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杭州支原體檢測方法PCR法
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發(fā)布時間：2024-07-22
細(xì)胞培養(yǎng)過程中如果發(fā)現(xiàn)支原體污染，可以采取以下一些方法嘗試去除污染：
1. 抗*素治*：使用針對支原體有效的抗*素，如四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類、氟喹諾酮類等。根據(jù)搜索結(jié)果，可以加入高濃度抗*素進行沖擊治*，例如慶大霉素 200ug/ml，四環(huán)素10ug/ml，卡那霉素50ug/ml，并維持24-48小時后再換入常規(guī)培養(yǎng)液。
2. 加溫處理：支原體不耐熱，可以將細(xì)胞置于41°C中處理5-10小時以殺滅支原體。但需注意，高溫也可能對細(xì)胞造成傷害，因此需要預(yù)先確定對細(xì)胞影響較小的處理時間。
3. 使用支原體清除劑：市場上有專門的支原體清除劑，按照產(chǎn)品說明使用。
4. 使用支原體清*培養(yǎng)基：如Procell支原體清*培養(yǎng)基，這類產(chǎn)品含有清*支原體的特殊成分，可以抑制支原體生長并挽救珍貴細(xì)胞。
5. 物理方法：一些實驗室采用過濾的方法，使用0.22μm或更小孔徑的濾膜過濾培養(yǎng)基和試劑，以阻止支原體的侵入。
6. 細(xì)胞傳代：在一些情況下，通過細(xì)胞傳代可能有助于減少支原體的污染程度。
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支原體是細(xì)胞外生存的 小微生物，是一類缺乏細(xì)胞壁的原核細(xì)胞型微生物，大小一般在0.2~0.5um之間，呈高度多形性，有球形、桿形、絲形、分枝狀等多種態(tài)。
1、支原體存在于我們周圍，他可能就如塵埃一樣存在于我們的環(huán)境中
2、可透過一般的濾膜，所以不要寄希望于過濾可以清楚支原體污染的液體
支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率高，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。同時又非常隱秘，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非用特異性和靈敏度都非常高的檢測試劑盒。支原體因為個頭小，能穿過0.22微米濾器，并且在實驗室內(nèi)會潛在的擴散。支原體污染使得用被污染的細(xì)胞樣本做的實驗完全失去意義和價值。
溫州細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑貨期支原體污染源和主要類型？
目前有 210 +種不同種類的支原體分布于人類、動物、昆蟲和植物中，其中 20 +種在細(xì)胞培養(yǎng)中被發(fā)現(xiàn)為污染物。支原體在實驗室中的傳播來源多種多樣，主要來源包括實驗室人員、胎牛血清（FBS）或新生牛血清（NBS）、以及由豬來源的胰蛋白酶溶液。此外，來自其他實驗室或商業(yè)供應(yīng)商的細(xì)胞培養(yǎng)物、培養(yǎng)基、污染的試劑；非無菌供應(yīng)品、培養(yǎng)基和溶液；實驗室人員；培養(yǎng)箱；液氮；空氣顆粒和氣溶膠；抗*素的過度使用；細(xì)胞培養(yǎng)器皿的不正確密封；以及其他的支原體細(xì)胞培養(yǎng)物等都可能成為支原體的傳播途徑。
細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體檢測的重要性體現(xiàn)在以下幾個方面：
1. 高污染發(fā)生率：支原體對培養(yǎng)細(xì)胞的污染發(fā)生率非常高，據(jù)估計平均發(fā)生率在60%左右。
3. 隱匿性強：支原體污染具有很高的隱匿性，早期不容易被發(fā)現(xiàn)，除非使用特異性和靈敏度都非常高的專業(yè)檢測試劑盒。
3. 影響實驗結(jié)果：支原體污染會改變細(xì)胞的生理性質(zhì)，影響實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。細(xì)胞培養(yǎng)物一旦被支原體污染，會改變細(xì)胞DNA、RNA及蛋白表達，導(dǎo)致實驗數(shù)據(jù)不準(zhǔn)確、不穩(wěn)定。
4. 難以通過肉眼或常規(guī)方法發(fā)現(xiàn)：支原體污染無法通過肉眼檢查細(xì)胞來發(fā)現(xiàn)，也不能通過向培養(yǎng)基中加入抗*素控制。
5. 對細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)可靠性的影響：支原體污染會降低細(xì)胞系的有效性，使得細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)失去可靠性，無法為生命科學(xué)研究提供有意義的數(shù)據(jù)。
6. 預(yù)防和控制污染的必要性：定期進行支原體檢測是細(xì)胞培養(yǎng)實驗室進行自我質(zhì)量監(jiān)控的必要組成部分，有助于及時發(fā)現(xiàn)并控制污染，保證實驗的準(zhǔn)確性和重復(fù)性。
7. 避免細(xì)胞株受損：支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞株受損，影響細(xì)胞株的質(zhì)量和研究價值。及時檢測和清*支原體污染有助于保護珍貴的細(xì)胞資源
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支原體去除試劑在清*支原體的過程中可能會對細(xì)胞的生長狀態(tài)產(chǎn)生一定的影響。支原體去除試劑是一種非抗*素類試劑，它通過與支原體膜特異性結(jié)合，改變支原體膜的通透性，從而導(dǎo)致支原體破裂死亡。盡管該產(chǎn)品在作用期間可能會對細(xì)胞的活力和形態(tài)有一定的影響，但由于它不能穿過真核細(xì)胞的細(xì)胞膜，因此不會改變細(xì)胞的任何特性。支原體被清*后，細(xì)胞在后續(xù)的傳代過程中能快速恢復(fù)其正常的生長和增殖狀態(tài)，細(xì)胞后續(xù)的生長增殖幾乎無影響。
此外，該產(chǎn)品不含抗*素，不會使支原體發(fā)生耐藥反應(yīng)，細(xì)胞毒性小。然而，需要注意的是，不同細(xì)胞對支原體去除試劑的耐受程度有所差異，可以根據(jù)實驗結(jié)果適當(dāng)調(diào)整細(xì)胞量和處理條件。在某些情況下，如果出現(xiàn)細(xì)胞變形、生長緩慢等現(xiàn)象，可以更換成標(biāo)準(zhǔn)培養(yǎng)液終止作用，或者調(diào)整去除試劑的使用濃度和作用時間。
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細(xì)胞培養(yǎng)中支原體難以徹底消滅的原因主要包括以下幾點：
1. 無細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)：支原體是沒有細(xì)胞壁的微生物，這使得許多作用于細(xì)胞壁的抗*素對支原體無效。
2. 微小體積：支原體體積小，能夠穿過常規(guī)的除菌濾膜，例如0.20微米甚至0.10微米的濾膜。
3. 隱匿性：支原體污染初期很難被察覺，它們在普通光學(xué)顯微鏡下幾乎不可見，因此細(xì)胞被支原體污染后，前期很難被發(fā)現(xiàn)。
4. 傳播途徑多樣：支原體可以通過細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞懸液、細(xì)胞培養(yǎng)用具等途徑迅速傳播。
5. 污染源 ：支原體污染源包括細(xì)胞間的交叉污染、操作人員的口腔、皮膚，以及細(xì)胞培養(yǎng)用的組分如血清、培養(yǎng)液等。
6. 環(huán)境因素：實驗室環(huán)境、試驗臺、超凈臺、培養(yǎng)箱等可能被支原體污染，引起細(xì)胞的污染。
7. 抗*素耐藥性：支原體可能對某些抗*素產(chǎn)生耐藥性，使得治*效果變差。
8. 檢測和清理方法的局限性：一些傳統(tǒng)的支原體檢測和清理方法可能不夠靈敏或有效，導(dǎo)致難以徹底清理支原體
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