常用培養(yǎng)基的制備及注意事項一、實驗目的了解培養(yǎng)基的配制原理；掌握配制培養(yǎng)基的一般方法和步驟；了解常見滅菌、清毒基本原理及方法；掌握干熱天菌、高壓蒸汽滅菌及過濾除菌的操作方法。二、實驗原理培養(yǎng)基是人工按一定比例配制的供微生物生長繁殖和合成代謝產物所需要的營養(yǎng)物質的混合物。培養(yǎng)基的原材料可分為碳源、氮源、無機鹽、生長因素和水。根據(jù)微生物的種類和實驗目的不同，培養(yǎng)基也有不同的種類和配制方法。牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應用較普遍和較普通的細菌基礎培養(yǎng)基，有時又稱為普通培養(yǎng)基。由于這種培養(yǎng)基中含有一般細胞生長繁殖所需要的較基本的營養(yǎng)物質，所以可供微生物生長繁殖之用。干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質變性從而達到殺死微生物的效果。培養(yǎng)基，是指供給微生物、植物或動物（或組織）生長繁殖的，由不同營養(yǎng)物質組合配制而成的營養(yǎng)基質。遼寧大容量 培養(yǎng)基制備器

配制培養(yǎng)基的原則：調節(jié)氧化還原電位(Eh)各種微生物對培養(yǎng)基的Eh要求不同。適宜好氧微生物生長的Eh值一般為+0.3~+0.4V，厭氧微生物只能在+0.1V以下生長，因此，培養(yǎng)好氧微生物必須保證氧的供應，可在培養(yǎng)基中加入氧化劑提高Eh值。調節(jié)滲透壓多數(shù)微生物能耐受較大范圍滲透壓的變化。培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質的濃度過大，會使?jié)B透壓過高，使細胞發(fā)生質壁分離而抑制微生物生長。低滲溶液則使細胞吸水膨脹易破裂，因此，配制培養(yǎng)基時要掌握營養(yǎng)物質的濃度。常在培養(yǎng)基中加人適量的Nacl以提高滲透壓。原料來源的選擇力求節(jié)約：配制培養(yǎng)基還應遵循力求節(jié)約的原則，盡量選用價格便宜、來源方便的原料。特別是在工業(yè)發(fā)酵中，培養(yǎng)基用量大，更應注意利用低成本的原料，降低產品成本。遼寧大容量 培養(yǎng)基制備器一般培養(yǎng)基用0.IMPa(121℃)維持15~30min即可徹底滅菌。

培養(yǎng)基準備器的滅菌：培養(yǎng)基準備器能夠保證快速溫和的制備標準和高敏感性培養(yǎng)基。的加熱冷卻系統(tǒng)加上均勻的攪拌，大程度上減低了對培養(yǎng)基的熱應力，保證了培養(yǎng)基的營養(yǎng)性。培養(yǎng)基準備器的操作高度安全：滅菌開始前，會有一個程序自動檢查整個系統(tǒng)的氣密性，例如：鍋蓋的密封圈是否完好，這能夠避免培養(yǎng)基在滅菌過程中突然漏氣引起卸壓，此外，培養(yǎng)基準備器有4個溫度/壓力檢測器，保證用戶及工作環(huán)境的高度安全。鍋蓋上裝有**的過壓安全保護裝置，在電子檢測系統(tǒng)失效時，自動卸壓以保障安全。

制備培養(yǎng)基的小技巧1.培養(yǎng)基可按制備也可使用按生產的符合規(guī)定的商品化成品培養(yǎng)基，脫水培養(yǎng)基除附有和使用說明外還應注明有效期、貯存條件、適用性試驗的質控菌株和用途。配制時應按使用說明上的要求操作，受潮結塊不能使用，以確保培養(yǎng)基的質量符合要求。2.配制培養(yǎng)基使用的容器應是玻璃器皿或搪瓷器皿如搪瓷筒、量筒、漏斗、三角燒瓶、刻度吸管、試管、培養(yǎng)皿等。使用的器皿應洗凈，用蒸餾水沖凈，烘干后方可使用。禁用金屬容器如鐵、銅、鋁容器，避免金屬離子與培養(yǎng)基成分結合，生成有害物質，影響細菌生長。培養(yǎng)基制備器完全稱取完畢后，還應進行一次檢查。

微生物限度:細胞培養(yǎng)基不是無菌產品，其中的微生物在一定條件下會吸收細胞培養(yǎng)基中的營養(yǎng)物質滋生繁殖，導致細胞培養(yǎng)基變質失效?？刂萍毎囵B(yǎng)基中細菌和霉菌，是延長細胞培養(yǎng)基有效期的方法之一。清大天一在參考《中華人民當?shù)厮幍洹?005版二部附錄第100頁的口服給藥制劑的微生物限度標準，并嚴于該標準，規(guī)定細胞培養(yǎng)基產品的細菌數(shù)每1g不得超過200個，霉菌數(shù)每1g不得超過50個。稱取樣品1g，加入無菌純化水10mL溶解，混勻即得試樣。按中華人民當?shù)厮幍?005年版二部附錄ⅪJ微生物限度檢查法進行，檢查項目為細菌數(shù)、霉菌數(shù)。檢查法采用平皿法。半組合培養(yǎng)基指一類主要以化學試劑配制，同時還加有某種或某些天然成分的培養(yǎng)基。遼寧大容量 培養(yǎng)基制備器

異養(yǎng)微生物的合成能力較弱，不能以CO2作為碳源或主要碳源，故應在培養(yǎng)基中至少添加一種有機物。遼寧大容量 培養(yǎng)基制備器

培養(yǎng)基的配置應該注意的幾大步驟：常用玻璃儀器的準備制備培養(yǎng)基所用的吸管、錐形瓶、毛細吸管、平皿等玻璃儀器用前要用肥皂水洗刷后用清水沖洗干凈，晾干后備用。（1）平皿用紙或布包好，或裝在金屬盒內，于121℃高壓蒸汽菌3min后烘干，備用。（2）試管管口用棉花塞或硅氟塑料試管塞塞好，再用布或報紙包扎好，121℃高壓蒸汽滅菌20℃后烘干，備用。（3）吸管及滴管先用少許棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽內的氣體污染），然后用紙包后或裝入金屬吸管筒內，于121℃高壓蒸汽滅菌20min后烘干，備用。其他玻璃器皿均應按上法處理，也應裝金屬筒內160℃干熱滅菌2h后，備用。遼寧大容量 培養(yǎng)基制備器