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單分子陣列數(shù)字ELISA極速

來源: 發(fā)布時(shí)間:2024-12-22

創(chuàng)新性的解決方案:芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA

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光纖束購自SchottNorthAmericaouthbri,非增強(qiáng)型光澤硅片購自SpecialtyManufacturing(Saginaw,NatBiotechnol.作者手稿;可在PMC2010年12月1日獲得。Rissin等人,第7頁鹽酸、無水乙醇和分子生物學(xué)級(jí)別的吐溫-20均購自西格瑪-奧德里奇(圣路易斯,密蘇里州)。2.7-μm-二羧基磁珠購自瓦里安公司(加利福尼亞州萊克福斯特)。單克隆抗人TNF-α捕獲抗體、多克隆抗人TNF-α檢測試劑和重組人TNF-α均購自R&DSystems(Minneapolis,MN)。單克隆抗PSA捕獲抗體、單克隆抗PSA檢測試劑和純化的PSA購自BiosPacific(埃默里維爾,加利福尼亞州);使用標(biāo)準(zhǔn)方法將檢測試劑抗體生物素化。1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)、N-羥基磺基琥珀酰亞胺(NHS)和SuperBlock®T-20封閉緩沖液購自ThermoScientific(Rockford,IL)。純化DNA購自綜合DNA技術(shù)公司(Coralville,IA)。 芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA,極速檢測,檢測用時(shí)只需要 15-30min!單分子陣列數(shù)字ELISA極速

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    芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA產(chǎn)品每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測我們的方法利用了亞飛克爾反應(yīng)室陣列(圖1C)我們稱之為單分子陣列(SiMoA)——可以分離和檢測單個(gè)酶分子20-24。這種方法借鑒了Walt等人20-23的工作陣列用于研究單個(gè)酶的動(dòng)力學(xué)和抑制作用。我們的目標(biāo)是利用捕獲和檢測單個(gè)酶的能力來檢測用酶標(biāo)記的單個(gè)蛋白質(zhì)分子。在這個(gè)單分子免疫測定的第一步(圖1A),在微球(直徑μm)上形成一個(gè)三明治抗體復(fù)合物,結(jié)合的復(fù)合物用酶標(biāo)記,如同常規(guī)的基于微球的ELISA。當(dāng)測定含有極低濃度蛋白質(zhì)的樣品,蛋白質(zhì)的比值分子(以及由此產(chǎn)生的酶標(biāo)記復(fù)合物)與微球的比例很?。ㄍǔP∮?:1),因此含有標(biāo)記免疫復(fù)合物的微球百分比遵循泊松分布,導(dǎo)致單個(gè)微球上存在單一免疫復(fù)合物。例如,如果在(3000個(gè)分子)的蛋白質(zhì)中捕獲并標(biāo)記了50μM的蛋白質(zhì),并且在200,000個(gè)微球上進(jìn)行標(biāo)記,則珠子,然后,。無法檢測到這些低數(shù)量的酶使用標(biāo)準(zhǔn)檢測技術(shù)(例如,平板閱讀器)的標(biāo)簽,因?yàn)闊晒馊玖嫌擅糠N酶生成的產(chǎn)物擴(kuò)散到一個(gè)大卵試驗(yàn)體積(通常為),并進(jìn)入其中需要數(shù)十萬種酶標(biāo)簽才能產(chǎn)生高于該水平的熒光信號(hào)背景。 單分子陣列數(shù)字ELISA使用速度單分子POCT產(chǎn)品-數(shù)字化ELISA芯片,幫您數(shù)字化高靈敏檢測,且微量樣本多重指標(biāo)檢測;

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芯棄疾JX-8B數(shù)字化高靈敏ELISA芯片檢測產(chǎn)品;應(yīng)用范圍:各種高靈敏多重免疫檢測,可替代各種ELISA試劑盒,及其他免疫檢測產(chǎn)品。生物實(shí)驗(yàn)室、醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室常見問題:多指標(biāo)(如細(xì)胞因子)要檢測多次;常規(guī)檢測方法(ELISA、化學(xué)發(fā)光)等,不能進(jìn)行多重檢測;同一個(gè)樣本要測試多個(gè)指標(biāo),就得測試多次,即增加成本、時(shí)間,也浪費(fèi)了樣本和試劑。
芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA高敏檢測產(chǎn)品;先進(jìn)新型的單分子檢測方法的普及版;每個(gè)生物/醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測;使用現(xiàn)有平臺(tái)就能做的單分子免疫檢測;

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將200,000個(gè)功能化DNA捕獲探針與100μL孵育含有目標(biāo)DNA的溶液(5‘-TTGACGGCGAAGACCTGGATGTATTGCTCCTCTGAACGGTAGCATCTTGACAAC-3‘孵育2小時(shí)后,移除DNA靶標(biāo)溶液,用0.2×SSC緩沖液洗滌珠子三次含有0.1%Tween-20的微球重新懸浮并與10nM混合生物素標(biāo)記的信號(hào)探針(5‘-TACATCCAGGTCTTCGCCGTCAA/生物素/-3’)對(duì)目標(biāo)DNA具有特異性,孵育1小時(shí)。然后將珠子在去除信號(hào)探針后用含0.1%吐溫-20的0.2×SSC緩沖液洗滌三次。隨后向珠子沉淀中加入10pMS阝G溶液,混勻并混合1小時(shí)。然后將珠子分離并在含0.1%吐溫-20的5×PBS緩沖液中洗滌六次。重懸于10μLofPBS中并加載到飛升微升孔陣列上。 芯棄疾JX-8B單分子小型化ELISA檢測產(chǎn)品,每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都能用的單分子檢測;

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每個(gè)生物實(shí)驗(yàn)室都用得起的單分子免疫檢測

珠子以兩種不同的方式讀出。首先,在與100μMresorufin-阝-D孵育1小時(shí)后,用熒光板讀出器以100μL方式讀出珠子結(jié)合-半乳糖苷(RGP),一種熒光底物for阝-半乳糖苷酶。在平板閱讀器上,檢測限為15fMofS阝G(圖2)。其次,將珠子加載然后將RGP溶液密封到陣列的孔中,單個(gè)酶的信號(hào)被允許在反應(yīng)室中積累,并每30秒獲取一次熒光圖像。實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)獲取陣列的白光圖像以識(shí)別含有珠子的孔(含有珠子的孔散射光與空井不同)。熒光圖像用于確定哪些微球具有相關(guān)的結(jié)合酶(從時(shí)間變化的熒光圖像中強(qiáng)度增加)。圖2顯示了微球中含酶的比例與總體S阝G濃度的關(guān)系的對(duì)數(shù)-對(duì)數(shù)圖。檢測到的比較低酶偶聯(lián)物濃度為350飛摩爾(zM),并通過外推信號(hào)等于的酶濃度計(jì)算得出的檢測限(LOD)。 芯棄疾JX-8B單分子ELISA檢測產(chǎn)品,微量樣本可同時(shí)測2-4個(gè)指標(biāo);!單分子技術(shù)數(shù)字ELISA穩(wěn)定性

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芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA:芯棄疾JX-8B數(shù)字ELISA  具有超敏的優(yōu)勢:

超敏:芯棄疾.數(shù)字ELISA,與Simoa同樣的檢測方案,將檢測結(jié)果二維化,使用成像方式,可精確量檢測區(qū)多少個(gè)微球載體上發(fā)生免疫反應(yīng),具有陽性熒光信號(hào),理論可達(dá)fg級(jí);使用常規(guī)ELISA試劑,測試IL-6等演示指標(biāo),也可輕松達(dá)到亞pg級(jí)(0.2-0.5pg/mL);使用顯微圖像處理方法,得到數(shù)萬個(gè)磁珠中,陽性的個(gè)數(shù)和亮度,建立標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到待測指標(biāo)的濃度。極低濃度時(shí),檢測信息為數(shù)字化信號(hào),有效提高檢測靈敏度到0.2 pg/ml級(jí); 單分子陣列數(shù)字ELISA極速

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