藻紅蛋白-藻紅蛋白(PE)是一種紅色蛋白色素復(fù)合物，屬于藻膽蛋白家族。它可以在紅藻和隱植物中找到，它作為葉綠素色素的附屬物。在生物科學(xué)中，熒光團可以與蛋白質(zhì)結(jié)合，例如用于抗原檢測的抗體等，因為它能夠發(fā)出明亮的熒光。由于熒光團往往會很快發(fā)生光漂白，因此很少在熒光顯微鏡中使用。它經(jīng)常用于流式細(xì)胞術(shù)?！鶆e藻藍蛋白(APC)-與藻紅蛋白一樣，別藻藍蛋白也屬于藻膽蛋白家族，是從紅藻中分離出來的。在594和633nm的激光線激發(fā)下，熒光團的比較大吸光度在650nm處，而熒光發(fā)射峰在66nm處。與熒光素偶聯(lián)物相比，熒光團的靈敏度已顯示高5至10倍，并具有許多其他有益特性，包括大斯托克斯位移、高水溶性、長波長發(fā)射和耐猝滅。雖然別藻藍蛋白通常不用于需要光穩(wěn)定性的應(yīng)用，但它***用于流式細(xì)胞術(shù)、ELISA、微陣列等過程以及各種依賴高靈敏度的應(yīng)用。動物體內(nèi)光學(xué)成像主要采用生物發(fā)光與熒光發(fā)光兩種技術(shù)。北京熒光染料納米

InvitrogenCy3染料是一種明亮的橙色熒光染料，可使用532nm激光線激發(fā)，并使用TRITC（四甲基羅丹明）濾光片組進行可視化。除了免疫細(xì)胞化學(xué)應(yīng)用，Cy3染料通常用于標(biāo)記核酸。發(fā)光說明：Cy3熒光團也是親脂性神經(jīng)元和長期DiI細(xì)胞追蹤試劑的基礎(chǔ)，該試劑添加烷基尾(≥12個碳）添加到**熒光團上。Cy3染料是用于成像、流式細(xì)胞術(shù)和基因組應(yīng)用的蛋白質(zhì)和核酸結(jié)合物的傳統(tǒng)橙色熒光標(biāo)簽。它也是經(jīng)典親脂性示蹤劑DiI及其變體的基礎(chǔ)。根據(jù)化學(xué)結(jié)構(gòu)，Cy3可分為普通Cy3（常簡稱Cy3）和磺化Cy3（Sulfo-Cy3）。Cy3水溶性較低，在水相標(biāo)記反應(yīng)時常常需要使用有機共溶劑，常用有機溶劑包括DMF，DMSO和乙腈等?；腔疌y3是在Cy3的結(jié)構(gòu)基礎(chǔ)上磺化的產(chǎn)物，附帶2個或3個磺酸根離子。由于磺化效應(yīng)，磺化Cy3的亮度比Cy3稍亮，熒光穩(wěn)定性也提高，可賴受更長時間的曝光?；腔疌y3水溶性極高，所以在標(biāo)記反應(yīng)中不需要使用有機共溶劑，特別適合標(biāo)記蛋白等對有機溶劑敏感的生物分子。另外磺化Cy3水溶性極好，并且染料分子本身帶電荷，標(biāo)記到蛋白表面后不會引發(fā)疏水性蛋白聚集，提高熒光標(biāo)記產(chǎn)物的穩(wěn)定性。當(dāng)然，磺化Cy3-NHS也可溶于甲醇，DMSO，DMF等有機溶劑，標(biāo)記反應(yīng)也可以在純有機溶劑中進行。安徽熒光染料激發(fā)與花青和羅丹明染料一樣，熒光素也是一種有機染料。

5(6)-FITC(Fluorescein5(6)-isothiocyanate)是一種胺活性衍生物的熒光染料，具有廣泛的應(yīng)用，作為抗體和其他探針標(biāo)記，用熒光顯微鏡，流式細(xì)胞儀、免疫熒光方法如ELISA和Western印跡實驗。熒光素衍生物具有高吸收率、優(yōu)異的熒光量子產(chǎn)率和良好的水溶性，是流式細(xì)胞儀和免疫熒光中生物檢測**常用的熒光標(biāo)記之一。**常用的熒光素包括用于標(biāo)記蛋白質(zhì)（特別是抗體）的異硫氰酸熒光素[5(6)-FITC)]，5-FITC和用于標(biāo)記肽和寡核苷酸的羧基熒光素（5-FAM和5(6)-FAM）。BIOFOUNT提供***的基于熒光素的染料、底物和偶聯(lián)物，以及一系列具有針對細(xì)胞標(biāo)記和檢測優(yōu)化的特性的質(zhì)量iFluor?熒光標(biāo)記染料。

羅丹明123一種可對活細(xì)胞線粒體染色的細(xì)胞染色試劑。羅丹明123可透過細(xì)胞膜且在活細(xì)胞的線粒體內(nèi)聚集，并發(fā)出黃綠色熒光。羅丹明123***用作檢測線粒體膜電位，也常用于細(xì)胞凋亡檢測。由于細(xì)胞內(nèi)ATP的量與羅丹明123的熒光強度之間有相關(guān)性，此熒光染料被應(yīng)用于檢測細(xì)胞內(nèi)的ATP。羅丹明123的比較大激發(fā)波長為507nm，比較大發(fā)射波長為525nm。在熒光顯微鏡下觀察，呈現(xiàn)黃綠色熒光。

一：工作液配制用緩沖液或者預(yù)熱的培養(yǎng)液直接稀釋儲存液到需要的工作液濃度（1～20μM），充分混勻。具體的工作液濃度使用者要根據(jù)自身實驗體系進行調(diào)整?！咀⒁狻浚簩τ诩?xì)胞實驗，要控制好總體稀釋倍數(shù)，DMSO在培養(yǎng)液中的濃度不能超過0.1%，以避免DMSO對細(xì)胞的影響。

二：熒光顯微鏡觀察1、用載玻片準(zhǔn)備細(xì)胞。細(xì)胞數(shù)目應(yīng)為5×104～5×105個/mL。2、在載玻片上孵育細(xì)胞，用PBS或HBSS洗滌細(xì)胞。3、將Rhodamine123工作液加入載玻片并在37℃下孵育30min至1小時。4、去除Rhodamine123溶液并用培養(yǎng)液洗滌細(xì)胞（洗滌細(xì)胞后如果要固定，加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15～20min，接著用PBS洗滌）。5、熒光顯微鏡觀察細(xì)胞。 生物發(fā)光是利用熒光素酶報告基因在體內(nèi)表達產(chǎn)生的熒光蛋白與體外注射的熒光素底物發(fā)生化學(xué)反映產(chǎn)生熒光。

三、細(xì)胞實驗D-熒光素鉀鹽體外生物發(fā)光試驗：D-熒光素鉀鹽，無菌純水，完全培養(yǎng)基（自行配制）1、貼壁細(xì)胞：將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板中孵育數(shù)小時或過夜，使細(xì)胞貼壁。懸浮細(xì)胞：可以將細(xì)胞接種于培養(yǎng)板后直接進行后續(xù)操作，無需孵育。如果倍增時間相對較短，則應(yīng)考慮倍增時間進行細(xì)胞計數(shù)。2、將15mg熒光素鉀鹽溶解于1ml無菌水中，制備成100X熒光素儲備液（15mg/ml），輕輕顛倒搖動至熒光素鉀鹽完全溶解?；靹蚝罅⒓词褂没蚍盅b后-20℃凍存。3、用預(yù)熱好的細(xì)胞培養(yǎng)基1∶100稀釋100X熒光素儲備液（15mg/ml），配制成熒光素工作液（終濃度150μg/ml），即配即用。4、去除培養(yǎng)板中的培養(yǎng)基。5、在成像前，將適量熒光素工作液加入細(xì)胞中，然后進行圖像分析。注意：成像前在37℃下對細(xì)胞進行短時間孵育可增強信號。孵育時間取決于特定的細(xì)胞類型。一般來說孵育10分鐘就足夠了，根據(jù)需要進行測試和調(diào)整。6、每隔10分鐘，**多40分鐘，使用VILBERFUSIONFX成像系統(tǒng)檢查體外生物發(fā)光，確定動力學(xué)曲線并找出細(xì)胞的峰值成像時間點D-熒光素是熒光素酶 (Luc) 的天然底物，可催化螢火蟲產(chǎn)生典型的黃綠色光。鄭州熒光染料IR780

花青類熒光染料屬于共振染料，其特征在于具有離域電荷的氮原子（兩個氮原子）之間的聚甲炔染料。北京熒光染料納米

第二種***使用的DNA染色方法是Hoechst染料，**初由化學(xué)公司HoechstAG生產(chǎn)。Hoechst33258、Hoechst33342和Hoechst34580都是鄰苯二甲酰亞胺，具有向A-T富集區(qū)插入的趨勢，因此后者不常使用。與DAPI相似，此類染料受到紫外線激發(fā)并在455nm下發(fā)射比較大值，在無結(jié)合狀態(tài)下變?yōu)?10–540nm。Hoechst染料還具有細(xì)胞滲透作用，因此可用于固定細(xì)胞和活細(xì)胞。與DAPI不同是，Hoechst染料毒性更低。DNA染色劑碘化丙啶無法透過細(xì)胞膜。在細(xì)胞培養(yǎng)中，因為該染色劑無法進入完好的細(xì)胞內(nèi)，所以常常被用來區(qū)分活細(xì)胞和死細(xì)胞。碘化丙啶也是一種結(jié)合劑，但對不同的堿基沒有特異性。在核酸結(jié)合態(tài)下，其比較大激發(fā)波長為538nm，比較高發(fā)射波長為617nm。未結(jié)合狀態(tài)下碘化丙啶的比較大激發(fā)和發(fā)射被移到較短的波長和較弱的強度。它也可以在不改變其熒光特性的情況下與RNA結(jié)合。要區(qū)分DNA和RNA，必須使用足夠的聚合酶。北京熒光染料納米