RNA電穿孔高效轉(zhuǎn)染原代淋巴細(xì)胞：使用體外轉(zhuǎn)錄的mRNA通過電穿孔可以實(shí)現(xiàn)高基因轉(zhuǎn)染效率和低轉(zhuǎn)染相關(guān)毒性。例如，在用GFP或mCD62L轉(zhuǎn)染的受激原代人和鼠T淋巴細(xì)胞中觀察到90％以上的轉(zhuǎn)基因表達(dá)和80％以上的活細(xì)胞。GFPRNA對未刺激的人PBMC或鼠脾細(xì)胞進(jìn)行電穿孔，分別產(chǎn)生95％和56％的GFP?細(xì)胞。此外，基因表達(dá)迅速且持久，對經(jīng)過RNA電穿孔的T淋巴細(xì)胞未觀察到不良影響7。五、優(yōu)化共轉(zhuǎn)染方法整合共轉(zhuǎn)染和平行共轉(zhuǎn)染：研究不同的共轉(zhuǎn)染和連續(xù)轉(zhuǎn)染方法，特別是體外轉(zhuǎn)錄信使RNA（IVTmRNA）。對于在納米載體形成之前預(yù)混合的IVTmRNAs（整合共轉(zhuǎn)染）和同時用單獨(dú)形成的納米載體轉(zhuǎn)染細(xì)胞（平行共轉(zhuǎn)染），分析決定共轉(zhuǎn)染效率的定量參數(shù)。同時遞送siRNA和mRNA也表明整合方法的比較高共轉(zhuǎn)染效率，但由于兩個**運(yùn)營實(shí)體的峰值輸出在動力學(xué)上不同，連續(xù)交付的效率比較高。人類原代干細(xì)胞是另一種公認(rèn)的難以轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染這種細(xì)胞類型的挑戰(zhàn)仍然是效率低和細(xì)胞活力低。上海神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

對于容易轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞如人胚腎細(xì)胞（HEK293）和人宮頸*細(xì)胞（HeLa），脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染效率相對較高。這些細(xì)胞具有較強(qiáng)的內(nèi)吞能力，能夠有效地攝取脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物。例如，在標(biāo)準(zhǔn)的轉(zhuǎn)染條件下，HEK293細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可以達(dá)到50%-70%。而對于一些難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，如原代肝細(xì)胞和某些神經(jīng)細(xì)胞，其轉(zhuǎn)染效率較低。這是因為它們的細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)比較復(fù)雜，可能存在較厚的糖萼或者緊密的細(xì)胞間連接，阻礙了脂質(zhì)體-核酸復(fù)合物的進(jìn)入。例如，原代肝細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率可能只有10%-20%。

一般來說，貼壁細(xì)胞對脂質(zhì)體的耐受性相對較好。但是，在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的情況下，即使是耐受性好的細(xì)胞也會受到影響。例如，HeLa細(xì)胞在高濃度脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染時，可能會出現(xiàn)細(xì)胞膜完整性受損，表現(xiàn)為細(xì)胞內(nèi)乳酸脫氫酶（LDH）釋放增加，細(xì)胞的代謝活動也會受到一定程度的干擾。對于難轉(zhuǎn)染的貼壁細(xì)胞，由于其本身比較脆弱，較低濃度的脂質(zhì)體也可能產(chǎn)生明顯的細(xì)胞毒性。比如原代神經(jīng)細(xì)胞，脂質(zhì)體可能會破壞其精細(xì)的神經(jīng)突起結(jié)構(gòu)，影響細(xì)胞的正常生理功能。 安徽長沙轉(zhuǎn)染試劑陽離子 RNA 轉(zhuǎn)染試劑在結(jié)合 RNA 分子機(jī)制上存在多種差異。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的將外源基因?qū)爰?xì)胞的方法，脂質(zhì)體大?。褐|(zhì)體的大小也可能影響轉(zhuǎn)染效率。較小的脂質(zhì)體可能更容易進(jìn)入細(xì)胞，但可能攜帶的 DNA 量較少。較大的脂質(zhì)體可能攜帶更多的 DNA，但可能更難進(jìn)入細(xì)胞。研究發(fā)現(xiàn)，陽離子脂質(zhì)體的大小與轉(zhuǎn)染效率之間存在一定的關(guān)系。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加，轉(zhuǎn)染的主要途徑可能從網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞作用轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷?dǎo)的內(nèi)吞作用，同時也可能觀察到巨胞飲作用。這種變化可能會影響脂質(zhì)體在細(xì)胞內(nèi)的運(yùn)輸和釋放，從而影響轉(zhuǎn)染效率。

在重組蛋白生產(chǎn)中的應(yīng)用聚（β-氨基酯）（PBAEs）作為一類陽離子聚合物，與常用的線性25kDa聚乙烯亞胺（PEI）相比，在重組蛋白生產(chǎn)中表現(xiàn)出了優(yōu)勢。在人類胚胎腎293F（HEK）和中國倉鼠卵巢-S（CHO）細(xì)胞懸浮液中，幾種PBAEs在轉(zhuǎn)染效率和增強(qiáng)胞質(zhì)報告基因的產(chǎn)生方面優(yōu)于線性25kDaPEI1。對于分泌蛋白，一種模型PBAE在20至2000毫升的培養(yǎng)規(guī)模下，與線性25kDaPEI相比，增加了三種不同分泌抗體的產(chǎn)生。這表明PBAEs可作為有吸引力的試劑用于重組蛋白生產(chǎn)，因為它們提高了轉(zhuǎn)染效率并增加了蛋白質(zhì)產(chǎn)量。用二乙基氨基乙基修飾，右旋糖酐鏈的酰胺化很容易被質(zhì)子化，這使得它可以自組裝成帶負(fù)電荷核酸的納米顆粒。

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染是一種常用的基因轉(zhuǎn)染方法，不同類型的細(xì)胞在脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染過程中會表現(xiàn)出不同的特性和差異。以下是對脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染對不同類型細(xì)胞影響差異的詳細(xì)分析：

一、轉(zhuǎn)染效率的差異宮頸*細(xì)胞：對于Hela細(xì)胞和Siha細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞接種密度為每24孔板的每孔1.5×10?個細(xì)胞，miRNA量為1μl，Hela細(xì)胞中miRNA與脂質(zhì)體比例為1:0.5，Siha細(xì)胞中為1:0.7時，24小時后可獲得比較高轉(zhuǎn)染效率1。與含血清的培養(yǎng)基相比，只有Siha細(xì)胞在無血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)時，在轉(zhuǎn)染前能獲得更高的轉(zhuǎn)染效率（P＜0.01）1。PC12細(xì)胞：lipo2000轉(zhuǎn)染PC12細(xì)胞的比較好轉(zhuǎn)染條件為lipo2000用量為5μL，DNA2μg，轉(zhuǎn)染時間為6h，這種條件下的PC12細(xì)胞轉(zhuǎn)染率高達(dá)40%，且未影響細(xì)胞的正常分泌3。HepG2細(xì)胞：陽離子脂質(zhì)體的擴(kuò)散系數(shù)在lipoplex形成過程中與lipoplex的物理化學(xué)特性、lipoplex中質(zhì)粒DNA的可及性以及每代謝活性的基因表達(dá)對數(shù)密切相關(guān)2。隨著脂質(zhì)體尺寸的增加，主要的內(nèi)吞途徑從網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞轉(zhuǎn)變?yōu)橹そ閷?dǎo)的內(nèi)吞，此外，所有脂質(zhì)體尺寸均觀察到巨胞飲作用2。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞：脂質(zhì)體介導(dǎo)的CD基因在鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中成功表達(dá)，于轉(zhuǎn)染48h后達(dá)峰值5。

選擇合適的轉(zhuǎn)染試劑可能取決于幾個因素，包括轉(zhuǎn)染核酸的類型和轉(zhuǎn)染的復(fù)雜性(單轉(zhuǎn)染或共轉(zhuǎn)染)。上海神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

為了在體外和體內(nèi)可重復(fù)地傳遞基因和siRNA，含有核酸的脂質(zhì)體、脂叢和多叢的配方需要精確組成轉(zhuǎn)染試劑。上海神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑

RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中的轉(zhuǎn)染機(jī)制存在多種差異。以下將詳細(xì)闡述不同RNA轉(zhuǎn)染試劑在不同細(xì)胞類型中轉(zhuǎn)染機(jī)制的差異表現(xiàn)。脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑：機(jī)制概述：脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑通常由陽離子脂質(zhì)和中性脂質(zhì)組成，其轉(zhuǎn)染機(jī)制主要是通過與帶負(fù)電的RNA分子結(jié)合，形成脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物。這個復(fù)合物能夠與細(xì)胞膜相互作用，通過內(nèi)吞作用或膜融合等方式進(jìn)入細(xì)胞。進(jìn)入細(xì)胞后，脂質(zhì)體-RNA復(fù)合物逐漸釋放RNA分子，使其能夠在細(xì)胞內(nèi)發(fā)揮作用。在不同細(xì)胞類型中的表現(xiàn)：在腎*細(xì)胞系786-O和ACHN中，目前雖未明確提及脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑的作用，但可以推測其可能通過類似的機(jī)制進(jìn)入細(xì)胞，影響細(xì)胞內(nèi)的基因表達(dá)和細(xì)胞生長。例如，微小RNA-1180（miR-1180）轉(zhuǎn)染對腎*細(xì)胞生長產(chǎn)生影響，雖然未明確指出轉(zhuǎn)染試劑類型，但脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑可能在類似的研究中發(fā)揮作用1。在MEF細(xì)胞、3T3細(xì)胞、Hela細(xì)胞及MCF-7細(xì)胞中，MessageMax脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑能將modGFP高效轉(zhuǎn)染入細(xì)胞，并實(shí)現(xiàn)modGFP和modmCherry在MEF細(xì)胞中的共轉(zhuǎn)及核內(nèi)因子nGFP和mTBX5在MEF細(xì)胞核中的定位。這表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑在不同類型的細(xì)胞中能夠有效地將RNA分子轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞內(nèi)，并實(shí)現(xiàn)特定蛋白的表達(dá)。上海神經(jīng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑