研究方向低豐度及稀有序列的精確定量目前對(duì)于低豐度目標(biāo)序列的檢測,定量PCR、雜交、毛細(xì)管測序及NGS等方法都因受到背景DNA的干擾,使得檢測靈敏度及精確性都達(dá)不到精細(xì)定量的要求(如定量PCR檢測中Ct值大于33的情況下,其重復(fù)性就不是很高),而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過**的微滴化處理,使得稀有的核酸序列從大量的背景DNA中分離出來,從而提高了檢測的靈敏度及重復(fù)性。此外,由于樣品微滴化處理的同時(shí),也將樣品中可能存在的***劑進(jìn)行了分裝,提高了數(shù)字PCR擴(kuò)增對(duì)于***劑的耐受程度,因此可具體應(yīng)用于很多臨床樣品(血液、尿液、糞便、痰液、腦脊液等)中對(duì)**核酸標(biāo)記物的檢測。一般而言,毛細(xì)管電泳和定量PCR的檢測靈敏度約在10%;NGS的靈敏度可達(dá)到1%;而ddPCR的檢測下限為0.001%??:?上海)儀器科技有限公司是一家專業(yè)提供數(shù)字PCR 的公司,歡迎您的來電!遼寧分析數(shù)字PCR銷售
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數(shù)字PCR也叫DigitalPCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對(duì)結(jié)果的判定不依賴于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值,不受擴(kuò)增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個(gè)數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。數(shù)字PCR基本原理是將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個(gè)微滴單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個(gè)單元都會(huì)對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,然后再對(duì)每個(gè)單元進(jìn)行熒光信號(hào)的統(tǒng)計(jì)并計(jì)算。相對(duì)而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。
與常規(guī)的PCR的方法相比,dPCR有很好的優(yōu)勢。***定量常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,由于樣品測定在各種條件上不會(huì)完全一致,會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異,從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響,可以進(jìn)行***定量。樣品需求量低在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯的優(yōu)勢。高靈敏度ddPCR本質(zhì)上是 將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個(gè) 的PCR反應(yīng),在這些反應(yīng)中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品,且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。高耐受性由于目的序列被分配到多個(gè)微滴中,***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對(duì)反應(yīng)的干擾,擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。數(shù)字PCR ,就選浚和(上海)儀器科技有限公司,歡迎客戶來電!
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基因檢測**前沿的兩種方法是:高通量測序(NGS)和數(shù)字PCR(dPCR)。高通量測序技術(shù)又稱“下一代”測序技術(shù),可以一次對(duì)幾十萬到幾百萬條DNA分子進(jìn)行序列測定,功能強(qiáng)大,但是實(shí)驗(yàn)操作較復(fù)雜,數(shù)據(jù)分析難度較大,檢測周期長,成本較高。數(shù)字PCR技術(shù)是目前**精細(xì)**靈敏的基因檢測技術(shù),借助微液滴或微腔室,通過單個(gè)模板分子的PCR擴(kuò)增,可實(shí)現(xiàn)不依賴于標(biāo)準(zhǔn)曲線和參照樣本的***定量。與NGS相比,數(shù)字PCR靈敏度高、檢測速度快、操作簡便、結(jié)果易讀、成本低廉等優(yōu)勢使其更適合臨床檢測,成為精細(xì)醫(yī)療實(shí)現(xiàn)平民化、大眾化的比較好選擇。此外,數(shù)字PCR還在基因表達(dá)差異研究、拷貝數(shù)變異(CNV)研究、低豐度DNA模板分子的精確定量、甲基化含量鑒定、二代測序輔助建庫、CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證、轉(zhuǎn)基因成分的檢測、移植排異監(jiān)控、腸道菌群分析以及***基因組檢測等眾多領(lǐng)域中有著優(yōu)異的應(yīng)用。遼寧分析數(shù)字PCR銷售