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安徽流式細(xì)胞高通量篩選

來源: 發(fā)布時(shí)間:2022-06-30

在報(bào)告基因檢測(cè)(也稱為信號(hào)通路檢測(cè))中,報(bào)告蛋白的序列編碼是在相關(guān)通路的轉(zhuǎn)錄控制下引入的。通過熒光或光學(xué)讀數(shù)監(jiān)測(cè)報(bào)告基因的表達(dá),通過這些指標(biāo)來間接反應(yīng)啟動(dòng)子的或抑制程度。觀察到的信號(hào)是整個(gè)通路的產(chǎn)物,篩選的化合物可以在該通路上的任何點(diǎn)相互作用。常見的報(bào)告基因是CAT(氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶)、GAL(β-半乳糖苷酶)、LAC(β-內(nèi)酰胺酶)、LUC(熒光素酶)和GFP。我們通常使用的為LUC(熒光素酶),但也可以使用其他報(bào)告基因。組合化學(xué)高通量篩選。安徽流式細(xì)胞高通量篩選

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高通量篩選的實(shí)驗(yàn)方法必須具備條件穩(wěn)定,樣本之間差異性小,容易檢測(cè),且可以大批量同時(shí)檢測(cè)等特性。除了以上介紹的三種較為常用的方法之外,第二信使檢測(cè)、細(xì)胞活力檢測(cè)等方法也是常用的細(xì)胞水平的檢測(cè)手段。化合物庫的使用在篩選前期也起著十分重要的作用。在化合物未知的情況下,數(shù)量足夠大的化合物庫可增加識(shí)別目標(biāo)的概率;不同細(xì)分用途的化合物庫,則能進(jìn)一步整合具有某項(xiàng)作用的盡可能多的化合物。MCE對(duì)不同方向、不同種類、性質(zhì)不同的化合物做了詳細(xì)分類,如生物活性化合物庫、FDA上市庫、天然產(chǎn)物庫等可以供不同需求的科學(xué)家選擇。隨著技術(shù)的發(fā)展,MCE化合物庫數(shù)量會(huì)越來越多,分類也越來越精細(xì),這將節(jié)約前期篩選合適化合物所需的時(shí)間。此外,MCE還可以根據(jù)你的不同需求提供定制庫~安徽流式細(xì)胞高通量篩選小分子垂釣等高通量篩選。

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一種廣泛應(yīng)用的HTS技術(shù)是熒光各向異性(FA)/熒光偏振光(FP)。FA和FP方法實(shí)際上通過測(cè)量了染料所經(jīng)歷的旋轉(zhuǎn)相關(guān)時(shí)間或翻滾時(shí)間的變化來表征分子量。在這些技術(shù)中,用偏振光激發(fā)熒光團(tuán),并用平行或垂直于入射光偏振的偏振器測(cè)量熒光發(fā)射。隨著時(shí)間的推移,染料標(biāo)記的分子下降,發(fā)射信號(hào)去極化。與大分子結(jié)合降低了熒光團(tuán)的遷移率,從而增加了極化或各向異性,并允許定量結(jié)合。根據(jù)所涉及的質(zhì)量,選擇染料的壽命以比較大化結(jié)合后的信號(hào)變化。熒光素和羅丹明等有機(jī)染料的壽命約為3-4ns,它們?cè)谶B接到分子量在0.5-10kDa范圍內(nèi)的生物分子時(shí)為敏感。

配備多種通量的自動(dòng)加樣系統(tǒng)(96/384/1536通道),以LED為光源,采用高靈敏度的CCD相機(jī)完成整板信號(hào)的同步加樣和實(shí)時(shí)檢測(cè)(熒光和化學(xué)發(fā)光均能檢測(cè)),準(zhǔn)確再現(xiàn)受體或離子通道快速動(dòng)力學(xué)反應(yīng)過程。適用于生命科學(xué)基礎(chǔ)研究和高通量藥物篩選。同時(shí)FLIPRPenta高通量實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)還提供了一個(gè)新的高速相機(jī)配置和新的PeakPro2軟件模塊,可以幫助您檢測(cè)和分析人iPSC衍生的心肌細(xì)胞和神經(jīng)元的鈣振蕩模式。圖像可以以每秒100次的速度進(jìn)行信號(hào)采集,并使用30多種不同的測(cè)量方法快速分析模式。氨基酸菌種的高通量篩選。

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微生物菌種的改造是現(xiàn)代微生物發(fā)酵行業(yè)中,提高其工業(yè)化生產(chǎn)性能,提高酶和菌的性能非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。而快速高效的高通量篩選方法的建立又是菌株改造中非常重要的一個(gè)環(huán)節(jié)。傳統(tǒng)的微生物快速篩選方法,瓊脂平板法可分為表型活性篩選和表型生長選擇。表型活性篩選利用菌落周圍產(chǎn)生的水解圈、顏色圈或熒光產(chǎn)物等進(jìn)行酶活或目標(biāo)產(chǎn)物篩選;表型生長選擇根據(jù)細(xì)胞對(duì)或其他有害物質(zhì)的抗性或營養(yǎng)缺陷型互補(bǔ),在選擇培養(yǎng)基中依據(jù)生長情況進(jìn)行篩選。瓊脂平板篩選法基于透明圈、顏色圈的瓊脂平板活性篩選或基于營養(yǎng)缺陷型或抗性的瓊脂平板生長選擇可作為簡單易行的初篩方法,用于排除大量無活性和極低活性的突變體。但并不是所有的改造目標(biāo)都能建立瓊脂平板篩選法。瓊脂平板篩選法,是一種簡單直接的篩選方法,已用于多種水解酶(如脂肪酶、酯酶、蛋白酶)和氧化還原酶(如漆酶)等突變庫的初步篩選中。藥物高通量篩選的特點(diǎn)。河南高通量篩選分析

高通量篩選技術(shù)的應(yīng)用。安徽流式細(xì)胞高通量篩選

在1985年之前,先導(dǎo)物的篩選主要是通過人工進(jìn)行的,每周處理的樣本數(shù)量不過幾百個(gè),組合化學(xué)的出現(xiàn)使得科學(xué)家們獲取化合物的方式發(fā)生了變化,他們可以在短時(shí)間內(nèi)合成大量化合物。更重要的是,隨著分子生物學(xué)和功能基因組的研究發(fā)展,使得新穎靶標(biāo)大量增加,這種情況下,緩慢的人工篩選已經(jīng)沒有辦法滿足新藥研發(fā)的要求,高通量篩選技術(shù)的出現(xiàn)縮短了先導(dǎo)物開發(fā)在藥物發(fā)現(xiàn)中的時(shí)間。如今,一個(gè)普通的藥學(xué)高通量篩選實(shí)驗(yàn)室每天篩選的靶標(biāo)已經(jīng)超過10萬個(gè)。安徽流式細(xì)胞高通量篩選

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