細(xì)胞消化胰酶的配制對一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機械攪拌對酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因為EDTA可以絡(luò)合Ca2+，增加消化效力胰蛋白酶屬于其中一種活性成分，主要用于促進(jìn)消化吸收。河北胰酶產(chǎn)品介紹

胰蛋白酶（Trypsin）簡稱胰酶，是一種絲氨酸水解酶，能把多肽鏈中賴氨酸和精氨酸殘基中的羧基端切斷。在組織細(xì)胞的提取、培養(yǎng)，以及體外細(xì)胞培養(yǎng)過程中，均會使用到胰蛋白酶消化液，用于水解細(xì)胞間蛋白質(zhì)，使組織或細(xì)胞離散成單個細(xì)胞。胰酶在37℃pH8.0條件下消化能力**強。常用胰酶工作濃度為0.25%。EDTA可以螯合鈣鎂離子，胰酶溶液中搭配EDTA使用可以加速細(xì)胞間連接蛋白的水解，起到增強消化的效果。酚紅是一種pH指示劑，溶液偏堿性時呈紫紅色，偏酸性時呈橘紅色，近中性時呈粉紅色。本產(chǎn)品為0.25%胰蛋白酶消化液，含0.25%胰蛋白酶，溶于Hank’s緩沖液，不含EDTA，無酚紅指示劑，經(jīng)0.22μm過濾除菌。河北胰酶產(chǎn)品介紹胰酶細(xì)胞消化液和胰蛋白酶消化液是一樣的嗎？

胰酶消化細(xì)胞的原理胰酶消化細(xì)胞是一種用來分解細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞間物質(zhì)的化學(xué)過程它可以被看成一種簡單的動力學(xué)過程，它將細(xì)胞結(jié)合部分的物質(zhì)分解為其他物質(zhì)，然后這些留下的物質(zhì)可以用來維持細(xì)胞的高能量水平這種過程通過將脂肪、蛋白質(zhì)、糖類和其它物質(zhì)分解為小的離子或者原子小分子的方式來發(fā)生。胰酶是細(xì)胞分解與吸收物質(zhì)的一種關(guān)鍵分子，通常有四種類型，它們是肽酶，脂水解酶，載脂蛋白酶和糖水解酶，分別可以將蛋白質(zhì)、脂肪、脂蛋白和糖類物質(zhì)分解為更小的離子和分子，以便細(xì)胞可以更好地吸收物質(zhì)，維持其自身的正常功能和形態(tài)。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時間根據(jù)干細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間。配制時不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的，一般是用原代培養(yǎng)時，從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和，對干細(xì)胞損傷較小，但是，價格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時候就容易消化，反之就不易消化。還要在你看到消化過頭的情況下，如果干細(xì)胞下來的比較多了，這時可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳。營養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會自動終止消化，但這樣操作對干細(xì)胞是有一定的影響的。對于容易消化的干細(xì)胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度），棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞。含EDTA的胰酶消化活力會比不含EDTA的強。

胰酶的作用原理是什么呢？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上和培養(yǎng)皿結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時細(xì)胞在自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力的作用下成為球形。使用胰酶時需注意哪些細(xì)節(jié)問題？在使用胰酶（Trypsins）細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。胰酶細(xì)胞消化液消化細(xì)胞時間不宜過長，否則細(xì)胞鋪板后生長狀況會較差，做流式時的CDMarker也可能會下降。胰酶進(jìn)行分裝時盡量分裝成多瓶，并遵守3次左右用完和只裝2/3體積的原則。因為冷凍保存時液體體積會膨脹，多次使用同一瓶胰酶反復(fù)凍融會降低消化效果并可能造成污染。胰酶適用于消化細(xì)胞間質(zhì)較少的軟組織和傳代細(xì)胞，如胚胎、上皮、肝、腎等組織，但對于纖維性組織和較硬的*組織效果較差。胰酶消化效果主要與pH值、溫度、胰酶濃度、組織塊大小和硬度有關(guān)。為什么收到的胰酶會有顏色差異？河北胰酶產(chǎn)品介紹

胰蛋白酶是一種異源蛋白酶，與培養(yǎng)皿結(jié)合可以降解細(xì)胞膜上的蛋白質(zhì)。河北胰酶產(chǎn)品介紹

1、細(xì)胞培養(yǎng)過程中為什么要使用胰酶呢？胰酶的作用是什么？胰酶是一種蛋白酶，酶切位點是肽鏈的Lys或Arg兩個殘基的羧基端肽鏈，通過在特定位置上降解蛋白，使細(xì)胞膜上與培養(yǎng)皿壁結(jié)合處蛋白降解，從而使兩者分離。這時，細(xì)胞由于自身內(nèi)部細(xì)胞骨架的張力以及培養(yǎng)液表面張力可成為球形。圖1.胰酶酶切位點2、使用胎牛血清培養(yǎng)細(xì)胞，在使用胰酶消化時發(fā)現(xiàn)血清可以終止此過程，這是什么原因？血清終止的原理其實是競爭抑制，就是用過量的牛血清中含有的蛋白和胰酶結(jié)合，使胰酶失去消化細(xì)胞蛋白的機會。3、為什么使用了胰蛋白酶消化，細(xì)胞還是成團的，這可能是什么原因?qū)е碌模竣傧瘯r間不夠②吹打力度不夠③胰酶消化液濃度不夠④細(xì)胞密度過高之后才消化傳代⑤胰酶存儲不當(dāng)，或者使用了過期胰酶河北胰酶產(chǎn)品介紹