細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎？如何處理？一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成，首先，要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長(zhǎng)的狀態(tài)，黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染，微生物則會(huì)大量繁殖，培養(yǎng)基就會(huì)迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞，生長(zhǎng)狀態(tài)良好，與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比，沒(méi)有任何變化，那么，黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān)：細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)老，破碎的細(xì)胞殘骸；血清質(zhì)量不好，反復(fù)凍融的結(jié)果；配制培養(yǎng)基的pH值偏高，不宜細(xì)胞生長(zhǎng)；配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格。可應(yīng)用離心、過(guò)濾的方法去除這些黑點(diǎn)；培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn)，可能是原代組織中的雜質(zhì)，多次傳代可以消除。血清的主要作用是提供促接觸和生長(zhǎng)因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷、對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。武漢進(jìn)口血清供應(yīng)商

胎牛血清：八月齡胎牛心臟穿刺取血；新生牛血清：出生12-24小時(shí)新生牛靜脈;又可細(xì)分為：a.高級(jí)新生牛血清：后靜置自然析出的血清;b.標(biāo)準(zhǔn)新生牛血清：c.經(jīng)離心分離的血清;d.普通新生牛血清：融血或微融血的血清；小牛血清：出生三月齡小牛動(dòng)脈分離血清；血清是血漿去除纖維蛋白而形成的一種很復(fù)雜的混合物，其組成成份雖大部分已知，但還有一部分尚不清楚，且血清組成及含量常隨供血?jiǎng)游锏男詣e、年齡、生理?xiàng)l件和營(yíng)養(yǎng)條件不同而異。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長(zhǎng)因子、、無(wú)機(jī)物等，這些物質(zhì)對(duì)促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)或抑制生長(zhǎng)活性是達(dá)到生理平衡的。對(duì)血清的成分和作用的研究雖有很大進(jìn)展，但仍存在一些問(wèn)題。胎牛血清是品質(zhì)較為高的，因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分較為少。武漢進(jìn)口血清供應(yīng)商將血清從冷凍箱取出后，先置于2-8℃冰箱使之溶解，然后在室溫下使之全溶。

非正規(guī)胎牛血清的產(chǎn)品會(huì)存在很多的問(wèn)題：疫區(qū)來(lái)源，無(wú)合格質(zhì)檢使胎牛血清存在生物學(xué)污染：支原體、噬菌體、病毒、原蟲(chóng)等，會(huì)直接影響實(shí)驗(yàn)的結(jié)果和穩(wěn)定。工藝不規(guī)范，導(dǎo)致采集的原血放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)或操作不當(dāng)導(dǎo)致溶血，血液中血細(xì)胞裂解，血清顏色呈紅色或暗紅色，這樣的血清含有許多胞內(nèi)產(chǎn)物，里面很多物質(zhì)都會(huì)對(duì)細(xì)胞有刺激作用，影響實(shí)驗(yàn)的穩(wěn)定性和數(shù)據(jù)的真實(shí)性。血清批次不穩(wěn)定，添加來(lái)補(bǔ)？很多不法商販拿到低廉的疫區(qū)原料血清進(jìn)行加工生產(chǎn)，為了保障血清的培養(yǎng)效果會(huì)對(duì)血清進(jìn)行處理，較為常見(jiàn)的是添加、轉(zhuǎn)鐵蛋白、BSA、生長(zhǎng)因子等，還有的會(huì)和新生牛血清、培養(yǎng)基等勾兌，更有甚者用的根本就不是牛血清，此類(lèi)操作對(duì)所有生物學(xué)實(shí)驗(yàn)都有巨大的影響。

血清的安全風(fēng)險(xiǎn)因素主要有以下方面：地理因素，地理因素包括血清產(chǎn)地的流行病學(xué)趨勢(shì)、基礎(chǔ)設(shè)施情況以及血源供應(yīng)量。措施得當(dāng)可以預(yù)防能避免的動(dòng)物疾病，同時(shí)產(chǎn)地國(guó)穩(wěn)定可靠的基礎(chǔ)設(shè)施，對(duì)保證供應(yīng)鏈的安全也十分必要。血源是否充足則決定了血清是否可源源不斷地持續(xù)供應(yīng)。生產(chǎn)，生產(chǎn)遵循cGMP指南，則可保證血清質(zhì)量，降低有關(guān)無(wú)菌過(guò)濾、摻加和標(biāo)簽錯(cuò)誤的風(fēng)險(xiǎn)。cGMP為現(xiàn)場(chǎng)審核的開(kāi)展提供了框架。生產(chǎn)過(guò)程中對(duì)血清進(jìn)行有效的無(wú)菌過(guò)濾也是十分重要的。產(chǎn)品質(zhì)控，有效的無(wú)菌過(guò)濾使得細(xì)菌污染的風(fēng)險(xiǎn)很低。對(duì)于支原體和病毒篩查，一些相關(guān)規(guī)范內(nèi)部存在一定的方法靈活性，這使得采取不同方法進(jìn)行支原體和病毒篩查成為可能，并且有時(shí)使得要篩查的病毒種類(lèi)無(wú)需太多。有效輻照，要進(jìn)一步降低外源因子風(fēng)險(xiǎn)，可對(duì)血清進(jìn)行輻照(25–40 kGy)。但輻照并不能保證病毒污染的完全去除。輻照過(guò)量會(huì)導(dǎo)致FBS效能下降。新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛。

胎牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)重要的培養(yǎng)基且不可替代，它是采自5-8個(gè)月胎齡牛胚胎中的胎血。此時(shí)胎牛各臟器正處生長(zhǎng)分化階段，血中含有豐富的生長(zhǎng)發(fā)育因子，非常適合各種細(xì)胞的培養(yǎng)。因此，如何在使用過(guò)程中保護(hù)這些因子的活性，達(dá)到較為大的細(xì)胞培養(yǎng)效果，就需要正確地使用胎牛血清。正確地使用胎牛血清可分為以下四個(gè)方面：正確儲(chǔ)存，避免反復(fù)凍融：血清在-20°C凍存。血清避免反復(fù)凍融，以免降低因子活性。如一次用不完，應(yīng)進(jìn)行分裝。血清和培養(yǎng)基應(yīng)盡可能“現(xiàn)用現(xiàn)配”，配好的培養(yǎng)液，應(yīng)于一周內(nèi)用完。血清避免在4°C或更高溫度靜置過(guò)久，否則會(huì)破壞血清中有效活性成分，影響血清品質(zhì)。胎牛血清的細(xì)菌內(nèi)有毒的 ≤5（EU/ml）；牛腹瀉病毒：陰性；大腸桿菌噬菌體：陰性。武漢進(jìn)口血清供應(yīng)商

血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x醫(yī)治中起重要作用。武漢進(jìn)口血清供應(yīng)商

血清為何要熱滅活，有必要對(duì)所有血清都滅活嗎？如何正確的進(jìn)行滅活？加熱可以滅活補(bǔ)體系統(tǒng)。啟動(dòng)的補(bǔ)體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件，刺激平滑肌收縮，細(xì)胞和血小板釋放組胺，啟動(dòng)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中，培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲(chóng)細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時(shí)，推薦使用熱滅清。實(shí)驗(yàn)顯示，熱滅清對(duì)大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的，對(duì)于非必須的細(xì)胞來(lái)說(shuō)血清滅活對(duì)于細(xì)胞生長(zhǎng)只有微小甚至無(wú)任何作用，還可能造成生長(zhǎng)速率降低，沉淀物還會(huì)明顯增多，不利于細(xì)胞觀察。因此，若非必須，不需要對(duì)血清進(jìn)行滅活處理。將需要進(jìn)行處理的血清置于56℃水浴30min，建議加放空白對(duì)照（同體積水）使用溫度計(jì)測(cè)溫，以測(cè)得溫度為56℃時(shí)為計(jì)時(shí)起始點(diǎn)，加熱中可不時(shí)輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。武漢進(jìn)口血清供應(yīng)商

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