個體化診療通過檢測T790M位點(diǎn)突變情況,可以更好地評估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技 術(shù)展現(xiàn)出了 的檢測精度,此外,dPCR***定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了,可以監(jiān)控突變含量變化,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。2.)基因表達(dá)分析伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血?。–ML)患者延長生存期,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達(dá)量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行測定,結(jié)果檢測下限可以達(dá)到0.001%,顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢能檢測低至0.01%的突變基因。廣州國產(chǎn)數(shù)字PCR解決方案
研究方向基因表達(dá)差異研究檢測時完全不依賴傳統(tǒng)的Ct值即可實現(xiàn)真正意義上的***定量,從而提供了比實時熒光定量PCR更精確的基因差異表達(dá)研究,尤其對于那些靶基因表達(dá)差異微小的情況:microRNA、lncRNAs等的表達(dá)分析、等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、Exosome內(nèi)核酸分子定量分析等??截悢?shù)變異(CNV)研究微滴化的樣品處理及檢測,這種擺脫Ct值的計算方法而直接獲取目標(biāo)基因的***拷貝數(shù),為拷貝數(shù)變異的研究提供了***的檢測精度。是其他諸如二代測序、芯片雜交等平臺無法達(dá)到的,因此采用數(shù)字PCR能夠有效對NGS、aCGH的實驗結(jié)果進(jìn)行驗證,并具有成本低、通量高的特點(diǎn)。廣州廣州永諾數(shù)字PCR解決方案數(shù)字PCR儀廣泛應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、環(huán)境等領(lǐng)域。
相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:·能夠有效區(qū)分濃度差異微小的樣品:更好的準(zhǔn)確度、精密度和重復(fù)性,可以用于精確測定靶基因的相對表達(dá),基因拷貝數(shù)變異分析等?!?shù)字PCR可開發(fā)針對不同**、不同樣本以及不同的樣本環(huán)境提供檢測解決方案,該技術(shù)的應(yīng)用范圍廣,尤其在液體活檢領(lǐng)域,已開發(fā)針對肺*、乳腺*、腸*、胃*等上百個位點(diǎn)檢測試劑盒,可精細(xì)指導(dǎo)臨床***的診斷,以便患者在后續(xù)得到更及時并且適當(dāng)?shù)?**方案提供。
MicroDrop-100系統(tǒng)產(chǎn)品特點(diǎn):一、適應(yīng)性廣,靈活性高1、理論上可覆蓋qPCR(熒光定量PCR)的所有應(yīng)用2、樣本多樣性,樣本通量可達(dá)96個樣本,支持靈活設(shè)定3、開放式平臺,支持用戶自行開發(fā)試劑、產(chǎn)品。二、靈敏度高,準(zhǔn)確性高1、***定量——無需依賴標(biāo)準(zhǔn)曲線2、采用微滴式技術(shù)高達(dá)100,000個的微滴3、線性范圍達(dá)到6個數(shù)量級,靈敏度高達(dá)萬分之一三、可分析復(fù)雜混合物1、準(zhǔn)確度不完全依賴于擴(kuò)增效率2、雙通道熒光檢測,支持EvaGreen染料及探針法3、支持多重數(shù)字PCR四、操作簡單,使用方便1、全封閉防污染設(shè)計,一鍵式自動化操作。2、可選全中文分析軟件分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。
數(shù)字PCR采用的策略概括起來非常簡單,就是“分而治之”(divideandconquer)[1],這種做法非常類似于計算機(jī)科學(xué)中的“分治算法”,將一個標(biāo)準(zhǔn)PCR反應(yīng)分配到大量微小的反應(yīng)器中,在每個反應(yīng)器中包含或不包含一個或多個拷貝的目標(biāo)分子(DNA模板),實現(xiàn)“單分子模板PCR擴(kuò)增”,擴(kuò)增結(jié)束后,通過陽性反應(yīng)器的數(shù)目“數(shù)出”目標(biāo)序列的拷貝數(shù)。在實際的數(shù)字PCR實驗中,事實上是通過呈現(xiàn)兩種信號類型的反應(yīng)器比例和數(shù)目進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析,計算出原始樣本中的模板拷貝數(shù)。2個光電倍增管(PMT),靈敏度及增益優(yōu)于MPCC或CCD。南通國產(chǎn)數(shù)字PCR解決方案
數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測序技術(shù),共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器。廣州國產(chǎn)數(shù)字PCR解決方案
CNV(CopyNumberVariations,拷貝數(shù)變異)研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異,測序方法適用于高于30%的變異率檢測,而qPCR的比較**辨在1.5倍左右,數(shù)字PCR通過直接計數(shù)目標(biāo)基因與參照基因(拷貝數(shù)為1的基因,例如RNaseP)的數(shù)目, 計算比值,直接得到目標(biāo)基因的拷貝數(shù)可以達(dá)到極高的拷貝數(shù)分辨精度。除此之外,dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達(dá)研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學(xué)直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待,而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標(biāo)準(zhǔn)品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應(yīng)用方向上,已經(jīng)有大量實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。廣州國產(chǎn)數(shù)字PCR解決方案
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