在轉(zhuǎn)染中，DNA通常通過病毒或非病毒載體(如質(zhì)粒)轉(zhuǎn)運到宿主細(xì)胞中。質(zhì)粒的基本結(jié)構(gòu)包括啟動子、復(fù)制起點、多個克隆位點、目標(biāo)基因和選擇標(biāo)記。質(zhì)粒復(fù)制需要復(fù)制的起源，而多個克隆位點包含獨特的內(nèi)切酶切割位點，用于插入外源基因。適當(dāng)?shù)恼婧藛幼?如CMV或EF-1a)的存在允許外源基因在宿主細(xì)胞中表達(dá)。質(zhì)粒DNA可以以線性和超螺旋DNA的形式轉(zhuǎn)染。與線性DNA相比，使用超螺旋質(zhì)粒DNA轉(zhuǎn)染通常會產(chǎn)生更高的效率，線性DNA更容易被外切酶降解。然而，線性化的DNA更具重組性，因此可以更容易地整合到宿主基因組中以實現(xiàn)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染。與DNA轉(zhuǎn)染類似，RNA可以通過基于RNA的病毒或非病毒載體導(dǎo)入真核細(xì)胞。干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑公司

PLL(聚L -賴氨酸)是生理條件下帶正電的多氨基酸,當(dāng)鏈長超過20個殘基時，它可以與質(zhì)粒DNA結(jié)合并凝聚成致密顆粒。研究人員發(fā)現(xiàn)，配體在PLL上的共價附著可通過受體介導(dǎo)的途徑***增強(qiáng)內(nèi)吞作用。例如，涎腺樣體(ASOR)是涎腺糖蛋白受體的配體，在肝細(xì)胞上表達(dá)。當(dāng)ASOR共價附著在PLL上時，受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用和質(zhì)粒的細(xì)胞攝取***增加。此外，與葉酸或轉(zhuǎn)鐵蛋白相關(guān)的PLL已被開發(fā)出來，并在將pDNAs轉(zhuǎn)染到*細(xì)胞中取得了實質(zhì)性進(jìn)展。另一種重要的聚氨基酸是PLO(聚L-鳥氨酸)。PLO具有PLL的特性，但轉(zhuǎn)染效率比PLL提高了10倍。Ramsay和Gumbleton證明，與PLL相比，PLO以更低的電荷(+/?)比率凝聚pDNA，并且在相同的多陽離子/pDNA質(zhì)量比下，PLO/pDNA復(fù)合物比PLL/pDNA復(fù)合物更耐破壞。然而，由于其介導(dǎo)內(nèi)體逃逸的能力較差，帶正電的多氨基酸的轉(zhuǎn)染效率仍然很低。干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑公司化學(xué)轉(zhuǎn)染可分為基于脂質(zhì)體或非基于脂質(zhì)體。

脂質(zhì)復(fù)合物又稱陽離子脂質(zhì)-核酸復(fù)合物(CLNACs)，是由非離子核酸與陽離子脂質(zhì)體（CLs）表面結(jié)合，**終形成多層脂質(zhì)-核酸復(fù)合物而形成的。帶負(fù)電荷的核酸被吸引到帶正電荷的囊泡表面，**初與?？吭陉栯x子囊泡表面的核酸分子形成復(fù)合物，然后發(fā)展到核酸分子持續(xù)粘在脂質(zhì)分子上的階段，脂質(zhì)雙分子層圍繞緊實的核脂質(zhì)顆粒。復(fù)合物形態(tài)的這種異質(zhì)性可能歸因于囊泡的脂質(zhì)組成、復(fù)合物形成的方式、脂質(zhì):核酸比例、核酸結(jié)構(gòu)的大小、試劑的批次差異以及用于處理和可視化這些復(fù)合物的技術(shù)。除了靜電吸引外，疏水相互作用被認(rèn)為有助于脂質(zhì)和核酸之間的復(fù)合物形成。因此，根據(jù)正電荷(陽離子脂質(zhì))與負(fù)電荷(核酸上的磷酸基)的電荷比，脂質(zhì)體可能通過與細(xì)胞表面的蛋白聚糖基團(tuán)等帶電殘基的靜電相互作用，或通過與質(zhì)膜疏水區(qū)域的疏水相互作用進(jìn)入細(xì)胞。

超聲輔助轉(zhuǎn)染涉及在宿主細(xì)胞膜上制造微小的孔，以促進(jìn)核酸(包括DNA和RNA)的傳遞。與前一種策略類似，超聲照射的暴露時間、脈沖數(shù)和密度也被報道與轉(zhuǎn)染效率成比例相關(guān)，直至達(dá)到閾值。超過耐受極限，細(xì)胞存活率和轉(zhuǎn)染效率可能會下降。同樣，增加核酸的數(shù)量也可以提高超聲輔助轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染效率。在同一項研究中，超聲轉(zhuǎn)染懸浮培養(yǎng)的人293T細(xì)胞比轉(zhuǎn)染貼壁培養(yǎng)的相同細(xì)胞類型更容易。然而，這一觀察結(jié)果與另一項研究的結(jié)果不一致，該研究報告在懸浮或單層條件下培養(yǎng)的轉(zhuǎn)染大鼠細(xì)胞數(shù)量沒有***差異。值得注意的是，后一項研究還報道了單層培養(yǎng)的大鼠細(xì)胞在轉(zhuǎn)染后保持較高的細(xì)胞活力。然而，這兩項研究的不一致結(jié)果表明，超聲穿孔的比較好培養(yǎng)條件可能因使用的細(xì)胞系不同而異。在另一項研究中表明超聲轉(zhuǎn)染效率因使用的細(xì)胞類型而異，Hela和T-24細(xì)胞系的超聲轉(zhuǎn)染效率優(yōu)于PC-3、U937和Meth A細(xì)胞系。因此，細(xì)胞類型的選擇是影響超聲轉(zhuǎn)染效率的另一個因素。deae-葡聚糖是一種化學(xué)修飾的葡聚糖類似物。

基因和RNAi***在臨床上的應(yīng)用需要安全高效的載體。迄今為止，核酸***的兩種主要方法是基于病毒和非病毒載體。與病毒載體相關(guān)的安全問題有很多:誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的風(fēng)險、不必要的突變和**。因此，在開發(fā)基于脂質(zhì)或聚合載體的非病毒載體是勢在必行的。1965年，Vaheri和Pagano引入了二乙基氨基乙基修飾的葡聚糖，這是第一種用于基因傳遞的聚合物。1987年，F(xiàn)elgner引入了DOTMA，這是第一種用于DNA轉(zhuǎn)染的陽離子脂質(zhì)。從那時起，大量不同的脂質(zhì)和聚合物被開發(fā)出來。南京星葉生物正是利用將核酸封裝在納米級脂質(zhì)體囊泡中的技術(shù)，開發(fā)出了Gemate系列轉(zhuǎn)染試劑。小RNA和質(zhì)粒DNA的共轉(zhuǎn)染可用于評估轉(zhuǎn)染效率。浙江南京轉(zhuǎn)染試劑

提高 RNA 轉(zhuǎn)染效率的策略。干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑公司

陽離子脂質(zhì)體合成中常用的分子是中性脂質(zhì)二油基磷脂酰乙醇胺(DOPE)。DOPE的作用是促進(jìn)膜融合，并有助于質(zhì)膜或核內(nèi)體的不穩(wěn)定。此外，由于陽離子脂質(zhì)相互排斥，因此需要DOPE等輔助脂質(zhì)來穩(wěn)定陽離子脂質(zhì)體（CLs）懸浮液，并抵消其他載體如聚乙烯亞胺(PEI)和樹狀大分子中存在的陰離子糖胺聚糖的抗轉(zhuǎn)染作用。沒有中性脂質(zhì)的脂質(zhì)體具有較低的轉(zhuǎn)染率，盡管情況并非總是如此。不同的轉(zhuǎn)染率可能是由用于配制脂質(zhì)體的陽離子:中性脂質(zhì)的不同比例引起的。如上所述，CLs介導(dǎo)的核酸轉(zhuǎn)移的成功取決于許多因素，這些因素可能解釋了脂質(zhì)體(脂質(zhì)體介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染)的內(nèi)在變異性，特別是在體內(nèi)。干細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑公司