定量PCR和數(shù)字PCR的特點：

1. 在20多年的使用和發(fā)展中，定量PCR作為一種技術(shù)平臺，已經(jīng)產(chǎn)出海量的數(shù)據(jù)，在工業(yè)界和分子檢測的某些應(yīng)用上，定量PCR已經(jīng)成為“金標(biāo)準(zhǔn)”?；A(chǔ)研究方面，則形成了被稱為MIQE的“定量PCR標(biāo)準(zhǔn)實驗指南”。   

2. 在定量PCR的各種應(yīng)用中，基因表達(dá)分析(gene expression analysis)的應(yīng)用比重約占七成，綜合各種因素來看，眼下定量PCR還是進(jìn)行基因表達(dá)研究的理想手段。   

3. 上述的“各種因素”具體展開，主要包括：通量、自動化程度、各種檢測探針與染料、檢測通道、成本和可參考文獻(xiàn)與protocol的數(shù)目等等。   

4. 就目前市場上已有的數(shù)字PCR設(shè)備來看，定量PCR在檢測的線性范圍上具有優(yōu)勢，意味著同一個run內(nèi)可對各種表達(dá)豐度的樣品進(jìn)行分析。

       數(shù)字PCR是一種核酸分子***值定量技術(shù)，能夠直接數(shù)出DNA分子的個數(shù)，是對起始樣品的***值定量。該試劑盒采用創(chuàng)新的一步法逆轉(zhuǎn)錄數(shù)字PCR技術(shù)，將*****的RNA逆轉(zhuǎn)錄及數(shù)字PCR擴增整合到一個反應(yīng)體系，單管雙檢同時測定*****的兩個**基因，消除***變異帶來的漏檢風(fēng)險。

       MicroDrop-100全新微滴式數(shù)字PCR系統(tǒng)為永諾生物旗下子公司永諾醫(yī)療自主研發(fā)的檢測設(shè)備，此系統(tǒng)檢測無需依賴標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，可達(dá)到***定量，具有超高靈敏度，檢測靈敏度高達(dá)1個拷貝，且具有較好的重復(fù)性，降低同樣本不同批次的檢測差異。數(shù)字PCR結(jié)果采取終點判讀法，相比熒光定量PCR的過程性讀取可有效降低對PCR 擴增效率的依賴、降低PCR***物對檢測結(jié)果的影響，對于復(fù)雜樣本也能提供穩(wěn)定的檢測結(jié)果等特點，在******臨床實驗及***患者的治療過程中可發(fā)揮重要作用。 杭州MicroDrop-100數(shù)字PCR現(xiàn)貨高靈敏度——數(shù)字PCR的靈敏度與同體積反應(yīng)體系的分割份數(shù)成正比。

與常規(guī)PCR方法相比，數(shù)字PCR有如下優(yōu)勢：

       1、能夠完全定量：常規(guī)PCR定量需要制定已知拷貝數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)DNA曲線，但是由于待檢樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線不在統(tǒng)一體系，條件上會存在差異，另外加上PCR擴增效率的差異從而影響定量結(jié)果的準(zhǔn)確性。而數(shù)字PCR不受標(biāo)準(zhǔn)曲線和擴增動力學(xué)影響，可進(jìn)行完全定量。

       2、樣本需求量低：適用于珍貴樣本或核酸降解嚴(yán)重的樣本

       3、靈敏度高：數(shù)字PCR是將傳統(tǒng)PCR反應(yīng)體系分割成數(shù)萬個**PCR反應(yīng)，這些反應(yīng)可以精確地檢測很小的目的片段差異、單拷貝甚至低濃度的混雜樣本。且能避免非同源異質(zhì)雙鏈的形成。

       4、高耐受性：由于目的序列被分配到多個**反應(yīng)體系中，明顯降低了背景信號和yì zhì物對反應(yīng)的干擾，擴增基質(zhì)效應(yīng)大大減小。

       MiniDrop數(shù)字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數(shù)據(jù)分析軟件組成，該系統(tǒng)的**為微流控微滴生成技術(shù)，采用原創(chuàng)性的油液，在40um微管道中利用氣壓驅(qū)動在2分鐘內(nèi)生成50萬微滴，單次運行生成400萬微滴，微滴體積達(dá)皮升級，檢測線性范圍達(dá)到5個數(shù)量級，各項指標(biāo)均超越國內(nèi)外的主流產(chǎn)品。

       MiniDrop創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動的方法將樣本分割成50萬份，打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。 適用復(fù)雜樣品的檢測。

       CNV（Copy Number Variations，拷貝數(shù)變異）研究需要極高的定量精度以區(qū)別不同拷貝數(shù)之間的微小差異，測序方法適用于高于30%的變異率檢測，而qPCR的比較**辨在1.5倍左右，數(shù)字PCR通過直接計數(shù)目標(biāo)基因與參照基因( 拷貝數(shù)為1的基因，例如RNaseP) 的數(shù)目，計算比值，直接得到目標(biāo)基因的拷貝數(shù)可以達(dá)到極高的拷貝數(shù)分辨精度。

       除此之外，dPCR在病原微生物檢測、microRNA研究、基因表達(dá)研究、NGS測序文庫的***定量、表觀遺傳學(xué)直接相關(guān)的DNA甲基化定量檢測、ChIP定量鑒定等領(lǐng)域的應(yīng)用都令人極為期待，而在轉(zhuǎn)基因成分鑒定、分子標(biāo)準(zhǔn)品精確定量、環(huán)境樣本檢測等具體的應(yīng)用方向上，已經(jīng)有大量實驗數(shù)據(jù)和結(jié)果證明了dPCR技術(shù)的優(yōu)良性能。

線性范圍達(dá)到6個數(shù)量級，靈敏度高達(dá)萬分之一。南京JUE對定量數(shù)字PCR銷售電話

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dPCR的基本原理

       目前dPCR主要有兩種形式，芯片式和液滴式，但基本原理都是將大量稀釋后的核酸溶液分散至芯片的微反應(yīng)器或微滴中，每個反應(yīng)器的核酸模板數(shù)少于或者等于1個。這樣經(jīng)過PCR循環(huán)之后，有一個核酸分子模板的反應(yīng)器就會給出熒光信號，沒有模板的反應(yīng)器就沒有熒光信號。根據(jù)相對比例和反應(yīng)器的體積，就可以推算出原始溶液的核酸濃度。可以使用幾種不同的方法來分配樣品，包括微孔板，毛細(xì)管，油乳劑和帶有核酸結(jié)合表面的小型化腔室陣列。樣品的分配使人們可以通過假設(shè)分子種群遵循泊松分布來估計不同分子的數(shù)量，根據(jù)泊松分布的原理，反應(yīng)體系中目標(biāo)分子的拷貝數(shù)可以通過公式A=-ln[(N-X)/N]*N計算，從而解決了多個目標(biāo)分子存在于單個液滴中的可能性。 南京JUE對定量數(shù)字PCR銷售電話

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