研究方向甲基化含量鑒定作為表觀遺傳學(xué)研究中重要的一個(gè)研究方向——甲基化程度分析,現(xiàn)階段有不同的方法或技術(shù)來進(jìn)行研究:如傳統(tǒng)的亞硫酸氫鹽處理后的克隆測序統(tǒng)計(jì)法、抗體檢測法、定量PCR檢測法等。這些方法皆因方法學(xué)的問題而不能獲得精確的定量,而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過對樣品的微滴化處理及目標(biāo)因子的***拷貝數(shù)定量,為甲基化程度的精確定量檢測提供了一種全新 的技術(shù)。*****的伴隨診斷常用體液來源(如血液,胸腹水,唾液及尿液等)的待檢標(biāo)本中的DNA,有正常脫落體細(xì)胞和病變脫落細(xì)胞兩種來源,前者的量遠(yuǎn)大于后者。通過微液滴處理能在每個(gè)微液滴中有效減少正常體細(xì)胞DNA的干擾,實(shí)現(xiàn)**標(biāo)記物的有效檢測,如EGFR,ALK,ROS1,KRAS、BRAF等基因的突變檢測、乳腺*/胃*的HER2基因擴(kuò)增檢測等,應(yīng)用于**精細(xì)醫(yī)學(xué)的伴隨診斷??:?上海)儀器科技有限公司是一家專業(yè)提供數(shù)字PCR 的公司,期待您的光臨!新疆體積小數(shù)字PCR咨詢報(bào)價(jià)
微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴(kuò)增前對樣品進(jìn)行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個(gè)納升級的微滴,其中每個(gè)微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個(gè)至數(shù)個(gè)待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴(kuò)增后,逐個(gè)對每個(gè)微滴進(jìn)行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個(gè)數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。與傳統(tǒng)PCR相比所具有的優(yōu)勢不依賴Ct值或內(nèi)參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數(shù)目。微滴技術(shù)讓數(shù)字PCR更低成本,且更實(shí)用。江西藥品數(shù)字PCR供應(yīng)商浚和(上海)儀器科技有限公司力于提供數(shù)字PCR ,有需求可以來電咨詢!
CNV(CopyNumberVariations,拷貝數(shù)變異)研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異,測序方法適用于高于30%的變異率檢測,而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數(shù)字PCR通過直接計(jì)數(shù)目標(biāo)基因與參照基因(拷貝數(shù)為1的基因,例如RNaseP)的數(shù)目, 計(jì)算比值,直接得到目標(biāo)基因的拷貝數(shù)可以達(dá)到極高的拷貝數(shù)分辨精度。除此之外,dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達(dá)研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學(xué)直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待,而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標(biāo)準(zhǔn)品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應(yīng)用方向上,已經(jīng)有大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。
MicroDrop-100數(shù)字PCR系統(tǒng)具有如下優(yōu)點(diǎn):1、JUE對定量,結(jié)果判讀不需要依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線;2、突破局限,檢測靈敏度可低至萬分之一;3、專利設(shè)計(jì)的具有高精度復(fù)雜三維微納防污染結(jié)構(gòu)的微流控芯片,單張可同時(shí)處理1-8個(gè)樣本;4、一鍵式自動(dòng)操作,20uLPCR體系可生成100,000微滴,8個(gè)樣本單次微滴生成 需2分鐘;5、FAM、HEX(VIC)雙熒光通道,半導(dǎo)體激光器做為激發(fā)光 源相比LED光源,穩(wěn)定性高,功率穩(wěn)定不影響檢測靈敏度,單色性能優(yōu)異降低對檢測特異性的影響,且方向性好;6、檢測器為2個(gè)光電倍增管,靈敏度及增益優(yōu)于MPCC或CCD,普通的硅光子計(jì)數(shù)器,增益為10^5,光電倍增管增益可以達(dá)到10^9;7、 知識產(chǎn)權(quán)的軟件系統(tǒng)可直接計(jì)算拷貝數(shù)、拷貝數(shù)濃度,CNV值,突變豐度;閾值線可自動(dòng)或手動(dòng)完成,每個(gè)樣本可單獨(dú)設(shè)定閾值線;輸出數(shù)據(jù)圖標(biāo)、直方圖、一維圖、二維圖、濃度圖、95%置信度不確定性區(qū)間等;軟件可自動(dòng)識別復(fù)雜微滴分簇四簇;軟件具備數(shù)據(jù)質(zhì)控功能,支持陽性微滴數(shù)、陰性微滴數(shù)、總微滴數(shù)統(tǒng)計(jì)及這些指標(biāo)的任意組合;單個(gè)樣本100,000微滴的反應(yīng)體系以及高靈敏度的檢測系統(tǒng),配以獨(dú)特的軟件系統(tǒng),可以實(shí)現(xiàn)高達(dá)20重的PCR分析;8、單次檢測通量96個(gè)樣本,操作靈活;數(shù)字PCR 浚和(上海)儀器科技有限公司值得用戶放心。
同時(shí),從公式也可以看出,隨著反應(yīng)陽性體系數(shù)(X)的增加,體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)相對于X會(huì)有較大的差距,隨著X的持續(xù)增加,數(shù)字PCR結(jié)果的不確定度也隨著提高,總體來說,數(shù)字PCR陽性體系的數(shù)量不得超過總體系數(shù)量的80%。另一個(gè)方面,N的增加會(huì)使整個(gè)數(shù)字PCR體系具有較大的線性范圍,并可以提高反應(yīng)的靈敏度、穩(wěn)定性以及可重復(fù)性。因此,目前dPCR都需要在成本可控的情況下,增加分配的腔室數(shù)和液滴數(shù)。商業(yè)化dPCR平臺(tái)及其特點(diǎn)發(fā)展到現(xiàn)在,市面上常見的dPCR主要有兩種:微滴式dPCR(dropletdPCR,ddPCR)和芯片式dPCR(chipdPCR,cdPCR)技術(shù)。由于芯片式dPCR制造芯片的成本較高,目前微滴式dPCR正越來越受到企業(yè)的認(rèn)可??:?上海)儀器科技有限公司為您提供數(shù)字PCR ,歡迎新老客戶來電!江西藥品數(shù)字PCR供應(yīng)商
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二代測序輔助建庫目前靶向測序建庫方法包括擴(kuò)增子方法,在均相溶液中,當(dāng)擴(kuò)增引物增加時(shí),由于擴(kuò)增引物之間的相互作用,從而影響擴(kuò)增的效率;如果將其分散到大量微液滴中擴(kuò)增,將可降低引物間相互作用,提高擴(kuò)增效率。同時(shí)還可以實(shí)現(xiàn)對于少量模板的有效擴(kuò)增,得到更多的有效測序數(shù)據(jù)。CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗(yàn)證CRISPR-Cas9技術(shù)的發(fā)明,是基因編輯技術(shù)的一大突破,但如何驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)是否成功,仍需要高靈敏度的檢測方法,數(shù)字PCR技術(shù)可以滿足這一需求。Broad研究所張鋒團(tuán)隊(duì)發(fā)明了以CRISPR為基礎(chǔ)的SHERLOCK技術(shù)可以對核酸進(jìn)行高靈敏度的定性檢測,但精確定量評估時(shí)仍采取了數(shù)字PCR進(jìn)行確認(rèn)。新疆體積小數(shù)字PCR咨詢報(bào)價(jià)