對(duì)一般細(xì)胞0.25%胰酶(胰蛋白酶，Trypsin)配方：100mlPBS,0.25g胰酶步驟：1先配100mlPBS(1000mlPBS:8.0gNaCl,3.4785gPO4HNa2·12H2O/2.9gPO4HNa2,0.2gKCl,0.2gPO4H2K溶于1000ml蒸餾水)2稱胰酶0.25g3加入PBS中，低速攪拌〈4h冰浴中,或者4℃過夜低速攪拌0.5h冰浴中4調(diào)PH7.45仍在冰浴中6過濾，分裝，-20℃保存，4℃短期內(nèi)用完tip:低速很重要，機(jī)械攪拌對(duì)酶是一種沖擊，如果起沫，酶就變性了。低溫，防止酶失活對(duì)難消化的細(xì)胞：在上述配方中，加入0.02g的EDTA(0.02%)tip:因?yàn)镋DTA可以絡(luò)合Ca2，增加消化效力胰蛋白酶是一種動(dòng)物源性產(chǎn)品，是培養(yǎng)細(xì)胞過程中常用的酶。海南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好

細(xì)胞培養(yǎng)的優(yōu)點(diǎn):1.研究的對(duì)象是活細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)過程中,根據(jù)要求可始終保持細(xì)胞活力,并可長時(shí)間監(jiān)控、檢測甚至定量評(píng)估一部分活細(xì)胞的情況,包括活細(xì)胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動(dòng)等。2.研究條件可以人為控制pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學(xué)的條件,可以根據(jù)實(shí)際需要進(jìn)行人為的控制,同時(shí),可以施加化學(xué)、物理、生物等因素作為條件而進(jìn)行實(shí)驗(yàn)觀察,這些因素同樣可以處于嚴(yán)格控制之下。3.研究的樣本可以達(dá)到比較均一性通過細(xì)胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細(xì)胞系則可以達(dá)到均一性而屬于同一類型的細(xì)胞,需要時(shí),可采用克隆化等方法使細(xì)胞達(dá)到純化。4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細(xì)胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學(xué)、原位雜交、同位素標(biāo)記等各種儀器設(shè)備。河北進(jìn)口胰酶進(jìn)貨價(jià)胰酶在PH值7.2-8.0的時(shí)候，溶液呈淡紅色。

乙二胺四乙酸：（EDTA）是一種有機(jī)化合物，常溫常壓下為白色粉末。它是一種能與Mg2+、Ca2+、Mn2+、Fe2+等二價(jià)金屬離子結(jié)合的螯合劑。動(dòng)物細(xì)胞在粘附的時(shí)候，需要有Ca或Mg離子的參與，EDTA與他們結(jié)合后，導(dǎo)致動(dòng)物細(xì)胞粘附能力降低，再加上胰蛋白酶的消化作用，使得細(xì)胞與瓶壁快速脫離。兩者起到了協(xié)同消化的作用。難消化的細(xì)胞，胰酶中可填加EDTA。EDTA對(duì)細(xì)胞貼壁性有影響，因此使用時(shí)要甚重。如果影響貼壁，但消化時(shí)必須要用，那么在用完全培養(yǎng)基終止消化后，可離心棄上清，再加完全培養(yǎng)基培養(yǎng)，可去除EDTA。如果對(duì)貼壁沒影響，那么可不離心。

常用的消化酶有:胰酶：用得**多的是胰酶。一般濃度在0.25-0.5%。作用時(shí)間根據(jù)干細(xì)胞種類、作用溫度等因素而變化很大，從幾分鐘到幾十分鐘不等。0.25%的胰酶作用于單層貼壁的干細(xì)胞，在37度條件下，一般消化1-5分鐘就足夠了。終止是用血清。主要作用于干細(xì)胞間。配制時(shí)不能用含鈣、鎂的平衡液，否則影響活性。保存于-20度。膠原酶：膠原酶是比較少用的，一般是用原代培養(yǎng)時(shí)，從組織消化下干細(xì)胞。這種方法作用溫和，對(duì)干細(xì)胞損傷較小，但是，價(jià)格也較貴。中止同樣是用血清。胰酶的質(zhì)量是影響干細(xì)胞的消化的關(guān)鍵因素之一，如果配的比較標(biāo)準(zhǔn)，消化的時(shí)候就容易消化，反之就不易消化。還要在你看到消化過頭的情況下，如果干細(xì)胞下來的比較多了，這時(shí)可以連同cmf或pbs加上營養(yǎng)液一起傳。營養(yǎng)液中有血清，胰酶遇到血清就會(huì)自動(dòng)終止消化，但這樣操作對(duì)干細(xì)胞是有一定的影響的。對(duì)于容易消化的干細(xì)胞，加入pbs緩沖液洗去血清或加入胰酶，先中和血清的作用（30s），棄之，再加入適量胰酶作用10s-40s（根據(jù)細(xì)胞消化的難易程度），棄之，這樣依賴殘余的胰酶就可將干細(xì)胞消化單細(xì)胞。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)，胰酶和雙抗該怎么用？

細(xì)胞傳代消化時(shí)所用胰酶濃度?常見濃度為0.25%的胰酶(含有螯合劑)，半貼壁細(xì)胞或者對(duì)胰酶敏感的細(xì)胞，可采用0.05%濃度的胰酶(含有或者不含有螯合劑)進(jìn)行細(xì)胞消化。由于細(xì)胞膜上的粘附蛋白需要金屬離子維持其活性，常見的胰酶中含有EDTA等整合劑,如果細(xì)胞貼壁不是非常緊密，也可用不含有螯合劑的胰酶進(jìn)行細(xì)胞消化。胰酶對(duì)細(xì)胞膜上粘附蛋白的損害比較大，如果進(jìn)行細(xì)胞膜上蛋白的研究，建議選擇溫和的細(xì)胞消化試劑，盡量減少對(duì)細(xì)胞膜上蛋白的損傷。此外，由于胰酶自身也是一種蛋白，胰酶也會(huì)自己剪切自己,建議胰酶不要反復(fù)凍融，拿到手中的大瓶胰酶進(jìn)行分裝使用。除了常見的胰酶(含有或者不含有EDTA)。在使用胰酶細(xì)胞消化液的過程中要特別注意避免消化液被細(xì)菌污染。海南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好

實(shí)際消化后細(xì)胞狀態(tài)不會(huì)有太大差異，注意控制消化時(shí)間即可。海南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好

淡黃色的胰酶溶液能放心使用嗎？能，對(duì)于胰酶呈黃色的問題，不同品牌也都對(duì)此現(xiàn)象進(jìn)行了測試實(shí)驗(yàn)。變色的胰酶同樣能很好的用于細(xì)胞的解離，請放心使用。細(xì)胞消化時(shí)，胰酶不去除對(duì)細(xì)胞的影響？細(xì)胞消化時(shí)，如果消化液中只有胰酶，不含EDTA，不去除是沒有問題的。如果消化液中含有胰酶和EDTA，比較好去除。EDTA是一種化學(xué)螯合劑，主要作用在于能螯合Ca、Mg離子，使細(xì)胞分離。但EDTA不能被血清中和，消化后要徹底清洗去除，否則細(xì)胞易脫壁。胰酶胰酶和EDTA聯(lián)合使用可提高消化效率，所以常二者合用。胰酶的保存海南國產(chǎn)胰酶哪個(gè)好