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內標在傳統(tǒng)定量中的作用，由于傳統(tǒng)定量方法都是終點檢測，即PCR到達平臺期后進行檢測，而PCR經過對數期擴增到達平臺期時，檢測重現性極差。同一個模板在96孔PCR儀上做96次重復實驗，所得結果有很大差異，因此無法直接從終點產物量推算出起始模板量。加入內標后，可部...

實時熒光定量PCR：實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：Ct...

膜片鉗操作實驗：標本制備根據研究目的的不同，可采用不同的細胞組織，如心肌細胞、平滑肌細胞、細胞等，現在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞，必須滿足實驗要求，一般多采用酶解分離法，也可采用細胞培養(yǎng)法；另外，由于與分子生物學技術的結合，現在也運用分子...

Real-time PCR與普通PCR的實驗目的不同，所以對引物的設計要求也不同。普通PCR的實驗目的只是為了獲得目的基因產物，允許有非特異擴增，只要目標條帶清晰明亮，就可以通過切膠回收的方法回收目標條帶，之后進行后續(xù)的克隆、測序。但Real-time PCR...

膜片鉗的數據如何處理：全細胞式膜片方式使細胞內與浴槽之間的漏流極少。電極本身阻抗(1~10mω)與細胞封接后的阻抗相比較低,這種低接觸阻抗使單管電壓鉗容易實現。電極管內與細胞之間彌散交換與平衡快,因而容易控制細胞內液的成分。細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有...

一種電生理膜片鉗灌流裝置的制造方法：為了測量在不同藥物對細胞中的離子通道的影響，通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。例如，需要檢驗某種是否對某種離子通道的影響，則需要在細胞封接后記錄電流數據，然后通過在細胞周圍快速給藥再次記錄電流數據即可對比數據判斷該對離子通道的...

膜片鉗電生理記錄技術：膜片鉗技術的基本原理：膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面，使之形成10~100MΩ的高阻封接，被孤立的小膜片面積為微米數量級，因此封接范圍內細胞膜光有少數離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位，測量單個離子通道開放產生的微小電流，這種...

實時熒光定量PCR：實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據標準曲線獲得定量結果。因此，實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的：Ct...

膜片鉗實驗的細胞膜型：一個完整的細胞膜電學模型包含幾個基本組分：膜電容，膜電阻和膜電勢。這三個電學組分形成的原因各不相同：1、膜電容（membranecapacitance,Cm）的形成是由于生物膜為磷脂雙分子層，對離子和其他水溶性物質均不通透，遂使細胞膜成為...

Real-time PCR鏈反應：嵌套聚合酶鏈反應:通過減少DNA非特異性擴增的背景，提高DNA擴增的特異性。兩組引物用于兩個連續(xù)的PCR。在個反應中，一對引物用于產生DNA產物，除了預期的靶之外，該產物可能仍然由非特異性擴增的DN段組成。然后用一組引物將產物...

為何血清會存在批間差？如何避免此影響？因為血清來源于動物，其組成成分有1000種左右，每個批號的組分和組分含量都是不固定的，因此批間差異是可能存在的。為了避免批間差異對細胞的影響，XP建議先進行批號測試，篩選合適的批號，備好庫存（血清未開封時，在-20℃下可保...

胎牛顧名思義就是指還在母牛身體里的小牛，所以胎牛血清的采集工作，便是先從懷孕中的母牛身體里取出胎牛（通常5-8個月胎齡），之后對未發(fā)育完全的胎牛的心臟穿刺取血，完成的工作以后便再通過一系列的工藝處理獲得胎牛血清。而新生牛血清主要是采集已出生10天內的小牛，而且...

胎牛血清是一種性狀、外觀 淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。胎牛血清應取自剖腹產的胎牛；新牛血清取自出生24小時之內的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。顯然，胎牛血清是品質較為高的，因為胎牛還未接觸外界，血清中所含的抗體、補體等對細胞有害的成分較...

熱滅活：一般是以56℃，30分鐘來處理已解凍的血清，因為此加熱步驟，可以使補體去活化，而補體所參與的反應有：溶細胞活性，平滑肌的收縮，肥大細胞和血小板組胺的釋放，增強吞噬作用，淋巴細胞、巨噬細胞的趨化和。有必要做熱滅活嗎?實驗顯示，經過正確處理的熱滅清，對大多...

胎牛血清和新生牛血清的區(qū)別是什么？取血年齡不同：牛血清按照牛取血時間或牛齡可進行區(qū)分。胎牛血清指的是取自未出生，母牛剖腹得來的胎牛。國產胎牛血清（并無明確定義，但通常以此稱）的指的是出生4-6小時，且未進行哺乳進食的牛，有時還稱作國產新生牛。 新生牛血清指的是...

很好的胎牛血清：微生物，包括細菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原毒等。隨著國內血清廠家生產條件的改善提高，細菌、霉菌等“大型”微生物幾乎能100%控制，支原體經過0.1μm過濾，大多也能消除。大腸桿菌噬菌體的污染還是比較嚴重的，主要是生產環(huán)境過程中帶入，又無法...

較為低血清試驗的要求。內有毒的檢測：內有毒的，又叫脂多糖（LPS）或脂寡糖（LOS），存在于革蘭氏陰性菌的細胞外膜。臨床上，內有毒的作為一些革蘭氏陰性菌的診斷提示，如腦膜炎球菌。動物體內，內有毒的能夠導致發(fā)熱或者誘導炎癥反應；細胞培養(yǎng)中，內有毒的能夠誘導細胞反...

國內科研人員購買胎牛血清的現狀：難辨真假。 原因很多，一方面是國內血清市場這幾年是愈發(fā)的混亂了，很多商家都盯上了這塊“蛋糕”，現在國內市場能見到的各種來源的血清品牌大于50種，使用者在不了解國家政策和相關知識的前提下很難去辨別和選擇安全、穩(wěn)定、合規(guī)的胎牛血清。...

血清的保存應該注意：熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已完全解凍的血清。加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻，此熱處理的目的是使血清中的補體成分(complement)滅活，除非必須，一般不建議作此熱處理，因為熱處理會造成血清沉淀物明顯增多，而且還會影響血清的質量，補體參與反...

小牛血清和胎牛血清有何區(qū)別與注意事項？來源不同：胎牛血清 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清采自出生10至14 天的小牛。組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、及其他活性物質等組份與比例不同，用途與用法不同...

購買回來的血清都是冰凍狀態(tài),使用時需要融化,融化過程在溫度較低的狀態(tài)下慢慢進行,待溶解完成,我們觀察到的胎牛血清會表現出黃色或紅色。并不是越紅越好,也不是越黃越好,淡黃色到淡紅色才是比較正常的顏色范圍。很多培養(yǎng)細胞的寶寶會發(fā)現進口血清有沉淀,從而懷疑血清的質量...

除了對血清進行檢測，有何更直觀的方式分辨血清質量？目測法，我們可根據血清的顏色，沉淀，澄清度等進行區(qū)分。顏色：顏色根據血清蛋白含量的不同，可表現出黃色或者紅色。進口血清質量較為好的呈現出淡黃、微紅色，較差質量呈現出橘紅色或鮮紅色。熱滅清或保存不當的，由于血紅蛋...

胎牛血清參與細胞培養(yǎng)實驗為細胞生長提供必要的營養(yǎng)成分，對于研究細胞的科學人士來說，血清都不會陌生，其中胎牛血清是實驗操作的常客。一般而言，胎牛血清是指懷孕5-8個月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺后，通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)...

胎牛血清的合規(guī)血源產地對于細微差異即可決定成敗的細胞培養(yǎng)技術來說，選擇來源安全、品質優(yōu)良的胎牛血清至關重要。作為牛肉制品的副產品，胎牛血清的傳統(tǒng)產地包括澳大利亞，新西蘭， 美國， 南美（烏拉圭&巴西）以及歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達的區(qū)域。業(yè)內通常會根據不同產地的牛情況，...

聚合酶鏈式反應的試驗污染：PCR擴增產物污染：這是PCR反應中很主要很常見的污染問題。因為PCR產物拷貝量大（一般為1013拷貝/ml），遠遠高于PCR檢測數個拷貝的極限，所以極微量的PCR產物污染，就可形成假陽性。還有一種容易忽視，很可能造成PCR產物污染的...

除了對血清進行檢測，有何更直觀的方式分辨血清質量？目測法，我們可根據血清的顏色，沉淀，澄清度等進行區(qū)分。顏色：顏色根據血清蛋白含量的不同，可表現出黃色或者紅色。進口血清質量較為好的呈現出淡黃、微紅色，較差質量呈現出橘紅色或鮮紅色。熱滅清或保存不當的，由于血紅蛋...

聚合酶鏈式反應：Taq(水生棲熱菌)聚合酶耐熱DNA聚合酶的很好活性溫度約為75-80°C(167-176°F),盡管該酶通常使用72°C(162°F)的溫度。在該步驟中，DNA聚合酶通過從反應混合物中添加在5’-至-3’方向上與模板互補的游離DNA鏈來合成與...

胎牛血清參與細胞培養(yǎng)實驗為細胞生長提供必要的營養(yǎng)成分，對于研究細胞的科學人士來說，血清都不會陌生，其中胎牛血清是實驗操作的?？汀Ｒ话愣?，胎牛血清是指懷孕5-8個月的母牛被屠宰后，發(fā)育未完全的胎牛心臟穿刺后，通過一系列工藝處理獲得。此時胎牛血中含有特殊的生長發(fā)...

合格的胎牛血清都需要經過嚴格的多重質檢和驗證，這里需要特別關注胎牛血清的相關質量合格證明，不但不能含有有害微生物，如細菌、菌類、支原體、病毒等，同時也必須通過了各種性能測試實驗。通過驗證細胞的形態(tài)、增殖速度、克隆形成率等多項測試，性能表現優(yōu)異的胎牛血清對細胞培...

可能你會覺得，你從一些渠道購買的大品牌的血清，價格便宜，細胞養(yǎng)的還挺好。所以也不在乎。因為你的細胞不是你想象的那么難養(yǎng)，有些假血清也確實可以養(yǎng)，但是質量，穩(wěn)定性確實不一樣，批間差異大，甚至同一批的血清都不穩(wěn)定，直接影響到你的實驗結果的可重復性和數據的真實性。之...