Cy7DiC18（DiR）是一個親脂性、近紅外熒光花青染料。這個染料常用于標(biāo)記細(xì)胞質(zhì)膜。Cy7DiC18（DiR）的兩個18-碳鏈插入到細(xì)胞膜，從而進行特定的、穩(wěn)定的細(xì)胞染色，幾乎不會發(fā)生細(xì)胞間的染料轉(zhuǎn)移。Cy7DiC18（DiR）（近紅外熒光）和其他細(xì)胞膜熒光染料如DiI（橙色熒光），DiO（綠色熒光），DiD（紅色熒光）配合使用，為多色成像和流式細(xì)胞分析提供了有效的工具。Cy7DiC18（DiR）染色后可進行多聚甲醛（不可使用甲醇等其他試劑）的固定，但不建議在染色后進行透化的過程。此外，在固定透化（室溫下用0.1%TritonX-100透化）后，也可以很好地進行質(zhì)膜染色。

1、Cy7DiC18（DiR）染色固定的細(xì)胞或組織樣品時，通常使用配制在PBS中的4%多聚甲醛進行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。

2、為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。 DiR的紅外熒光可以穿透細(xì)胞和組織，在小動物成像中用來示蹤。石家莊熒光染料DAPI

3.粘壁細(xì)胞的染色（1）使粘壁的細(xì)胞在無菌實驗室培養(yǎng)。（2）從培養(yǎng)基中移走蓋玻片，吸走過量培養(yǎng)液，將蓋玻片放在潮濕的環(huán)境中。（3）在蓋玻片的一角加入100μL的染料工作液，輕輕晃動使染料均勻覆蓋所有細(xì)胞。（4）在37℃培養(yǎng)細(xì)胞2～20分鐘，不同的細(xì)胞比較好培養(yǎng)時間不同。（5）吸干染料工作液，用培養(yǎng)液洗蓋玻片2～3次，每次用預(yù)溫的培養(yǎng)基覆蓋所有細(xì)胞，培養(yǎng)5～10分鐘，然后吸干培養(yǎng)基。

4.顯微鏡檢測（1）DiD，DiO，DiI，DiR和DiS濾光器的選擇參見表1。（2）多色染料的同時檢測，濾光器按照以下設(shè)定：a)DiI和DiO＝OmegaXF52，Chroma51004；b)DiI和DiD＝OmegaXF92，Chroma51007；c)DiI，DiO和DiD＝OmegaXF93，Chroma61005

5.流式細(xì)胞儀的檢測DiD，DiO，DiI，DiR和DiS染色的細(xì)胞可以分別用經(jīng)典的FL1，F(xiàn)L2，F(xiàn)L3和FL4流式細(xì)胞儀檢測。 石家莊熒光染料DAPICy3染料的激發(fā)峰和發(fā)射峰分別在550 nm和570 nm左右。

熒光染料:能發(fā)出熒光的染料。在吸收紫外線或可見光后，能把短波長的光轉(zhuǎn)變?yōu)椴ㄩL較長的可見光波而反射出來，呈閃亮的鮮艷色彩。例如，酸性曙紅、熒光黃、紅汞以及某些分散染料等。它們大多是含有苯環(huán)或雜環(huán)并帶有共軛雙鍵的化合物。熒光染料可以單獨使用，也可以組合成復(fù)合熒光染料使用。其中復(fù)合熒光染料是利用熒光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)合成的熒光染料，由距離非常近、能量可以在彼此間傳遞的一個供體及一個受體熒光物分子所組成。復(fù)合染料在受體分子的激發(fā)波長被激發(fā)，在供體分子的發(fā)射波長發(fā)射一個光子。熒光染料發(fā)展非常迅速，已開發(fā)的用于科研和臨床應(yīng)用的熒光染料已基本覆蓋了由紫外到可見光及紅外的整個光譜范圍。

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應(yīng)用，作為抗體和其他探針標(biāo)記，用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性，是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物，以及一系列具有針對細(xì)胞標(biāo)記和檢測優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。Cy3 (Cyanine 3) 是一種發(fā)橘黃色熒光的花青素?zé)晒馊玖稀?/p>

三、細(xì)胞實驗D-熒光素鉀鹽體外生物發(fā)光試驗：D-熒光素鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配制）1、貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中孵育數(shù)小時或過夜，使細(xì)胞貼壁。懸浮細(xì)胞：可以將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板后直接進行后續(xù)操作，無需孵育。如果倍增時間相對較短，則應(yīng)考慮倍增時間進行細(xì)胞計數(shù)。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無菌水中，制備成100X熒光素儲備液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素鉀鹽完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。3、用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基1∶100稀釋100X熒光素儲備液（15mg/ml），配制成熒光素工作液（終濃度150μg/ml），即配即用。4、去除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基。5、在成像前，將適量熒光素工作液加入細(xì)胞中，然后進行圖像分析。注意：成像前在37℃下對細(xì)胞進行短時間孵育可增強信號。孵育時間取決于特定的細(xì)胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了，根據(jù)需要進行測試和調(diào)整。6、每隔10分鐘，**多40分鐘，使用VILBERFUSIONFX成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光，確定動力學(xué)曲線并找出細(xì)胞的峰值成像時間點Super Fluor 750（效果同Alexa Fluor 750）熒光染料。河北神經(jīng)熒光染料

動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。石家莊熒光染料DAPI

其他細(xì)胞結(jié)構(gòu)常用染料生物染料在細(xì)胞結(jié)構(gòu)和組分鑒定中有著廣泛的應(yīng)用，除細(xì)胞膜研究外，我們經(jīng)常也會對一些其它細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分進行探索，例如線粒體、溶酶體、蛋白質(zhì)、細(xì)胞核等，而對于不同的細(xì)胞結(jié)構(gòu)有不同的染料進行染色細(xì)胞染色神器DAPI+PhalloidinDAPI染色液（DAPIStainingSolution）常用于細(xì)胞核染色，可將細(xì)胞核染成藍(lán)色。鬼筆環(huán)肽（Phalloidin）是細(xì)胞骨架的染色神器，羅丹明標(biāo)記的Phalloidin（TRITC-Phalloidin）可將細(xì)胞染成橙紅色，DAPI與Phalloidin染色液是研究細(xì)胞形態(tài)變化時經(jīng)常用到的兩種共染的試劑，染色效果可見A1-E1用TRITC-鬼筆環(huán)肽（橙紅）染色的細(xì)胞骨架免疫熒光圖；A2-E2用DAPI（藍(lán)色）染色的細(xì)胞核免疫熒光圖；A3-E3合并的L929細(xì)胞免疫熒光染色圖。是S100A16過表達或下調(diào)前后PDAC細(xì)胞形態(tài)的變化。石家莊熒光染料DAPI