數(shù)字PCR也叫DigitalPCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對結(jié)果的判定不依賴于擴增曲線循環(huán)Ct值,不受擴增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。數(shù)字PCR基本原理是將一個樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個微滴單元包含一個或多個拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個單元都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴增,然后再對每個單元進(jìn)行熒光信號的統(tǒng)計并計算。相對而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別??:?上海)儀器科技有限公司為您提供數(shù)字PCR ,有想法可以來我司咨詢!廣東安全數(shù)字PCR維修
數(shù)字PCR(DigtalPCR)是一種核酸定量精密檢測的新興技術(shù)手段,源于于20世紀(jì)由Vogelstein等提出。它是將稀釋后的核酸模板分配到大量不同的反應(yīng)單元中,使每個反應(yīng)單元中有一個或沒有核酸。利用PCR擴增的同時,加入可檢測熒光。待擴增結(jié)束時,使用統(tǒng)計學(xué)方法采集每個反應(yīng)單元出現(xiàn)的熒光次數(shù),從而定量檢測樣本中的核酸濃度?;诜忠悍绞降牟煌?,數(shù)字PCR主要分為3種:微流體數(shù)字PCR、微滴數(shù)字PCR和芯片數(shù)字PCR,數(shù)字PCR儀器目前是市場測試校準(zhǔn)高的。寧夏精密數(shù)字PCR供應(yīng)商浚和(上海)儀器科技有限公司力于提供數(shù)字PCR ,有想法的可以來電咨詢!
與常規(guī)的PCR的方法相比,dPCR有很好的優(yōu)勢。***定量常規(guī)PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,由于樣品測定在各種條件上不會完全一致,會造成PCR擴增效率的差異,從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴增動力學(xué)影響,可以進(jìn)行***定量。樣品需求量低在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優(yōu)勢。高靈敏度ddPCR本質(zhì)上是 將一個傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個 的PCR反應(yīng),在這些反應(yīng)中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品,且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。高耐受性由于目的序列被分配到多個微滴中,***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對反應(yīng)的干擾,擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。
定量PCR和數(shù)字PCR的特點:1.在20多年的使用和發(fā)展中,定量PCR作為一種技術(shù)平臺,已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù),在工業(yè)界和分子檢測的某些應(yīng)用上,定量PCR已經(jīng)成為“金標(biāo)準(zhǔn)”?;A(chǔ)研究方面,則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標(biāo)準(zhǔn)實驗指南”。2.在定量PCR的各種應(yīng)用中,基因表達(dá)分析(geneexpressionanalysis)的應(yīng)用比重約占七成,綜合各種因素來看,眼下定量PCR還是進(jìn)行基因表達(dá)研究的理想手段。3.上述的“各種因素”具體展開,主要包括:通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻(xiàn)與protocol的數(shù)目等等。4.就目前市場上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來看,定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢,意味著同一個run內(nèi)可對各種表達(dá)豐度的樣品進(jìn)行分析??:?上海)儀器科技有限公司是一家專業(yè)提供數(shù)字PCR 的公司,有想法的不要錯過哦!
數(shù)字PCR的應(yīng)用檢驗檢疫食品安全?轉(zhuǎn)基因食品檢測(國標(biāo))?病原菌鑒定?動物源性檢測分析科研?基因表達(dá)差異監(jiān)測?CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證?甲基化含量鑒定?單細(xì)胞研究:測序、PCR臨床?**液體活檢:早篩、用藥、監(jiān)測、復(fù)發(fā)?無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速?***性疾?。篐BV、HIV定量據(jù)悉,MiniDrop?**團隊由微流控、光學(xué)、機電學(xué)、化學(xué)、臨床醫(yī)學(xué)、分子生物學(xué)等多學(xué)科交叉領(lǐng)域的**組成,依托精密儀器研發(fā)、生物納米材料與分子生物學(xué)等平臺,以微滴式數(shù)字PCR儀為**,打造了全自動液體處理工作站、核酸提取試劑盒等創(chuàng)新產(chǎn)品,致力于解決**、***領(lǐng)域的精細(xì)診斷??:?上海)儀器科技有限公司是一家專業(yè)提供數(shù)字PCR 的公司,有需求可以來電咨詢!廣東安全數(shù)字PCR維修
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微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)在傳統(tǒng)的PCR擴增前對樣品進(jìn)行微滴化處理,即將含有核酸分子的反應(yīng)體系分成成千上萬個納升級的微滴,其中每個微滴或不含待檢核酸靶分子,或者含有一個至數(shù)個待檢核酸靶分子。經(jīng)PCR擴增后,逐個對每個微滴進(jìn)行檢測,有熒光信號的微滴判讀為1,沒有熒光信號的微滴判讀為0,根據(jù)泊松分布原理及陽性微滴的個數(shù)與比例即可得出靶分子的起始拷貝數(shù)或濃度。與傳統(tǒng)PCR相比所具有的優(yōu)勢不依賴Ct值或內(nèi)參基因,即可確定低至單拷貝的待檢靶分子的***數(shù)目。微滴技術(shù)讓數(shù)字PCR更低成本,且更實用。廣東安全數(shù)字PCR維修