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在s3中,將s2中消毒的外植體接入誘導培養(yǎng)基中培養(yǎng),誘導培養(yǎng)基的配方為ms+,誘導培養(yǎng)基的ph值為,在s4中,將s3中的無菌外植體轉接到增殖培養(yǎng)基中,增殖培養(yǎng)基的配方為ms+~~,增殖培養(yǎng)基的ph值為,在s5中,將s4中的繡球組培苗放入生根培養(yǎng)基中,生根培養(yǎng)基的配方為1/2ms+~~,生根培養(yǎng)基ph值為。通過采用上述技術方案,通過液體**培養(yǎng)技術,以芽為原材料,獲取方便,增殖倍率高達8~10倍,生根率達到95%以上,苗木規(guī)格整齊,性狀保持穩(wěn)定,同時節(jié)省成本,適合工廠化大規(guī)模生產質量繡球種苗。誘導培養(yǎng)基萌芽率能達到90%,可以成功建立無菌再生體系。使用本增殖培養(yǎng)基,繡球組培苗增殖倍率能夠達到8~10倍,組培苗高度一致,生長健壯。使用本生根培養(yǎng)基,繡球組培苗生根率能夠達到95%,根系發(fā)達,健壯,可以成功用于移栽大棚。本發(fā)明在一較佳示例中可以進一步配置為:在s3中,將s2中消毒的外植體接入誘導培養(yǎng)基中后的培養(yǎng)環(huán)境為在光照強度1500lux條件下,溫度25℃,光照時間16h;黑暗條件下,溫度23℃,光照時間8h,培養(yǎng)6~8周。通過采用上述技術方案,在該培養(yǎng)條件下能夠有效避免誘導培養(yǎng)階段植物材料出現(xiàn)應激反應,植物材料能夠快速適應誘導培養(yǎng)基。減血清培養(yǎng)基提高了實驗結果的可靠性。遼寧基礎培養(yǎng)基生產企業(yè)
從而提高菌株增殖速率,但是濃度過大會導致抑菌現(xiàn)象,后期菌株增殖放緩,以產酸為主,2-羥基乙胺還能夠作為陽離子表面活性劑,使得細胞壁疏松,提高細胞通透性,促進谷氨酸釋放到發(fā)酵液,從而提高了谷氨酸產量和糖酸轉化率。三、通過上述實驗確定cecl3添加量為10mg/l、2-羥基乙胺的添加量40mg/l,在此基礎上,研究發(fā)酵培養(yǎng)基b對菌體濃度、谷氨酸含量以及糖酸轉化率的影響。對照組1采用發(fā)酵培養(yǎng)基a進行發(fā)酵,不采用發(fā)酵培養(yǎng)基b,100l發(fā)酵罐中含有70l發(fā)酵培養(yǎng)基a;發(fā)酵工藝參照實施例1。對照組2:發(fā)酵培養(yǎng)基b中不添加琥珀酸,其余同實施例1。對照組3:發(fā)酵培養(yǎng)基b中不添加殼聚糖,其余同實施例1。對照組4:發(fā)酵培養(yǎng)基a中添加5g/l的琥珀酸,其余同對照組1。實驗組為實施例1。具體結果見表1。表1組別菌濃度od600nm谷氨酸產量g/l糖酸轉化率%對照組:對照組1采用單一發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵,谷氨酸產量和糖酸轉化率明顯低于實驗組,各組別菌體濃度差異并不大;對照組4在對照組1的基礎上添加了琥珀酸,對菌體濃度并沒有影響,谷氨酸產量和糖酸轉化率也沒有明顯差異,可能原因是,發(fā)酵前期以菌體增殖為主,產酸較少,琥珀酸對菌體增殖并沒有明顯的刺激作用。安徽減血清培養(yǎng)基是什么無血清培養(yǎng)基適合于無血清環(huán)境的細胞培養(yǎng)。
附圖說明圖1是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,哥倫比亞型擬南芥無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌苗在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌苗蓮座葉及根系發(fā)育;c:萌發(fā)率;d主根長度;a和b中bar=;圖2是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,蘭茲貝格型擬南芥無菌植株培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌植株地上部分及根系發(fā)育;c:無菌植株花***發(fā)育(左)和花粉的亞歷山大染色(右);d:主根長度;e:株高;f:蓮座葉長度;g:成熟花粉活力;a中bar=、b中bar=、c中花***bar=、c中花粉bar=15um;圖3是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,油菜無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌苗地上部分及根系發(fā)育;c:莖高;d:莖中粗;e:主根長;f:大于;a中bar=、b中bar=;圖4是1/2cs和1/2ms兩種培養(yǎng)基上,馬鈴薯無菌苗培養(yǎng)的對比效果圖,a:無菌植株在培養(yǎng)基中生長情況;b:無菌苗地上部分及根系發(fā)育;c:莖高;d:莖中粗;e:根數(shù);a和b中bar=;圖5是cs和ms兩種培養(yǎng)基上,哥倫比亞型擬南芥葉片及根愈傷**誘導的對比效果圖,a:葉片愈傷**;b:葉片愈傷**誘導率;c:根愈傷**;d:根愈傷**誘導率;a和c中bar=;圖6是cs和ms兩種培養(yǎng)基上。
已發(fā)現(xiàn)當培養(yǎng)基中的血清濃度減少時,這些成分都是必需的。既使在使用血清的情況下,這些成分也可幫助細胞的克隆化培養(yǎng)及維持某些特殊細胞系的生長。***和生長因子在大多數(shù)常規(guī)培養(yǎng)基的配方中都沒有注明,但在無血清培養(yǎng)基中通常要加入它們,用其來代替血清中的***能增加多種不同類型細胞的貼瓶率;生長因子包括FGF家族、EGF、PDGF、IGF-1和IGF-2及白介素等,生長因子和細胞因子有著***的特異性,一般與***或其它物質起相互協(xié)同或加成作用。另一種常見的添加物就是血清替代物,目前已有許多可完全或部分替代傳統(tǒng)培養(yǎng)液中血清成分的商業(yè)產品,其穩(wěn)定性較好,但批次間仍有差別,產品的成分也不很確定。干粉培養(yǎng)基原倍液的配制1)配制過濾**的細胞培養(yǎng)基(1)閱讀培養(yǎng)基使用說明,確定需要添加何種添加劑(如NaHCO3、L-谷氨酰胺、**酸鈉、HEPES等)。(2)根據所需將培養(yǎng)基全部倒入一容器中,用少量注射用水(20℃~30℃)將袋內殘留培養(yǎng)基洗下,并入容器。加注射用水至總體積的95%,輕微攪拌溶解。(3)加入規(guī)定量的碳酸氫鈉及所要添加的物質。(4)輕微攪拌溶解,加注射用水至規(guī)定體積。(5)用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調pH至所需值。(6)用μm濾膜正壓過濾**。。無血清培養(yǎng)基為細胞培養(yǎng)提供了更清晰的背景。
水解乳蛋白是乳白蛋白經蛋白酶和肽酶水解的產物,含豐富的多肽、氨基酸和碳水化合物。一般配制成(采用平衡鹽溶液溶解)與合成培養(yǎng)基(如MEM細胞培養(yǎng)基)以1:1的比例混合使用。目前用于細胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清,培養(yǎng)某些特殊細胞也用人血清、馬血清等。牛血清對絕大多數(shù)哺乳動物細胞都是適合的,但并不排除在培養(yǎng)某種細胞時使用其他動物血清更合適。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、***、無機物等,這些物質對促進細胞生長或**生長活性是達到生理平衡的。此外,血清含一些對細胞產生毒性的物質,如多胺氧化酶,能與來自高度繁殖細胞的多胺反應(如精胺、亞精胺)形成有細胞毒性作用的聚精胺。補體、抗體、*****等都會影響細胞生長,甚至造成細胞死亡。目前,血清多作為一種添加成分與合成培養(yǎng)基混合使用,使用濃度一般為5~20%,**常用是10%。由于水解乳蛋白和血清成份復雜,批間差異大及存在**等外源污染風險,對下游生物制品的分離純化和安全性都存在較大的影響,在生物制*行業(yè)的使用也越來越少。因此,基于對血漿成份的分析,合成細胞培養(yǎng)基應運而生。合成培養(yǎng)基是根據天然培養(yǎng)基的成分,用化學物質模擬合成、人工設計、配制的培養(yǎng)基。MEM培養(yǎng)基適合多種類型的細胞培養(yǎng)實驗。寧夏基礎培養(yǎng)基生產企業(yè)
無酚紅培養(yǎng)基適用于對酚紅敏感的細胞實驗。遼寧基礎培養(yǎng)基生產企業(yè)
本氏***葉片及根愈傷**誘導的對比效果圖,a:葉片愈傷**;b:葉片愈傷**誘導率;c:根愈傷**;d:根愈傷**誘導率;a和c中bar=;圖7是cs和ms兩種培養(yǎng)基上,水稻成熟胚愈傷**誘導的對比效果圖,a:水稻成熟胚愈傷**;b:水稻成熟胚愈傷**誘導率;a中bar=;圖8是用不同ph的超純水(ph為)配制的cs、ms、1/2cs和1/2ms液體培養(yǎng)基ph值穩(wěn)定性比較效果圖;圖9是在未調ph和將ph調至、ms、1/2cs和1/2ms液體培養(yǎng)基中馬鈴薯幼苗的生長狀況的比較效果圖,a:不同液體培養(yǎng)基培養(yǎng)前的無菌苗生長情況;b1、c1和d1:1/2ms未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b2、c2和d2:1/2cs未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b3、c3和d3:ms未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b4、c4和d4:cs未調ph液體培養(yǎng)基培養(yǎng)效果;b5、c5和d5:1/;b6、c6和d6:1/;b7、c7和d7:;b8、c8和d8:;a、b、c和d中bar=;圖10是對在未調ph和將ph調至、ms、1/2cs和1/2ms液體培養(yǎng)基中馬鈴薯幼苗的莖高(a)、莖中粗(b)、根長(c)、鮮重(d)進行統(tǒng)計的比較效果圖。具體實施方式下面結合附圖和實施例對本發(fā)明作進一步描述。實施例一,本實施例廣適性植物**培養(yǎng)基,其每1000ml培養(yǎng)基中含有:kno32662mg、。遼寧基礎培養(yǎng)基生產企業(yè)