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芬蘭雙分子層膜片鉗

來源: 發(fā)布時間:2024-04-28

膜片鉗的基本原理則是利用負反饋電子線路,將微電極前列所吸附的一個至幾個平方微米的細胞膜的電位固定在一定水平上,對通過通道的微小離子電流作動態(tài)或靜態(tài)觀察,從而研究其功能。膜片鉗技術實現(xiàn)膜電流固定的關鍵步驟是在玻璃微電極前列邊緣與細胞膜之間形成高阻密封,其阻抗數(shù)值可達10~100GΩ(此密封電阻是指微電極內與細胞外液之間的電阻)。由于此阻值如此之高,故基本上可看成絕緣,其上之電流可看成零,形成高阻密封的力主要有氫健、范德華力、鹽鍵等。此密封不僅電學上近乎絕緣,在機械上也是較牢固的。又由于玻璃微電極前列管徑很小,其下膜面積只約1μm2,在這么小的面積上離子通道數(shù)量很少,一般只有一個或幾個通道,經這一個或幾個通道流出的離子數(shù)量相對于整個細胞來講很少,可以忽略,也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略,那么,只要保持電極內電位不變,則電極下的一小片細胞膜兩側的電位差就不變,從而實現(xiàn)電位固定。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*28小時隨時人工在線咨詢.Eberwine等于1991年首先將膜片鉗技術與RT-PCR技術結合起來運用。芬蘭雙分子層膜片鉗

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    電壓鉗技術,是20世紀初由Cole發(fā)明,Hodgkin和Huxley完善,其設計的主要目的是為了證明動作電位的產生機制,即動作電位的峰電位是由于膜對鈉的通透性發(fā)生了一過性的增大過程。但當時沒有直接測定膜通透性的方法,于是就用膜對某種離子的電導來**該種離子的通透性,膜電導測定的依據是電學中的歐姆定律,如膜的Na電導GNa與電化學驅動力(Em-ENa)和膜電流INa的關系GNa=INa/(Em-ENa).因此可通過測量膜電流,再利用歐姆定律來計算膜電導,但是,利用膜電流來計算膜電導時,記錄膜電流期間的膜電位必須保持不變,否則膜電流的變化就不能**膜電導的變化。這一條件是利用電壓鉗技術實現(xiàn)的。下張幻燈中的右邊兩張圖是Hodgkin和Huxley在半個世紀以前利用電壓鉗記錄的搶烏賊的動作電位和動作電位過程中的膜電流的變化圖,他們的實驗***證明參與動作電位的離子流由Na,k,漏(Cl)三種成分組成。并對這些離子流進行了定量分析。這一技術對闡明動作電位的本質和離子通道的的研究做出了極大的貢獻。 高通量全自動膜片鉗解決方案浸溶細胞溶液和微電極玻璃管內的填充液成分對全細胞膜片鉗記錄也是很重要的內容。

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膜片鉗技術是一種用于研究生物細胞膜離子通道的實驗方法。它通過在細胞膜上形成小孔,從而對細胞膜的離子通道進行精確的電生理記錄和描述。在膜片鉗實驗中,研究人員通常會先將細胞膜上的脂質雙層通過特殊設備進行穿刺,形成一個小孔。然后,他們將一個玻璃微電極插入這個小孔中,以接觸并測量細胞膜內部的電位變化。這個玻璃微電極的非常細,不會對細胞膜產生太大的干擾。通過膜片鉗技術,科學家可以精確地測量離子通道的活動,從而了解離子通道在細胞生理學中的作用。例如,他們可以測量離子通道在不同刺激下如何開啟或關閉,以及這些變化如何影響細胞的電活動和化學信號傳遞。此外,膜片鉗技術還可以用于研究和鑒定新的藥物靶點。通過觀察藥物對離子通道活動的影響,科學家可以評估新藥對特定疾病的zhi潛力??偟膩碚f,膜片鉗技術是一種非常有用的實驗方法,它為我們提供了深入研究細胞膜離子通道以及藥物作用機制的工具。

膜片鉗技術的建立1.拋光及填充好玻璃管微電極,并將它固定在電極夾持器中。2.通過一個與電極夾持器連接的導管給微電極內一個壓力,一直到電極浸入記錄槽溶液中。3.當電極浸沒在溶液中時給電極一個測定脈沖(命令電壓,如5-10ms,10mV)讀出電流,按照歐姆定律計算電阻。4.通過膜片鉗放大器的控制鍵將微電極前列的連接電位(junctionpotentials)調至零位,這種電位差是由于電極內填充溶液與浸浴液不同離子成分的遷移造成的。5.用微操縱器將微電極前列在直視下靠近要記錄的細胞表面,并觀察電流的變化,直至阻抗達到1GΩ以上形成"干兆封接"6.調整靜息膜電位到期望的鉗位電壓的水平,使放大器從"搜尋"轉到"電壓鉗"時細胞不至于鉗位到零。滔博生物TOP-Bright專注基于多種離子通道靶點的化合物體外篩選,服務于全球藥企的膜片鉗公司,快速獲得實驗結果,專業(yè)團隊,7*36小時隨時人工在線咨詢.膜片鉗具有雙探頭,相當于兩臺膜片鉗放大器。也具有單探頭膜片鉗放大器。

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早在膜片鉗誕生之前,20世紀50~60年代,Hodgkin與Hexley便發(fā)現(xiàn)并使用了電壓鉗技術,他們通過雙電極電壓鉗在烏賊軸突上發(fā)現(xiàn)了動作電位的離子機制,并因此獲得了諾貝爾生理醫(yī)學獎。這也為后來膜片鉗的誕生奠定了基礎。于1976年,德國馬克斯普朗克生物物理化學研究所的Neher和Sakmann第1次于青蛙的肌細胞上,用玻璃電極吸下了一小片細胞膜,記錄導了皮安級的單通道離子電流,從而產生了膜片鉗技術。1980年,耶魯大學醫(yī)學院Sigworth等人在記錄電極內增加了負壓吸引,實現(xiàn)了10-100GΩ的高阻抗封接,使得單電極可以同時實現(xiàn)鉗制電位和記錄單通道電流。1991年,Neher與Sakmann因為對膜片鉗技術的突出貢獻獲得了諾貝爾生理醫(yī)學獎。膜片鉗技術,在人類對生理學的探究中,無異于一條道路,通往了名為細胞電生理的國度。膜片鉗技術也許某一天會被更便捷或更精確的技術取代,但其至今仍然是離子通道相關研究中使用蕞廣的技術。膜片鉗是一種用于夾持薄膜或其他薄片材料的工具。德國雙電極膜片鉗高阻抗封接

膜片鉗技術是用玻璃微電極吸管把只含1-3個離子通道、面積為幾個平方微米的細胞膜通過負壓吸引封接起來。芬蘭雙分子層膜片鉗

膜片鉗的應用范圍:1.單離子通道(如鈉、鉀)的功能研究;2.心肌細胞離子通道研究(尤其與藥物作用相關的);3.常規(guī)與病理的離子通道作用機制研究;4.單細胞的形態(tài)與功能關系的研究;5.心血管藥理學的研究;6.腦片膜片鉗(證實了腦組織在體外也能存活并保持很好的活性狀態(tài),能使對腦細胞的研究更接近生理狀態(tài)下的情況,可檢驗不同腦區(qū)間的神經通路與功能鏈接);7.神經環(huán)路的研究(光遺傳或化學遺傳病毒載體表達的驗證);8.神經突觸可塑性的研究。芬蘭雙分子層膜片鉗

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