定量PCR和數(shù)字PCR的特點(diǎn):
5. 目前定量PCR已經(jīng)能實(shí)現(xiàn)高通量樣品條件下的自動化操作。
6. 數(shù)字PCR在單分子層面上的***定量,可以徹底擺脫對標(biāo)準(zhǔn)曲線的依賴而直接給出靶序列的拷貝數(shù),提高了實(shí)驗(yàn)結(jié)果在批內(nèi)和批間的穩(wěn)定性,甚至能用來對標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行定標(biāo)。
7. 基于***定量的方式,數(shù)字PCR結(jié)果的高重復(fù)性和高精度可實(shí)現(xiàn)微小差異的基因表達(dá)分析,如等位基因的不平衡表達(dá)、單細(xì)胞基因表達(dá)分析、microRNA表達(dá)分析等等。所謂“微小差異”的標(biāo)準(zhǔn)一般而言是指表達(dá)水平的差異在2倍以內(nèi)。
8. 同等條件下,數(shù)字PCR在靈敏度方面擁有優(yōu)勢,使得該技術(shù)已成為**的液態(tài)活檢、病原微生物檢測、轉(zhuǎn)基因成分測定、宿主殘留DNA分析等的熱門技術(shù)。
**個體化診療
通過檢測T790M位點(diǎn)突變情況,可以更好地評估一代TKI***的療效及耐藥情況并指導(dǎo)第三代TKI靶向藥Osimertinib的使用。然而,由于qPCR平臺ARMS檢測技術(shù)的靈敏度有限,沒有辦法在含大量EGFR基因野生型背景核酸中高效準(zhǔn)確的檢測到T790M突變。這個時候dPCR技術(shù)展現(xiàn)出了****的檢測精度,此外,dPCR***定量的優(yōu)勢也能充分發(fā)揮出來了,可以監(jiān)控突變含量變化,做到及早發(fā)現(xiàn)耐藥。
2.)基因表達(dá)分析
伊馬替尼(Imatinib)可以有效幫助很多慢性髓細(xì)胞白血病(CML)患者延長生存期,但是臨床上發(fā)現(xiàn),伊馬替尼的療效與BCR-ABL1融合基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物表達(dá)量有很大的關(guān)系。研究人員采用dPCR對CML患者的BCR-ABL1融合基因轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物進(jìn)行測定,結(jié)果檢測下限可以達(dá)到0.001%,顯示出dPCR在痕量核酸檢測方面比qPCR具有無可比擬的優(yōu)勢 廣州JUE對定量數(shù)字PCR原理數(shù)字PCR技術(shù)與高通量的二代測序技術(shù),共同組成液體活檢領(lǐng)域的兩大利器。
相對于二代測序、基因芯片和定量PCR而言,數(shù)字PCR具備以下優(yōu)勢:
● 靈敏度可達(dá)到單個核酸分子:檢測限低至0.001%,主要系為數(shù)字PCR可以實(shí)現(xiàn)靶標(biāo)DNA/RNA的生物濃縮;
● 無需標(biāo)準(zhǔn)曲線活參照基因進(jìn)行對比來測定核算量,可對靶分子起始量進(jìn)行***定量,直接獨(dú)處DNA分子的個數(shù);
● 適合環(huán)境復(fù)雜樣品的檢測:終點(diǎn)PCR檢測,不依賴Ct值,不依賴擴(kuò)增效率,能克服PCR***劑的影響,避免樣品間的交叉***問題,適合各類復(fù)雜環(huán)境中的樣本進(jìn)行***定量,如動血樣、糞便、尿液、痰液、水樣、土壤、植物等;
數(shù)字PCR通過將一個樣本分成幾十到幾萬份,分配到不同的反應(yīng)單元(微滴),包含一個或多個拷貝的核酸分子(也就是說我們所說的 DNA 模板) ,這是與PCR或qPCR反應(yīng)比較大的區(qū)別,PCR或qPCR只在一個反應(yīng)體系中進(jìn)行,而數(shù)字PCR在每個反應(yīng)單元(微滴)中都會對目標(biāo)分子進(jìn)行擴(kuò)增,擴(kuò)增結(jié)束后統(tǒng)計熒光信號并分析。是不是聽起來特別高(yi)大(lian)上(meng)?舉個栗子,PCR或qPCR檢測突變像是在大海里撈一個會發(fā)光的針,周圍都是海水,很難看到針的光在哪,而dPCR就像把海水盛到好多個碗里面,瞧一眼很容易就知道哪個碗在發(fā)光了,而且,系統(tǒng)還會數(shù)出來到底有多少個碗里是發(fā)光的,多少個碗里是沒發(fā)光的,這樣一比,不就很容易的知道有多少數(shù)量的突變,就能做到***定量了。分辨率——低至0.1倍基因表達(dá)差異。
MicroDrop-100微滴式數(shù)字PCR 應(yīng)用范圍如下:
a. 動植物檢驗(yàn)檢疫,動物源性分析、極微量病原菌檢測定量分析、轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測;
b. 降低篩查成本、縮短檢測周期,適用于T13\T18\T21三體綜合征等遺傳病的風(fēng)險評估;適用于zhong瘤早期篩查、分子分型、靶向用藥和療效監(jiān)測等;適用于傳染性疾病的早期診斷和診療指導(dǎo);
c. 可用于DNA甲基化的檢測、CRISPR-Cas9基因編輯效率檢測等。
d.基因表達(dá)差異監(jiān)測單細(xì)胞研究:測序、PCR
e.無創(chuàng)產(chǎn)前篩查:低成本、快速、傳染性疾病:HBV、HIV、COVID-19 定量
國內(nèi)擁有完全自主知識產(chǎn)權(quán)的微滴式數(shù)字PCR儀。寧波國產(chǎn)數(shù)字PCR
線性范圍達(dá)到6個數(shù)量級,靈敏度高達(dá)萬分之一。常州MicroDrop-100數(shù)字PCR簡介
MiniDrop數(shù)字PCR儀由Creator微滴生成儀、Detector微滴檢測儀、MD Microchip微流控芯片及MD Plotter數(shù)據(jù)分析軟件組成,該系統(tǒng)的**為微流控微滴生成技術(shù),采用原創(chuàng)性的油液,在40um微管道中利用氣壓驅(qū)動在2分鐘內(nèi)生成50萬微滴,單次運(yùn)行生成400萬微滴,微滴體積達(dá)皮升級,檢測線性范圍達(dá)到5個數(shù)量級,各項指標(biāo)均超越國內(nèi)外的主流產(chǎn)品。
MiniDrop創(chuàng)新性采用高壓驅(qū)動的方法將樣本分割成50萬份,打破了國外廠商在微滴式數(shù)字PCR領(lǐng)域的壟斷。
----- 常州MicroDrop-100數(shù)字PCR簡介
浚和(上海)儀器有限公司是一家供應(yīng)國內(nèi)外先進(jìn)儀器和設(shè)備的專業(yè)供應(yīng)商和服務(wù)商,致力于為客戶提供專業(yè)的定制化解決方案。多年來,持續(xù)為醫(yī)藥、化工、高校、科研單位、檢測院等多個行業(yè)提供先進(jìn)的產(chǎn)品和專業(yè)的服務(wù)。
浚和在不斷引進(jìn)國內(nèi)外先進(jìn)儀器設(shè)備的同時,結(jié)合行業(yè)和市場需求,加強(qiáng)和客戶之間的溝通,并與國際上多家**儀器設(shè)備制造商保持著長期穩(wěn)定的合作關(guān)系,不定期地與合作商進(jìn)行技術(shù)交流,努力加強(qiáng)自身技術(shù)力量。公司配備了數(shù)名有著多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn)的技術(shù)人員,依靠雄厚的技術(shù)實(shí)力、科學(xué)合理的配置方案、專業(yè)的安裝調(diào)試和周到的售后服務(wù),得到了廣大用戶的支持與信賴。
公司主要經(jīng)營產(chǎn)品包括:等離子清洗機(jī)、真空泵、噴霧干燥器、數(shù)字PCR、高壓滅菌鍋、培養(yǎng)箱、切片機(jī)、水分測定儀、激光粒度儀、光譜儀、溫濕度記錄儀等,目前主要合作品牌有:日本雅馬拓YAMATO、日本KASHIYAMA、日本HORIBA、廣州永諾 、日本KEM等。同時,公司還提供專業(yè)的技術(shù)服務(wù),如設(shè)備的維護(hù)、驗(yàn)證等。
浚和儀器將始終以行業(yè)特點(diǎn)為立足點(diǎn),以客戶需求為導(dǎo)向,不斷地提高自身專業(yè)技術(shù)能力,不停地完善客戶服務(wù)質(zhì)量,在發(fā)展中保持創(chuàng)新的精神,力求與客戶共同進(jìn)步,為行業(yè)的發(fā)展作出不懈的努力。