網(wǎng)站導(dǎo)航
UBE2C抑制內(nèi)吞作用增加SNAT2的膜表達(dá)水平
第一步，UBE2C增加SNAT2的膜表達(dá)水平
IF染色和FACS分析發(fā)現(xiàn)，過表達(dá)UBE2C增加了SNAT2的膜表達(dá)水平（圖1c-d），表明UBE2C介導(dǎo)的K59殘基的單泛素化增加了SNAT2的膜表達(dá)水平。
第二步，膜SNAT2表達(dá)的增加歸因于抑制內(nèi)吞作用
FACS和WB分析顯示，UBE2C過表達(dá)增加了SNAT2的膜表達(dá)水平（圖1g-h），表明在UBE2C過表達(dá)組中，細(xì)胞膜上SNAT2表達(dá)的增加是由抑制內(nèi)吞作用引起的。
IF證實(shí)，UBE2C過表達(dá)抑制了SNAT2與RAB5(早期核內(nèi)體標(biāo)志物)的共定位（圖1i），表明UBE2C過表達(dá)組中膜SNAT2表達(dá)的增加歸因于抑制內(nèi)吞作用。
第三步，闡明UBE2C過表達(dá)抑制SNAT2內(nèi)吞作用的機(jī)制
Co-IP和銀染色分析以鑒定與SNAT2相互作用的蛋白。染色分析，UBE2C過表達(dá)組55-70 kDa呈現(xiàn)明顯的弱帶，經(jīng)質(zhì)譜鑒定為EPN1（圖1j）。Co-IP實(shí)驗(yàn)顯示，在ube2c過表達(dá)組中，SNAT2和EPN1相互作用減弱，而在UBE2C敲低組中則增強(qiáng)（圖1k）。 EPN1是一種內(nèi)吞適配蛋白，可以將泛素化的貨物與網(wǎng)格蛋白介導(dǎo)的內(nèi)吞機(jī)制結(jié)合，以促進(jìn)內(nèi)吞作用。假設(shè)UBE2C過表達(dá)通過影響SNAT2和EPN1相互作用來抑制SNAT2的內(nèi)吞作用。EPN1的過表達(dá)強(qiáng)烈促進(jìn)了SNAT2的內(nèi)吞作用，而UBE2C的過表達(dá)則消除了這種作用（圖1l）。表明UBE2C的過表達(dá)通過阻斷SNAT2和EPN1之間的相互作用來阻止SNAT2的內(nèi)吞作用。SNAT2位點(diǎn)K33和K59分別為多聚、單泛素化位點(diǎn)。Co-IP實(shí)驗(yàn)分析發(fā)現(xiàn)，由UBE2C誘導(dǎo)的單泛素化和k63連接的多泛素化形式的SNAT2之間的串?dāng)_觸發(fā)了SNAT2和EPN1之間相互作用的改變（圖1m-n）。
表明UBE2C介導(dǎo)的單泛素化和多泛素化形式之間的串?dāng)_通過抑制內(nèi)吞作用上調(diào)了SNAT2的膜表達(dá)水平。
圖1 單泛素化形成了SNAT2之間的串?dāng)_，K63連接的多泛素化通過抑制內(nèi)吞作用增加了SNAT2膜的表達(dá)水平（Ref. Fig 4/S6）
廣州基云可提供泛素質(zhì)粒套裝，如您有泛素修飾相關(guān)的機(jī)制研究，歡迎隨時(shí)留言探討。
公司信息
我要咨詢
每日熱詞
