。第四軍醫(yī)大學(xué)周四元研究認(rèn)為,藥物高通量篩選模型的實(shí)驗(yàn)方法,根據(jù)其生物學(xué)特點(diǎn),可分為以下幾類(lèi):受體結(jié)合分析法;酶活性測(cè)定法;細(xì)胞分子測(cè)定法;細(xì)胞活性測(cè)定法;代謝物質(zhì)測(cè)定法;基因產(chǎn)物測(cè)定法。這些實(shí)驗(yàn)方法,均已用于藥物高通量篩選中。寧夏高通量篩選奇數(shù)
杭州環(huán)特生物科技股份有限公司是一家服務(wù)型類(lèi)企業(yè),積極探索行業(yè)發(fā)展,努力實(shí)現(xiàn)產(chǎn)品創(chuàng)新。環(huán)特生物是一家有限責(zé)任公司企業(yè),一直“以人為本,服務(wù)于社會(huì)”的經(jīng)營(yíng)理念;“誠(chéng)守信譽(yù),持續(xù)發(fā)展”的質(zhì)量方針。公司擁有專(zhuān)業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊(duì),具有斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn),功效安全評(píng)價(jià),生物檢測(cè)等多項(xiàng)業(yè)務(wù)。環(huán)特生物順應(yīng)時(shí)代發(fā)展和市場(chǎng)需求,通過(guò)**技術(shù),力圖保證高規(guī)格高質(zhì)量的斑馬魚(yú)實(shí)驗(yàn),動(dòng)物實(shí)驗(yàn),功效安全評(píng)價(jià),生物檢測(cè)。