與常規(guī)的PCR的方法相比,dPCR有很好的優(yōu)勢(shì)。***定量常規(guī)PCR和實(shí)時(shí)熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA制定標(biāo)準(zhǔn)曲線,由于樣品測定在各種條件上不會(huì)完全一致,會(huì)造成PCR擴(kuò)增效率的差異,從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而ddPCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴(kuò)增動(dòng)力學(xué)影響,可以進(jìn)行***定量。樣品需求量低在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時(shí)具有明顯的優(yōu)勢(shì)。高靈敏度ddPCR本質(zhì)上是 將一個(gè)傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個(gè) 的PCR反應(yīng),在這些反應(yīng)中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品,且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。高耐受性由于目的序列被分配到多個(gè)微滴中,***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對(duì)反應(yīng)的干擾,擴(kuò)增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。數(shù)字PCR,就選浚和(上海)儀器科技有限公司,有需求可以來電數(shù)字PCR!黑龍江藥品數(shù)字PCR供應(yīng)商
數(shù)字PCR也叫DigitalPCR(dPCR),是近幾年發(fā)展起來的一種核酸定量分析技術(shù)。相較于傳統(tǒng)熒光定量PCR來說,數(shù)字PCR對(duì)結(jié)果的判定不依賴于擴(kuò)增曲線循環(huán)Ct值,不受擴(kuò)增效率的影響,能夠直接讀出DNA的分子個(gè)數(shù),能夠?qū)ζ鹗紭颖竞怂岱肿?**定量。數(shù)字PCR基本原理是將一個(gè)樣本分成幾十到幾萬份,然后再將其分配到不同的反應(yīng)單元中,使每個(gè)微滴單元包含一個(gè)或多個(gè)拷貝的核酸分子(即DNA模板),每個(gè)單元都會(huì)對(duì)目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,然后再對(duì)每個(gè)單元進(jìn)行熒光信號(hào)的統(tǒng)計(jì)并計(jì)算。相對(duì)而言,傳統(tǒng)PCR或qPCR反應(yīng)都是發(fā)生于同一體系當(dāng)中,這也是數(shù)字PCR與其比較大的區(qū)別。黑龍江藥品數(shù)字PCR供應(yīng)商浚和(上海)儀器科技有限公司為您提供數(shù)字PCR,歡迎您的來電!
研究方向低豐度及稀有序列的精確定量目前對(duì)于低豐度目標(biāo)序列的檢測,定量PCR、雜交、毛細(xì)管測序及NGS等方法都因受到背景DNA的干擾,使得檢測靈敏度及精確性都達(dá)不到精細(xì)定量的要求(如定量PCR檢測中Ct值大于33的情況下,其重復(fù)性就不是很高),而微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)通過**的微滴化處理,使得稀有的核酸序列從大量的背景DNA中分離出來,從而提高了檢測的靈敏度及重復(fù)性。此外,由于樣品微滴化處理的同時(shí),也將樣品中可能存在的***劑進(jìn)行了分裝,提高了數(shù)字PCR擴(kuò)增對(duì)于***劑的耐受程度,因此可具體應(yīng)用于很多臨床樣品(血液、尿液、糞便、痰液、腦脊液等)中對(duì)**核酸標(biāo)記物的檢測。一般而言,毛細(xì)管電泳和定量PCR的檢測靈敏度約在10%;NGS的靈敏度可達(dá)到1%;而ddPCR的檢測下限為0.001%。
無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細(xì)胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴(yán)重的危害,可以導(dǎo)致高達(dá)5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率 。而精細(xì)有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細(xì)胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時(shí),可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了。檢測數(shù)量一次可達(dá)96個(gè)樣品。
MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR應(yīng)用范圍如下:a.動(dòng)植物檢驗(yàn)檢疫,動(dòng)物源性分析、極微量病原菌檢測定量分析、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測;b.降低篩查成本、縮短檢測周期,適用于T13\T18\T21三體綜合征等遺傳病的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估;適用于zhong瘤早期篩查、分子分型、靶向用藥和療效監(jiān)測等;適用于傳染性疾病的早期診斷和診療指導(dǎo);c.可用于DNA甲基化的檢測、CRISPR-Cas9基因編輯效率檢測等。d.基因表達(dá)差異監(jiān)測單細(xì)胞研究:測序、PCRe.無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速、傳染性疾?。篐BV、HIV、CO VID-19定量數(shù)字PCR,就選浚和(上海)儀器科技有限公司,用戶的信賴之選。黑龍江藥品數(shù)字PCR供應(yīng)商
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研究方向無創(chuàng)產(chǎn)前篩查無創(chuàng)傷的產(chǎn)前診斷,如21號(hào)染色體為3倍體的唐氏綜合征、已知父母基因型的胎兒地貧檢測或已知父母基因型的其它核酸病檢測(孟德爾相關(guān)遺傳疾病)。目前標(biāo)本來源主要為血液,而待檢測的胎兒DNA受到母體DNA的干擾,影響了檢測的準(zhǔn)確性。而QX200檢測系統(tǒng)獨(dú)特的微滴化技術(shù)完全可以作為二代測序法的補(bǔ)充來進(jìn)行的無創(chuàng)傷產(chǎn)前診斷,從而提高工作效率及節(jié)約成本。轉(zhuǎn)基 因食品或成分的檢測目前在確定轉(zhuǎn)基因作物或成分的含量時(shí)采取定量PCR的標(biāo)準(zhǔn)曲線法,這種方法需要依賴于已知濃度的標(biāo)準(zhǔn)品(CertifiedReferenceMaterialsCalibrants,CRMCs)。ddPCR***定量的方式可以徹底解決這些標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的定標(biāo)工作。黑龍江藥品數(shù)字PCR供應(yīng)商