dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度?？梢允褂脦追N不同的方法來分配樣品，包括微孔板，毛細管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算，從而解決了多個目標分子存在于單個液滴中的可能性。 單細胞研究：測序、PCR。南通廣東數(shù)字PCR如何選型

       CNV（Copy Number Variations，拷貝數(shù)變異）研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異，測序方法適用于高于30%的變異率檢測，而qPCR的比較**辨在1.5倍左右，數(shù)字PCR通過直接計數(shù)目標基因與參照基因( 拷貝數(shù)為1的基因，例如RNaseP) 的數(shù)目，計算比值，直接得到目標基因的拷貝數(shù)可以達到極高的拷貝數(shù)分辨精度。

       除此之外，dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待，而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標準品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應(yīng)用方向上，已經(jīng)有大量實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。

南通廣東數(shù)字PCR如何選型液體活檢：早篩、用藥、監(jiān)測、復(fù)發(fā)。

定量PCR和數(shù)字PCR的特點：

1. 在20多年的使用和發(fā)展中，定量PCR作為一種技術(shù)平臺，已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù)，在工業(yè)界和分子檢測的某些應(yīng)用上，定量PCR已經(jīng)成為“金標準”?；A(chǔ)研究方面，則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標準實驗指南”。   

2. 在定量PCR的各種應(yīng)用中，基因表達分析(gene expression analysis)的應(yīng)用比重約占七成，綜合各種因素來看，眼下定量PCR還是進行基因表達研究的理想手段。   

3. 上述的“各種因素”具體展開，主要包括：通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻與protocol的數(shù)目等等。   

4. 就目前市場上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來看，定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢，意味著同一個run內(nèi)可對各種表達豐度的樣品進行分析。

       數(shù)字PCR可以直接計算目標序列的拷貝數(shù)，因此無需依賴于對照樣品和標準曲線就可以進行精確的***定量檢測；此外，由于數(shù)字PCR在進行結(jié)果判讀時*判斷有/無兩種擴增狀態(tài)，因此也不需要檢測熒光信號與設(shè)定閾值線的交點，完全不依賴于Ct值的鑒定，因此數(shù)字PCR的反應(yīng)受擴增效率的影響**降低，對PCR反應(yīng)***物的耐受能力**提高；數(shù)字PCR實驗中標準反應(yīng)體系分配的過程可以極大程度上降低與目標序列有競爭性作用的背景序列濃度，因此數(shù)字PCR技術(shù)也特別適合在復(fù)雜背景中檢測稀有突變。不依賴Ct值，無需標準曲線。

       微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)為微流控微滴生成技術(shù)，采用原創(chuàng)性的油液，單個樣本在微米級流道中利用氣壓驅(qū)動在3分鐘內(nèi)生成10萬微滴，單次運行生成80萬微滴，微滴體積達皮升級，檢測線性范圍達到6個數(shù)量級，各項指標均超越國內(nèi)外主流產(chǎn)品。

       在液滴生成數(shù)上，MicroDrop?能達到國外同級別產(chǎn)品的5倍。與此同時，設(shè)備制作成本只有國外同類產(chǎn)品的一半。這減低了精細醫(yī)療的成本，打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。這意味著在未來，采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。

國內(nèi)擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀。南通廣東數(shù)字PCR如何選型

MiniDrop?研發(fā)團隊由微流控、光學、機電學、化學、臨床醫(yī)學、分子生物學等多學科交叉領(lǐng)域的**組成。南通廣東數(shù)字PCR如何選型

數(shù)字PCR的應(yīng)用

檢驗檢疫 食品安全

?轉(zhuǎn)基因食品檢測（國標）

?病原菌鑒定

?動物源性檢測分析

科研

?基因表達差異監(jiān)測

?CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證

?甲基化含量鑒定

?單細胞研究：測序、PCR

臨床

?**液體活檢：早篩、用藥、監(jiān)測、復(fù)發(fā)

?無創(chuàng)產(chǎn)前篩查：低成本、快速

?***性疾?。篐BV、HIV定量

       據(jù)悉，MiniDrop?**團隊由微流控、光學、機電學、化學、臨床醫(yī)學、分子生物學等多學科交叉領(lǐng)域的**組成，依托精密儀器研發(fā)、生物納米材料與分子生物學等平臺，以微滴式數(shù)字PCR儀為**，打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品，致力于解決**、***領(lǐng)域的精細診斷。

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