與常規(guī)的PCR的方法相比,dPCR有很好的優(yōu)勢。***定量常規(guī)PCR和實時熒光PCR定量檢測都需要已知拷貝數(shù)的標準DNA制定標準曲線,由于樣品測定在各種條件上不會完全一致,會造成PCR擴增效率的差異,從而影響定量結(jié)果的準確性。而ddPCR不受標準曲線和擴增動力學(xué)影響,可以進行***定量。樣品需求量低在檢測珍貴樣品和樣品核酸存在降解時具有明顯的優(yōu)勢。高靈敏度ddPCR本質(zhì)上是 將一個傳統(tǒng)的PCR反應(yīng)分成了數(shù)萬個 的PCR反應(yīng),在這些反應(yīng)中可以精確地檢測到很小的目的片段的差異、單拷貝甚至是低濃度混雜樣品,且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。高耐受性由于目的序列被分配到多個微滴中,***降低了體系間的影響以及背景序列和***物對反應(yīng)的干擾,擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。動物源性的檢測分析。四川檢測數(shù)字PCR價格
定量PCR和數(shù)字PCR的特點:5.目前定量PCR已經(jīng)能實現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作。6.數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對標準曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù),提高了實驗結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,甚至能用來對標準品進行定標。7.基于***定量的方式,數(shù)字PCR結(jié)果的高重復(fù)性和高精度可實現(xiàn)微小差異的基因表達分析,如等位基因的不平衡表達、單細胞基因表達分析、microRNA表達分析等等。所謂“微小差異”的標準一般而言是指表達水平的差異在2倍以內(nèi)。8.同等條件下,數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢,使得該技術(shù)已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測、轉(zhuǎn)基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術(shù)。吉林檢測數(shù)字PCR價格率先行業(yè)的10萬個微滴數(shù),保證泊松分布所需要的充分的樣本量。
CNV(CopyNumberVariations,拷貝數(shù)變異)研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異,測序方法適用于高于30%的變異率檢測,而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數(shù)字PCR通過直接計數(shù)目標基因與參照基因(拷貝數(shù)為1的基因,例如RNaseP)的數(shù)目, 計算比值,直接得到目標基因的拷貝數(shù)可以達到極高的拷貝數(shù)分辨精度。除此之外,dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學(xué)直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待,而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標準品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應(yīng)用方向上,已經(jīng)有大量實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。
數(shù)字PCR(dPCR)是近年來引起重視并迅速發(fā)展起來的一種突破性的核酸定量分析技術(shù)。該技術(shù)先將核酸模板進行稀釋,分配到大量 的反應(yīng)單元中,使每個反應(yīng)單元中只有單個模板分子,然后進行PCR擴增反應(yīng),擴增結(jié)束后對每個反應(yīng)室的熒光信號進行統(tǒng)計學(xué)分析,來定量DNA拷貝數(shù)。數(shù)字PCR采用先擴增后定量,因此不依賴擴增曲線的循環(huán)閾值(Ct),也無需采用內(nèi)參基因和標準曲線,準確度高、重現(xiàn)性好,可以實現(xiàn)***定量分析。由于其獨特的技術(shù)優(yōu)勢,已經(jīng)在臨床診斷、轉(zhuǎn)基因成分定量、單細胞基因表達分析、環(huán)境微生物檢測和下一代測序等研究領(lǐng)域顯示出巨大的優(yōu)勢和應(yīng)用前景。國內(nèi)擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀。
微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)為微流控微滴生成技術(shù),采用原創(chuàng)性的油液,單個樣本在微米級流道中利用氣壓驅(qū)動在3分鐘內(nèi)生成10萬微滴,單次運行生成80萬微滴,微滴體積達皮升級,檢測線性范圍達到6個數(shù)量級,各項指標均超越國內(nèi)外主流產(chǎn)品。在液滴生成數(shù)上,MicroDrop?能達到國外同級別產(chǎn)品的5倍。與此同時,設(shè)備制作成本只有國外同類產(chǎn)品的一半。這減低了精細醫(yī)療的成本,打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。這意味著在未來,采用外周血、唾液、尿液、腦脊液等樣本進行低成本、高靈敏、快速的無創(chuàng)檢測成為可能。雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法。吉林檢測數(shù)字PCR價格
CRISPR-Cas9基因編輯結(jié)果驗證。四川檢測數(shù)字PCR價格
無創(chuàng)產(chǎn)前檢查鐮狀細胞貧血(sicklecellanemia)是HBB基因突變引起的常染色體顯性遺傳病,有嚴重的危害,可以導(dǎo)致高達5%的胎兒死亡率及4.62%的孕婦死亡率。而精細有效的無創(chuàng)產(chǎn)前診斷是預(yù)防鐮狀細胞貧血患兒出生的有效方法。研究人員采用dPCR技術(shù)檢測孕婦胎兒 游離DNA(cff-DNA)HBB基因突變。結(jié)果顯示,dPCR技術(shù)能夠確定87%的男性胎兒(n=45)和75%的女性胎兒(n=20)HBB基因的突變狀態(tài)。當(dāng)cff-DNA濃度大于7%時,可以**的檢測出HBB基因突變[3],可以說是相當(dāng)厲害了。四川檢測數(shù)字PCR價格
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