免疫沉淀技術(shù)(Immunoprecipitation, IP)是一種利用抗體與特定蛋白質(zhì)結(jié)合的特性,從復(fù)雜樣本中分離和純化目標(biāo)蛋白質(zhì)的實(shí)驗(yàn)方法。這項(xiàng)技術(shù)在生物醫(yī)學(xué)研究中有著廣泛的應(yīng)用場(chǎng)景,以下是一些主要的應(yīng)用領(lǐng)域:
1. 蛋白質(zhì)相互作用分析:通過免疫沉淀技術(shù),研究人員可以研究蛋白質(zhì)之間的相互作用,揭示蛋白質(zhì)復(fù)合物的組成以及它們?cè)诩?xì)胞內(nèi)的功能和調(diào)控機(jī)制。
2. 抗體藥物開發(fā):免疫沉淀技術(shù)可以用于研究抗體藥物與其靶標(biāo)蛋白的結(jié)合特性,評(píng)估抗體藥物的親和力和特異性,指導(dǎo)抗體藥物的設(shè)計(jì)和優(yōu)化。
3. 蛋白質(zhì)表達(dá)水平分析:通過比較不同條件下的免疫沉淀結(jié)果,可以評(píng)估目標(biāo)蛋白的相對(duì)量,進(jìn)而研究蛋白質(zhì)的表達(dá)調(diào)控。
4. 染色質(zhì)免疫沉淀(ChIP):這是一種特殊的免疫沉淀技術(shù),用于研究蛋白質(zhì)與DNA的相互作用,如轉(zhuǎn)錄因子或組蛋白修飾與基因組特定區(qū)域的結(jié)合情況。
5. RNA免疫沉淀(RIP):類似于ChIP,RIP用于研究RNA結(jié)合蛋白與RNA分子之間的相互作用。
免疫沉淀的原理是什么?溫州RIP免疫沉淀磁珠哪個(gè)公司好用
免疫共沉淀分析(Co-IP)與IP十分類似,基本的技術(shù)都是采用目標(biāo)抗原特異性的固相化抗體;但I(xiàn)P的目標(biāo)是純化單一抗原,而Co-IP旨在分離抗原及與抗原結(jié)合的蛋白質(zhì)或配體。
在Co-IP實(shí)驗(yàn)中,已知抗原稱為誘餌蛋白,與之結(jié)合的蛋白則稱為靶蛋白。靶蛋白可能是一些復(fù)雜的伴侶蛋白、信號(hào)分子、結(jié)構(gòu)蛋白、輔助因子等,蛋白間相互作用強(qiáng)度范圍可能介于高度瞬時(shí)和十分穩(wěn)定之間。
基本的Co-IP實(shí)驗(yàn)方案與IP相同,實(shí)際上任何IP系統(tǒng)均可用于Co-IP。但是,還有許多其他因素需要考慮,例如,結(jié)合和洗滌條件的優(yōu)化,優(yōu)化時(shí),需要考慮到誘餌蛋白-靶蛋白的相互作用強(qiáng)度以及抗體-誘餌蛋白的親和力。
北京RIP免疫沉淀技術(shù)服務(wù)免疫沉淀ChIP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠?
RIP 技術(shù)的原理(RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RNA 結(jié)合蛋白免疫沉淀)主要是運(yùn)用針對(duì)目標(biāo)蛋白的抗體把相應(yīng)的RNA-蛋白復(fù)合物沉淀下來(lái),經(jīng)過分離純化就可以對(duì)結(jié)合在復(fù)合物上的RNA 進(jìn)行q-PCR驗(yàn)證或者測(cè)序分析。
RIP 是研究細(xì)胞內(nèi)RNA 與蛋白結(jié)合情況的技術(shù),是了解轉(zhuǎn)錄后調(diào)控網(wǎng)絡(luò)動(dòng)態(tài)過程的有力工具。RIP可以看成是普遍使用的染色質(zhì)免疫沉淀ChIP技術(shù)的類似應(yīng)用,但由于研究對(duì)象是RNA-蛋白復(fù)合物而不是DNA-蛋白復(fù)合物,RIP實(shí)驗(yàn)的優(yōu)化條件與ChIP實(shí)驗(yàn)不太相同,如:RIP反應(yīng)體系中的試劑和抗體不能含有RNA酶,抗體需經(jīng)RIP實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證等等。
免疫沉淀(RIP)實(shí)驗(yàn)中抗體的選擇非常關(guān)鍵,因?yàn)榭贵w的特異性和親和力直接影響到實(shí)驗(yàn)的成功與否。
1. 特異性:抗體應(yīng)當(dāng)對(duì)目標(biāo)蛋白具有高度的特異性,以避免與其他蛋白發(fā)生非特異性結(jié)合,導(dǎo)致假陽(yáng)性結(jié)果。
2. 親和力:抗體對(duì)目標(biāo)蛋白的親和力要足夠高,以確保在免疫沉淀過程中能夠有效地捕獲目標(biāo)蛋白。
3. 抗體類型:?jiǎn)慰寺】贵w和多克隆抗體都可以用于IP實(shí)驗(yàn)。單克隆抗體提供更高的特異性和批間一致性,而多克隆抗體可能提供更強(qiáng)的結(jié)合能力和更廣的表位覆蓋。
4. 應(yīng)用驗(yàn)證:選擇已經(jīng)過免疫沉淀(RIP)或相關(guān)應(yīng)用(如Western blot, IHC)驗(yàn)證的抗體,這增加了實(shí)驗(yàn)成功的可能性。
5. 供應(yīng)商信息:選擇信譽(yù)良好的抗體供應(yīng)商,并查看供應(yīng)商提供的技術(shù)數(shù)據(jù)和客戶評(píng)價(jià),以幫助做出決策。
免疫沉淀抗體的選擇?
免疫沉淀技術(shù)的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)通常包括以下幾個(gè)關(guān)鍵步驟:
1. 目標(biāo)蛋白質(zhì)的選擇:
2. 抗體的選擇:選擇特異性強(qiáng)、親和力高的抗體來(lái)捕獲目標(biāo)蛋白質(zhì)
3. 樣本的準(zhǔn)備:收集和準(zhǔn)備細(xì)胞或組織樣本。
4. 蛋白質(zhì)的裂解和釋放:選擇合適的裂解條件,如pH值、離子強(qiáng)度、去污劑等。
5. 蛋白質(zhì)濃度的測(cè)定:確定裂解液中蛋白質(zhì)的濃度,以便于后續(xù)步驟的標(biāo)準(zhǔn)化。
6. 免疫沉淀的操作:將特異性抗體與裂解液混合,并在適宜的條件下孵育,以形成抗體-抗原復(fù)合物。
7. 非特異性結(jié)合的減少:通過預(yù)純化步驟去除可能的非特異性結(jié)合蛋白。
8. 洗滌:多次洗滌以去除未結(jié)合的蛋白質(zhì)和雜質(zhì)。
9. 目標(biāo)蛋白質(zhì)的洗脫:使用適當(dāng)?shù)木彌_液洗脫抗體-抗原復(fù)合物。
10. 后續(xù)分析:對(duì)洗脫的蛋白質(zhì)進(jìn)行進(jìn)一步分析,如Western Blot.
11. 對(duì)照實(shí)驗(yàn):設(shè)計(jì)適當(dāng)?shù)恼龑?duì)照和負(fù)對(duì)照,以評(píng)估實(shí)驗(yàn)的特異性和敏感性。
免疫沉淀RIP技術(shù)選瓊脂糖珠還是磁珠?北京RIP免疫沉淀技術(shù)服務(wù)
免疫沉淀樣本的制備。溫州RIP免疫沉淀磁珠哪個(gè)公司好用
免疫沉淀ChIP實(shí)驗(yàn)中磁珠還是瓊脂糖珠的選擇取決于客戶實(shí)驗(yàn)情況。
瓊脂糖珠海綿狀的結(jié)構(gòu) (直徑 50-150 μm) 可以結(jié)合抗體 (繼而結(jié)合靶蛋白) ,它能夠直接高效、快速結(jié)合抗體,而不需借助特殊的專業(yè)設(shè)備。瓊脂糖珠呈多孔結(jié)構(gòu),這使得它們擁有更大的表面積可與蛋白質(zhì)相互接觸,具有更高的結(jié)合載量。
與瓊脂糖珠不同,磁珠是固體,抗體的結(jié)合限于磁珠的表面。磁珠 (直徑 1-4 μm) 明顯小于瓊脂糖珠 ,盡管磁珠沒有多孔中心增加結(jié)合能力,但每體積的磁珠數(shù)量比瓊脂糖珠多,使磁珠擁有足夠的抗體結(jié)合表面積滿足高容量的抗體結(jié)合。
簡(jiǎn)而言之,瓊脂糖珠的結(jié)合能力較強(qiáng),而磁珠在得率,可重復(fù)性以及自動(dòng)化方面有明顯的優(yōu)勢(shì)。
溫州RIP免疫沉淀磁珠哪個(gè)公司好用