南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑貨期

來源：發(fā)布時(shí)間：2024-07-15

方法	靈敏度	優(yōu)勢(shì)	劣勢(shì)
培養(yǎng)法	☆☆☆	ü 便捷 ü 便宜 ü 金標(biāo)準(zhǔn)	ü 費(fèi)勞力 ü 耗時(shí)長 ü 需要特定的培養(yǎng)基 ü 特定支原體種類需要特定的培養(yǎng)基
DNA染色 (DAPI or Hoescht)	☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 可能難以判讀結(jié)果 ü 無法鑒別支原體種屬 ü 可能假陽性可能性
間接染色	☆☆☆	ü 迅速 ü 便宜 ü 易檢測(cè)	ü 費(fèi)時(shí) ü 需要細(xì)胞系指示
ELISA	☆☆	ü 迅速 ü 客觀，易判讀結(jié)果 ü 可以鑒別支原體種屬	ü 受抗體限制 ü 價(jià)格高
免疫染色	☆☆	ü 迅速 ü 可檢測(cè)支原體種屬 ü 價(jià)格略高	ü 可檢測(cè)的支原體種屬有限
放射自顯影	☆☆	ü 迅速	ü 難以判讀結(jié)果 ü 無法鑒別支原體種屬 ü 費(fèi)勞力
生物發(fā)光	☆☆	ü 迅速 ü 便捷 ü 便宜	ü 難以判讀結(jié)果 ü 無法鑒別支原體種屬
PCR	☆☆☆	ü 便宜 ü 迅速 ü 具有特異性	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
Real-Time PCR	☆☆☆	ü 便捷 ü 迅速 ü 具有特異性 ü 結(jié)果可靠 ü 高通量	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性 ü 需要提取DNA
LAMP	☆☆	ü 便捷 ü 無需DNA提取 ü *需10min左右的實(shí)驗(yàn)操作時(shí)間 ü 具有特異性 ü 高通量	ü 可能假陽性可能性 ü 檢測(cè)特異性依賴引物特異性細(xì)胞培養(yǎng)中，支原體檢測(cè)的重要性？南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑貨期

支原體污染一旦發(fā)生，不僅對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)造成嚴(yán)重影響，甚至可能導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)結(jié)果失真。而且支原體污染在細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)中相當(dāng)常見。因此，預(yù)防措施是確保細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境和實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性的重要手段。

01/ 良好的無菌技術(shù)及實(shí)驗(yàn)操作，保證操作不會(huì)引入新的污染

02/ 保持實(shí)驗(yàn)空間的清潔

03/ 確保從可靠的來源獲取細(xì)胞，減少不同細(xì)胞之間的交叉?zhèn)魅?/span>

04/ 防止交叉污染

05/ 減少氣溶膠生成

06/ 謹(jǐn)慎使用抗*素

07/ 定期支原體篩查

08/ 丟棄或處理受到支原體污染的細(xì)胞

09/ 保持良好的記錄

溫州支原體檢測(cè)試劑貨期支原體污染源和主要類型？

一步法快速支原體檢測(cè)的原理主要基于等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)，這是一種在恒定溫度下進(jìn)行的核酸擴(kuò)增方法。以下是具體的步驟和原理：

1. 等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)：一步法快速支原體檢測(cè)試劑盒利用LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification，環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增）技術(shù)或類似的等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)。這些技術(shù)允許在恒定溫度下進(jìn)行DNA的快速擴(kuò)增，通常在60-65°C之間。

2. 特異性引物：該方法使用設(shè)計(jì)好的特異性引物，這些引物靶向支原體DNA的保守區(qū)域。引物的設(shè)計(jì)確保了擴(kuò)增過程的特異性，從而減少非目標(biāo)序列的擴(kuò)增。

3. 快速擴(kuò)增：在適宜的條件下，等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)可以在15至60分鐘內(nèi)實(shí)現(xiàn)高達(dá)10^9至10^10倍的核酸擴(kuò)增，從而快速檢測(cè)出支原體的存在。

4. 顏色變化指示：一步法試劑盒中通常包含有顏色指示劑，當(dāng)支原體DNA被擴(kuò)增時(shí)，反應(yīng)液的顏色會(huì)發(fā)生變化，從而可以通過肉眼直接觀察到檢測(cè)結(jié)果。例如，從藍(lán)紫色變?yōu)樘焖{(lán)色，表示樣本中存在支原體。

5. 操作簡(jiǎn)便：一步法支原體檢測(cè)不需要復(fù)雜的設(shè)備，通常只需要水浴鍋或PCR儀即可完成操作，使得檢測(cè)過程更加簡(jiǎn)便快捷。

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果產(chǎn)生多方面的影響，具體包括：

1. 細(xì)胞生長受影響：支原體污染可能導(dǎo)致細(xì)胞生長速度減慢，甚至停滯。

2. 細(xì)胞形態(tài)改變：支原體感*的細(xì)胞可能會(huì)出現(xiàn)形態(tài)的改變，如細(xì)胞體積增大、形態(tài)不規(guī)則等。

3. 細(xì)胞功能改變：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞的代謝、增殖、分化等生理功能。

4. 細(xì)胞產(chǎn)物改變：支原體感*可能影響細(xì)胞產(chǎn)生的蛋白質(zhì)、細(xì)胞因子等生物活性物質(zhì)的表達(dá)和分泌。

5. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確：支原體污染會(huì)干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)不可靠。

6. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差：支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)批次間差異大，影響實(shí)驗(yàn)的重復(fù)性。

7. 影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)：支原體污染的細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，如轉(zhuǎn)染、基因編輯等，可能會(huì)影響實(shí)驗(yàn)效果。

8. 影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量：支原體污染會(huì)影響細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的質(zhì)量，如疫苗、生物制品等。

9. 增加研究成本：支原體污染需要花費(fèi)額外的時(shí)間和成本進(jìn)行檢測(cè)、處理和重復(fù)實(shí)驗(yàn)。

科研中常見的支原體檢測(cè)方法？

支原體檢測(cè)實(shí)驗(yàn)方法需要考慮以下幾個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)：

1. 樣本的采集與處理：確保樣本的采集和處理過程符合無菌操作規(guī)范，避免交叉污染。

2. 實(shí)驗(yàn)操作的標(biāo)準(zhǔn)化：制定詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)操作流程，包括樣本接種、培養(yǎng)條件、觀察時(shí)間點(diǎn)等，以保證實(shí)驗(yàn)的可重復(fù)性和準(zhǔn)確性。

3. 使用適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基：根據(jù)支原體的特性選擇合適的培養(yǎng)基，如支原體肉湯4. 培養(yǎng)基、精氨酸支原體肉湯培養(yǎng)基等，并確保培養(yǎng)基的靈敏度和特異性。

5. 設(shè)置對(duì)照組：實(shí)驗(yàn)中應(yīng)包括陽性對(duì)照和陰性對(duì)照，以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)方法的有效性和排除假陽性或假陰性結(jié)果。

支原體污染和黑膠蟲污染有什么區(qū)別？細(xì)胞培養(yǎng)支原體檢測(cè)如何取樣

細(xì)胞培養(yǎng)中支原體污染的后果？南京細(xì)胞培養(yǎng)支原體預(yù)防試劑貨期

支原體去除的實(shí)驗(yàn)步驟通常包括以下幾個(gè)階段：

1. 支原體檢測(cè)：在進(jìn)行去除之前，首先要確認(rèn)細(xì)胞培養(yǎng)物是否受到支原體污染。這可以通過多種方法實(shí)現(xiàn)，如PCR法、LAMP法或支原體培養(yǎng)法。

2. 選擇合適的去除試劑：一旦確認(rèn)存在支原體污染，需要選擇一種有效的去除試劑。

3. 去除試劑的添加：根據(jù)去除試劑的說明書，將試劑添加到受污染的細(xì)胞培養(yǎng)基中。通常，這涉及到將一定比例的去除試劑加入到細(xì)胞培養(yǎng)液中。

4. 孵育：添加去除試劑后，將細(xì)胞培養(yǎng)物放回培養(yǎng)箱中孵育。孵育時(shí)間和條件（如溫度、CO2濃度）應(yīng)根據(jù)試劑的推薦進(jìn)行調(diào)整。

5. 監(jiān)測(cè)去除效果：在孵育過程中，定期監(jiān)測(cè)細(xì)胞的狀態(tài)和去除效果。這可能包括觀察細(xì)胞形態(tài)、生長速率的變化，以及通過顯微鏡檢查是否有支原體存在的跡象。

6. 后續(xù)檢測(cè)：去除過程完成后，再次使用支原體檢測(cè)方法確認(rèn)污染是否已被成功。

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標(biāo)簽：支原體免疫沉淀

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