BstDNAPolymerase,LargeFragment（嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶大片段）是一種經(jīng)過(guò)改造的酶，它來(lái)源于嗜熱脂肪芽孢桿菌（Bacillusstearothermophilus）DNA聚合酶I，通過(guò)重組技術(shù)在大腸桿菌中表達(dá)并純化獲得。這種酶具有5'→3'的DNA聚合酶活性，但不具有5'→3'的核酸外切酶活性，因此它在等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)中非常有用，如環(huán)介導(dǎo)的等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）和滾環(huán)擴(kuò)增（RCA）等。以下是BstDNAPolymerase,LargeFragment的一些關(guān)鍵特點(diǎn)和應(yīng)用：1.**等溫?cái)U(kuò)增**：BstDNAPolymerase,LargeFragment具有很強(qiáng)的鏈置換能力，適用于多種等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，這些反應(yīng)通常在50-68°C之間進(jìn)行，比較好反應(yīng)溫度為65°C。2.**快速測(cè)序**：由于其高聚合酶活性，BstDNAPolymerase,LargeFragment可以用于快速測(cè)序，特別是對(duì)于高GC含量的DNA模板或微量（納克量級(jí)）DNA模板的測(cè)序。3.**全基因組擴(kuò)增**：BstDNAPolymerase,LargeFragment也可用于全基因組擴(kuò)增（WGA），這是一種在不需要熱循環(huán)儀的情況下擴(kuò)增整個(gè)基因組DNA的技術(shù)。4.**高dUTP耐受性**：與BstDNAPolymerase2.0相比，BstDNAPolymerase,LargeFragment在進(jìn)行等溫?cái)U(kuò)增時(shí)不具有將dUTP摻入合成的DNA鏈的能力，這使得它在某些應(yīng)用中更具優(yōu)勢(shì)。Pfu DNA Polymerase與Taq酶的對(duì)比：與Taq酶相比，Pfu DNA Polymerase的錯(cuò)誤率更低，適合高精度實(shí)驗(yàn)。Recombinant Human Bcl-2

磁珠法DNA凝膠回收試劑盒是一種用于從DNA瓊脂糖凝膠中回收特定DNA片段的實(shí)驗(yàn)室工具。與傳統(tǒng)的柱純化方法相比，磁珠法具有多個(gè)優(yōu)勢(shì)：1.**操作簡(jiǎn)便快捷**：磁珠法DNA凝膠回收試劑盒的操作步驟通常包括凝膠的融化、DNA的結(jié)合、磁珠的洗滌和DNA的洗脫，整個(gè)過(guò)程可以在20分鐘內(nèi)完成。2.**高純度和高回收率**：磁珠法能夠穩(wěn)定、高效地從凝膠中回收DNA，純化所得的DNA可直接用于酶切、連接、轉(zhuǎn)化細(xì)菌、測(cè)序、PCR、雜交等后續(xù)操作。通常回收率達(dá)到60-80%，對(duì)于200bp以下小片段和10kb以上大片段的回收率有所下降。3.**適用性廣**：適用于100bp以上DNA片段的純化，對(duì)達(dá)到10kb片段DNA的純化也能保持較好的效果。4.**安全性高**：操作過(guò)程中不涉及酚/氯仿等有毒試劑，更加環(huán)保和安全。5.**靈活性**：可以根據(jù)實(shí)際狀況靈活調(diào)節(jié)磁珠用量，適應(yīng)不同體積和濃度的樣品處理。6.**自動(dòng)化和高通量**：磁珠法純化試劑盒適合手工操作，也可用于自動(dòng)化工作站或核酸自動(dòng)提取儀，實(shí)現(xiàn)高通量操作。Recombinant Cynomolgus IL-17F Protein,His TagE1通常被認(rèn)為是泛素化過(guò)程中的限速步驟，因?yàn)樗婕暗椒核氐募て鸷虯TP的水解。

BsuDNAPolymerase（嗜熱脂肪芽孢桿菌DNA聚合酶）在PCR中的應(yīng)用具有多個(gè)優(yōu)勢(shì)，以下是一些關(guān)鍵點(diǎn)：1.**鏈置換活性**：BsuDNAPolymerase具有很強(qiáng)的鏈置換活性，這使得它非常適合于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，如重組酶聚合酶擴(kuò)增（RPA）。在這些技術(shù)中，BsuDNAPolymerase可以快速、高效、特異性地?cái)U(kuò)增模板，在10到30分鐘內(nèi)將痕量的核酸模板（低至單拷貝）擴(kuò)增至可以檢出的水平。2.**高溫穩(wěn)定性**：BsuDNAPolymerase在高溫下保持活性，這使得它在一些需要高溫反應(yīng)的實(shí)驗(yàn)條件下表現(xiàn)出色。3.**高靈敏度和特異性**：BsuDNAPolymerase在等溫?cái)U(kuò)增中展現(xiàn)出高靈敏度，能夠?qū)⑽⒘亢怂崮０鍞U(kuò)增到可檢測(cè)水平。同時(shí)，它也具有高特異性，減少了非特異性擴(kuò)增的風(fēng)險(xiǎn)。4.**簡(jiǎn)化的樣品處理**：BsuDNAPolymerase可以直接對(duì)復(fù)雜樣品進(jìn)行擴(kuò)增，無(wú)需事先進(jìn)行復(fù)雜的核酸純化和提取步驟，節(jié)省了時(shí)間和成本。5.**可擴(kuò)增DNA和RNA**：BsuDNAPolymerase不僅可以擴(kuò)增DNA，還可以直接擴(kuò)增RNA，省去了額外的逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)（cDNA合成）步驟，這對(duì)于RNA的檢測(cè)和分析更加方便快捷。6.**無(wú)核酸外切酶和RNase殘留**：BsuDNAPolymerase在生產(chǎn)過(guò)程中確保無(wú)核酸外切酶、切口酶及RNase殘留，這有助于提高實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。

Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL) 是一種從嗜熱脂肪芽孢桿菌（Thermophilic Geobacillus sp）DNA聚合酶I衍生的酶，缺乏5'-3'外切核酸酶活性。以下是關(guān)于Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)的一些關(guān)鍵信息：來(lái)源和特性：Bst Plus DNA Polymerase 具有更強(qiáng)的5'-3' DNA聚合酶活性、鏈置換活性和dUTP耐受性，適合用于抗污染的等溫?cái)U(kuò)增反應(yīng)，如LAMP和CPA等。應(yīng)用：主要應(yīng)用于等溫DNA擴(kuò)增，包括環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）和其他等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。規(guī)格：活性定義：1 U指的是在65°C下30分鐘內(nèi)將10 nmol的dNTP整合到酸不溶物質(zhì)中的酶的量。溶液成分：包含10 mmol/L Tris-HCl、50 mmol/L KCl、0.1 mmol/L EDTA、1 mmol/L DTT、0.1% Triton X-100、50% 甘油，pH 7.5 @ 25℃。產(chǎn)品形式：提供的產(chǎn)品包括Hieff® Bst Plus DNA Polymerase (40 U/μL)，貨號(hào)14402ES，以及凍干粉形式的產(chǎn)品，貨號(hào)14405ES，不含甘油。靈敏度和穩(wěn)定性：Bst Plus DNA Polymerase 具有高靈敏度，低至5copies目的基因可測(cè)，且在飛克（fg）級(jí)別的模板量下也能快速達(dá)到閾值。在37°C下，該酶可以保持相對(duì)穩(wěn)定的效應(yīng)長(zhǎng)達(dá)5天，并且在-20℃下可以穩(wěn)定保存2年。儲(chǔ)存條件：建議在-25℃至-15℃下儲(chǔ)存，以保持產(chǎn)品活性，并避免反復(fù)凍融。T4 DNA 聚合酶是一種模板依賴的 DNA 聚合酶，需要特定的 DNA 模板才能進(jìn)行 DNA 合成反應(yīng)。

qPCR（定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)）檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性可能受到多種因素的影響，以下是一些關(guān)鍵因素：1.**引物和探針設(shè)計(jì)**：引物和探針的設(shè)計(jì)質(zhì)量對(duì)qPCR的成功至關(guān)重要。不合適的引物設(shè)計(jì)可能導(dǎo)致低特異性或效率低的PCR反應(yīng)。引物的選擇應(yīng)考慮引物的長(zhǎng)度、Tm值（解離溫度）和GC含量，以確保其適用于特定的核酸模板。2.**模板質(zhì)量和純度**：模板的質(zhì)量和純度直接影響qPCR的結(jié)果。污染或降解的模板可能導(dǎo)致偏差或虛假陽(yáng)性結(jié)果。使用質(zhì)量高、純度高的DNA或RNA樣本是確保準(zhǔn)確和可靠的qPCR結(jié)果的關(guān)鍵。3.**反應(yīng)條件和緩沖液**：PCR反應(yīng)條件，包括溫度、離子濃度和緩沖液成分，必須嚴(yán)格控制。溫度梯度、離子濃度的變化或緩沖液成分的誤配可能會(huì)影響PCR效率。4.**反應(yīng)容器和耗材**：反應(yīng)管、微孔板、封閉膜等反應(yīng)容器和耗材的質(zhì)量也會(huì)影響qPCR結(jié)果。低質(zhì)量的材料可能導(dǎo)致樣本丟失或反應(yīng)失效。5.**標(biāo)準(zhǔn)曲線和校準(zhǔn)**：標(biāo)準(zhǔn)曲線的準(zhǔn)備和校準(zhǔn)非常重要。不正確的標(biāo)準(zhǔn)曲線可能導(dǎo)致定量結(jié)果的不準(zhǔn)確性。確保標(biāo)準(zhǔn)曲線中包含適當(dāng)?shù)膶?duì)照樣品，并使用線性擬合來(lái)生成準(zhǔn)確的定量數(shù)據(jù)。6.**環(huán)境條件**：實(shí)驗(yàn)室溫度、濕度和空氣質(zhì)量都可以影響qPCR實(shí)驗(yàn)的結(jié)果。不穩(wěn)定的環(huán)境條件可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果的不穩(wěn)定性。在gRNA的引導(dǎo)下，Cas9 NLS可以對(duì)特定DNA序列進(jìn)行剪切，適用于研究基因功能或進(jìn)行基因編輯 。腸激酶畢赤酵母表達(dá)

T4 DNA 聚合酶具有 5’→3’聚合酶活性，在模板及引物存在的條件下，能夠在結(jié)合有引物的單鏈 DNA 模板上。Recombinant Human Bcl-2

在PCR實(shí)驗(yàn)中，為了避免引物與已知序列的交叉反應(yīng)，從而確保實(shí)驗(yàn)的特異性，以下是一些關(guān)鍵的引物設(shè)計(jì)原則和策略：1.**選擇高保守性區(qū)域**：引物比較好設(shè)計(jì)在模板cDNA的保守區(qū)內(nèi)，這樣可以確保引物與目標(biāo)序列的特異性結(jié)合。通過(guò)比較不同物種的同一基因序列，可以確定基因的保守區(qū)。2.**避免引物與非目標(biāo)序列的同源性**：設(shè)計(jì)引物時(shí)，應(yīng)避免與基因組中的重復(fù)序列、假基因或高同源性區(qū)域設(shè)計(jì)引物。可以通過(guò)BLAST等工具對(duì)引物進(jìn)行同源性分析，確保引物只與目標(biāo)序列結(jié)合。3.**引物長(zhǎng)度和GC含量**：引物長(zhǎng)度一般在15-30堿基之間，常用的是18-27bp。GC含量一般為40%-60%，以45-55%為宜。過(guò)高或過(guò)低的GC含量都不利于引發(fā)反應(yīng)，上下游引物的GC含量和Tm值應(yīng)保持接近。4.**避免引物的3'端錯(cuò)配**：引物3'端的堿基應(yīng)嚴(yán)格要求配對(duì)，特別是倒數(shù)第二個(gè)堿基，以避免因末端堿基不配對(duì)而導(dǎo)致PCR失敗。引物3'端比較好不要選擇A，比較好選擇T，因?yàn)楫?dāng)末位鏈為T(mén)時(shí)，錯(cuò)配的引發(fā)效率降低。5.**避免引物自身及引物之間的互補(bǔ)序列**：引物自身不應(yīng)存在互補(bǔ)序列，否則引物自身會(huì)折疊成發(fā)夾結(jié)構(gòu)，影響引物與模板的復(fù)性結(jié)合。前后引物之間也不應(yīng)具有互補(bǔ)性，尤其應(yīng)避免3'端的互補(bǔ)重疊以防止引物二聚體的形成。Recombinant Human Bcl-2