很好的胎牛血清對細(xì)胞成長的作用:提供細(xì)胞生長所需的天然或天然的生長因子。提供天然的結(jié)合蛋白,能識別氨基酸、脂質(zhì)、金屬離子和等,能結(jié)合并調(diào)節(jié)它們的活性。已知清蛋白即具有上述功能,并對細(xì)胞代謝、生物合成、增殖和存活具有潛在的影響。又如胎牛血清中富含胎球蛋白,具有多個(gè)鈣離子結(jié)合位點(diǎn),因而能調(diào)節(jié)和維持血清中的鈣離子濃度。天然含有粘附蛋白等細(xì)胞外基質(zhì)成分,促進(jìn)細(xì)胞的附著、鋪展。提供醫(yī)治功能。這主要通過血清中的某些蛋白與有毒的金屬離子結(jié)合來完成的。如金屬硫蛋白,對多種重金屬有高度親和性,并可消除細(xì)胞生長環(huán)境中的氧自由基,具有很強(qiáng)的抗氧化活性,可防止細(xì)胞衰老。提供酸堿度緩沖的作用,以及維持滲透壓。提供蛋白酶抑制劑,使細(xì)胞免受蛋白酶的損傷。因此在細(xì)胞消化時(shí),常用含血清的培養(yǎng)液終止胰酶對細(xì)胞的作用。牛血清是細(xì)胞培養(yǎng)中用量較為大的天然培養(yǎng)基,含有豐富的細(xì)胞生長必須的營養(yǎng)成份。常州細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清哪里有
血清的主要質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):低內(nèi)有毒的,無細(xì)菌、支原體、噬菌體、病毒等污染。無外源添加因子,不含、等。經(jīng)過上百種細(xì)胞株和近百種原代細(xì)胞的驗(yàn)證,細(xì)胞狀態(tài)良好。很好的、負(fù)責(zé)的血清品牌,都會做多細(xì)胞培養(yǎng)鑒定,觀察細(xì)胞生長狀態(tài),做多項(xiàng)、多批次橫向?qū)Ρ?才能較為終驗(yàn)證。使用便捷性:對于包裝規(guī)格來說,常見的血清有500ml、100ml和50ml裝的。各有優(yōu)勢。500ml適合一次性大量使用的,訂購和儲存更方便。100ml適合每次中等規(guī)模細(xì)胞培養(yǎng)使用的。50ml分裝的就更適合每次小量細(xì)胞培養(yǎng),也是現(xiàn)在比較流行的包裝方式。南通標(biāo)準(zhǔn)血清哪家好一般廠商提供的血清為無菌,無需再過濾除菌,如發(fā)現(xiàn)血清有懸浮物,則可將血清加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾。
細(xì)胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點(diǎn)是污染嗎?如何處理?一旦您在細(xì)胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點(diǎn)生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下觀察培養(yǎng)細(xì)胞生長的狀態(tài),黑點(diǎn)是否游動(dòng)。如果細(xì)胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細(xì)菌污染、支原體污染等。如果在鏡下觀察細(xì)胞,生長狀態(tài)良好,與黑點(diǎn)出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點(diǎn)的出現(xiàn)可能與以下幾種情況有關(guān):細(xì)胞生長過老,破碎的細(xì)胞殘??;血清質(zhì)量不好,反復(fù)凍融的結(jié)果;配制培養(yǎng)基的pH值偏高,不宜細(xì)胞生長;配制培養(yǎng)基的水質(zhì)、容器不合格??蓱?yīng)用離心、過濾的方法去除這些黑點(diǎn);培養(yǎng)原代細(xì)胞中出現(xiàn)小黑點(diǎn),可能是原代組織中的雜質(zhì),多次傳代可以消除。
添加胎牛血清的時(shí)候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因?yàn)槿绻囵B(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量的黑點(diǎn),除此之外,細(xì)胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì),總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細(xì)胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進(jìn)行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。注意解凍的方法:再高質(zhì)量的胎牛血清也要在使用的時(shí)候堅(jiān)持謹(jǐn)慎的原則,因此在解凍血清的時(shí)候,要細(xì)心地考慮到其解凍時(shí)體積一般會增大的特點(diǎn),事先為血清預(yù)留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來,便不會發(fā)生污染或者容器凍裂的情況。另外較為好采用國際通用的解方式解凍血清。胎牛血清常用于動(dòng)物細(xì)胞的體外培養(yǎng),具有極為重要的功能。
如何儲存和解凍血清才不會使產(chǎn)品質(zhì)量受損?將血清從冷凍箱取出后,先置于2~8℃冰箱使之融解,然后在室溫下使之全融。但必須注意的是,融解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。長時(shí)間儲存在2-8℃時(shí),血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此,推薦在-20℃以下儲存血清,并避免反復(fù)凍融。我們建議血清應(yīng)保存在-2O℃。若存放于4℃時(shí),請勿超過一個(gè)月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當(dāng)?shù)臏缇萜鲀?nèi),再放回冷凍。血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理?沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質(zhì)。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉(zhuǎn)移到另一個(gè)無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因?yàn)槌恋頃氯麨V膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動(dòng)沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時(shí)要搖動(dòng)并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。小牛血清取自出生10-30天的小牛。常州細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清哪里有
血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。常州細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清哪里有
血清的保存應(yīng)該注意:需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月,由于血清結(jié)冰時(shí)體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。常州細(xì)胞培養(yǎng)用胎牛血清哪里有