培養(yǎng)基制備的九個(gè)步驟關(guān)注要點(diǎn)：步驟一：稱取數(shù)量：用1/100的電子天平稱出培養(yǎng)基所需的藥物。首先參照配方計(jì)算出配制相應(yīng)培養(yǎng)基需要各成分的數(shù)量，然后用電子天平準(zhǔn)確稱取重量。步驟二：培養(yǎng)基溶化：將培養(yǎng)基納入燒杯容器中，加小適量的水，緩慢加水并用玻璃棒小幅度攪拌。倘若培養(yǎng)基中不含瓊脂，則不需要對(duì)培養(yǎng)基加熱；相反含有瓊脂，就需要用本生燈/電磁爐加熱煮沸。步驟三：調(diào)培養(yǎng)基pH：雖然培養(yǎng)基中含有緩沖物質(zhì)，可以盡量使培養(yǎng)基的pH值保持在標(biāo)準(zhǔn)范圍內(nèi)，但如果配制的培養(yǎng)基不能要求，則必須進(jìn)行必要的調(diào)整。如果您有校準(zhǔn)過的pH計(jì)，則可以使用pH計(jì)。步驟四：培養(yǎng)基過濾：如果對(duì)配制的培養(yǎng)基沒有特殊要求，這一步可以省略。步驟五：培養(yǎng)基分裝：準(zhǔn)備好的培養(yǎng)基根據(jù)用途不同分為燒瓶、試管等容器，分裝試管量大采用自動(dòng)分液器，分裝試管量小，可以用漏斗分液。確定這批培養(yǎng)基的較終pH值。步驟六：培養(yǎng)基滅菌處理：分裝完成的培養(yǎng)基應(yīng)馬上滅菌。高壓蒸汽滅菌一般使培養(yǎng)基pH降低，應(yīng)在配制培養(yǎng)基時(shí)加以調(diào)節(jié)。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家

培養(yǎng)基的稱量和溶解：小心稱量所需量的脫水合成培養(yǎng)基（必要時(shí)佩戴口罩或在通風(fēng)柜中操作，以防吸入含有有毒物質(zhì)的培養(yǎng)基粉末），先加入適量的水，充分混合（注意避免培養(yǎng)基結(jié)塊），然后加水至所需的量后適當(dāng)加熱，并重復(fù)或連續(xù)攪拌使其快速分散，必要時(shí)應(yīng)完全溶解。含瓊脂的培養(yǎng)基在加熱前應(yīng)浸泡幾分鐘。注意：培養(yǎng)基的加熱溶解或高溫滅菌盛放使用的容器不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養(yǎng)基中，使細(xì)菌不易生長(zhǎng)。較好使用不銹鋼鍋加熱溶化，可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動(dòng)蒸汽消毒器中蒸煮溶化。在鍋中溶化時(shí)、可先用溫水加熱并隨時(shí)攪動(dòng)、以防焦化、如發(fā)現(xiàn)有焦化現(xiàn)象、該培養(yǎng)基即不能使用，應(yīng)重新制備。河北自動(dòng)攪拌培養(yǎng)基制備器全自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn)：儀器蓋設(shè)計(jì)保護(hù)鎖，超過100度自動(dòng)加鎖，使實(shí)驗(yàn)環(huán)境更安全。

培養(yǎng)基配制：配制用水，培養(yǎng)基的大部分是水，所以水的質(zhì)量直接影響培養(yǎng)基的質(zhì)量。按Waymouth標(biāo)準(zhǔn)，水的電阻應(yīng)為200萬(wàn)歐姆，一般實(shí)驗(yàn)室里以玻璃蒸餾器制備的雙蒸水或三蒸水可以符合使用條件。培養(yǎng)基：培養(yǎng)基有天然、人工兩種。一般實(shí)驗(yàn)室使用的是RPMI-1640粉末培養(yǎng)基，以雙蒸或三蒸水配制。NaHCO3（或HCl）調(diào)pH至7.2-7.4，若pH值超過7.6或遠(yuǎn)低于6.8，則大多數(shù)細(xì)胞不能生長(zhǎng)。RPMI-1640不耐高壓滅菌，使用前需經(jīng)滅菌0.22μm孔徑濾膜濾過處理。血清：培養(yǎng)中常使用小牛血清（或胎牛血清）。血清亦不能高壓滅菌，無菌的小牛血清需在56℃水浴30分鐘滅活補(bǔ)體，置4℃冰箱存放待用。配制時(shí)含量視培養(yǎng)細(xì)胞種類、時(shí)間而定，一般用10—15%。由于血清成分復(fù)雜、條件不易控制，可選用無血清培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基的實(shí)驗(yàn)室制備：1.pH的測(cè)定和調(diào)整：用pH計(jì)測(cè)定pH,必要時(shí)在滅菌前調(diào)節(jié)pH，除特殊說明外,培養(yǎng)基滅菌后冷卻至25℃時(shí),要求pH的變化不超過0.2pH單位.通常使用濃度約為40g/L(約1mol/L)的氫氧化鈉溶液或濃度約為36.5g/L（約1mol/L)的鹽酸溶液調(diào)節(jié)pH。如果滅菌后調(diào)節(jié)pH，溶液需滅菌。注:商品化培養(yǎng)基在高壓滅菌前后pH可能發(fā)生明顯變化,但使用蒸餾水或去離子水時(shí),滅菌前無需調(diào)節(jié)pH。2.分裝：將配置好的培養(yǎng)基分裝到適當(dāng)?shù)娜萜髦?，容器的體積至少為體積的1.2倍。制備培養(yǎng)基的操作要點(diǎn)：固體培養(yǎng)基在液體培養(yǎng)基中加入適量的凝固劑即成固體培養(yǎng)基。

培養(yǎng)基的質(zhì)量測(cè)試：每批培養(yǎng)基制備好以后，應(yīng)仔細(xì)檢查一遍，如發(fā)現(xiàn)破裂、水分浸入、色澤異常、棉塞被培養(yǎng)基沾染等、均應(yīng)挑出棄去。并測(cè)定其好終pH。將全部培養(yǎng)基放入36±1°C恒溫箱培養(yǎng)過夜，如發(fā)現(xiàn)有菌生長(zhǎng)，即棄去。用有關(guān)的標(biāo)準(zhǔn)菌株接種1~2管或瓶培養(yǎng)基，培養(yǎng)24~48小時(shí)，如無菌生長(zhǎng)或生長(zhǎng)不好。應(yīng)追查原因并重復(fù)接種一次，如結(jié)果仍同前，則該批培養(yǎng)基即應(yīng)棄去，不能使用。培養(yǎng)基的保存：培養(yǎng)基應(yīng)存放于冷暗處，好好能放于普通冰箱內(nèi)。放置時(shí)間不宜超過一周，傾注的平板培養(yǎng)基不宜超過3天。每批培養(yǎng)基均必須附有該批培養(yǎng)基制備記錄副頁(yè)或明顯標(biāo)簽。全自動(dòng)培養(yǎng)基制備儀主要特點(diǎn)：溫度探頭測(cè)量培養(yǎng)基實(shí)際溫度，控溫很準(zhǔn)。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家

培養(yǎng)基制備器不存在意外打開，保證了環(huán)境和操作者的安全。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家

天然培養(yǎng)基中血清主要作用：對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用：有一些細(xì)胞，如內(nèi)皮細(xì)胞、骨髓樣細(xì)胞可以釋放蛋白酶，血清中含有抗蛋白酶成分，起到中和作用。這種作用是偶然發(fā)現(xiàn)的，則有目的的使用血清來終止胰蛋白酶的消化作用。因?yàn)橐鹊鞍酌敢呀?jīng)被較廣用于貼壁細(xì)胞的消化傳代。血清蛋白形成了血清的粘度，可以保護(hù)細(xì)胞免受機(jī)械損傷，特別是在懸浮培養(yǎng)攪拌時(shí)，粘度起到重要作用。血清還含有一些微量元素和離子，他們?cè)诖x中起重要作用，如SeO3、硒等。培養(yǎng)基消毒 培養(yǎng)基制備器廠家