外泌體作為疾病診斷標志物的潛在應用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統的技術突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產面臨很大的挑戰(zhàn)。外泌體(exosome)是細胞分泌囊泡(extracellularvesicles)的一種亞型,存在于生物體液中,并參與多種生理和病理過程。外泌體被認為是細胞間通信的一種新機制,允許細胞交換蛋白質、脂質和遺傳物質。過去,細胞分泌的外泌體一度被認為只是參與廢物排泄;現在,隨著高通量蛋白質組學和基因組學的發(fā)展,外泌體被寬泛認為是生物體內細胞間短距離和長距離交流的高度保守的途徑,這種細胞間通信對于正常細胞和瘤細胞都是非常重要的。外泌體無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。外泌體功能的影像
外泌體mirRNA和蛋白質被認為是NSCLC的預后因子。Dejima等在研究NSCLC患者預后的生物標志物時發(fā)現,外泌體miR-4257和miR-21的含量顯著上升。此外,還有研究表明,低水平miR-146a-5p的NSCLC患者較高水平miR-146a-5p的NSCLC患者有更高的復發(fā)率。Sandfeld-Paulsen等在研究276例NSCLC患者血漿的外泌體時發(fā)現,NY-ESO-1是單獨對低生存率有顯著影響的標志物。Silva等利用TaqMan低密度芯片的方法系統分析了28位NSCLC患者體內的365種miRNA,其中l(wèi)et-7f、miR-30e-3p和miR-20b表達均下調,進一步研究發(fā)現,let-7f和miR-30e-3p水平可以區(qū)分早期和晚期NSCLC患者,高水平let-7f和miR-30e-3p與不良預后密切相關。山東CD9外泌體慢病毒從體液和培養(yǎng)上清中高純度提取的高純度外泌體,在活內是否真的能發(fā)生作用尚未能確定。
事實上,動物實驗表明:在小鼠急性心肌梗塞術后,注射來源于間充質干細胞、心臟祖細胞、胚胎干細胞或心肌源性細胞的外泌體均可改善心臟功能,減輕心臟纖維化,刺激血管生成。例如,心源性細胞外泌體能通過特異性的巨噬細胞極化為急性心肌梗死提供心臟保護作用。心臟再灌注后,CDCexo的輸注降低了大鼠和豬心肌梗死模型的梗死面積,而且CDCexo會減少梗死組織內CD68+巨噬細胞數量,并改變巨噬細胞的極化狀態(tài)。自體CD34+干細胞的移植可以改善缺血組織再灌注后的功能,并降低嚴重肢體缺血患者的截肢率。其作用機制在于:CD34+干細胞分泌的外泌體促進小鼠下肢缺血模型血管生成。雖然臨床前研究的證據表明干細胞釋放的外泌體可以作為心肌修復的潛在無細胞治理劑,但是,目前將外泌體完全用作心臟修復治理劑之前還是有很多重點問題需要解決。
外泌體(Exosome)是一種直徑為30-100nm的納米級脂質包裹體結構,內部包裹了蛋白、mRNA和microRNA等物質。外泌體由細胞分泌釋放出來,在血液等體液內傳播,較后又可被其他細胞吞噬,是細胞間通訊的重要介質。源自于間充質干細胞內分泌的外泌體,富含一百多種胞外基質蛋白,mRNA信使核糖核酸和多重生長因子。在臨床上,干細胞外泌體主要治理燒傷、燙傷、皮膚潰瘍,再生健康皮膚;在護膚方面,主要是對外傷受損、衰老中毒皮膚進行修復,比較全的調理皮膚、改善膚質,令肌膚恢復年輕、健康的狀態(tài)。突狀細胞釋放的外泌體可以強化殺傷性T細胞對癥狀細胞的特異性反應。
外泌體普遍參與細胞間物質運輸與信息傳遞,調控細胞生理活動。同時,外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導正常細胞轉化、促進種瘤發(fā)生和轉移等作用;此外,外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進行藥物遞送。外泌體相關數據庫有哪些?lexoRBase數據庫收集和描述人類血液外泌體中所有長的RNA,包括circRNA、lncRNA和mRNA。lEVpedia和Vesiclepedia數據庫匯總了不同囊泡研究中發(fā)現的蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。lExoCarta數據庫主要收錄了包括人、大鼠、小鼠、綿羊等幾個物種的286個研究結果,涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。外泌體不只可作為疾病診斷的生物標志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。細菌提取試劑盒廠家
超速離心是從生物體液或細胞上清分離外泌體的金標準方法。外泌體功能的影像
利用蛋白質免疫印跡和酶聯免疫吸附分析技術可以對外泌體標志性蛋白質進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經典表征手段之一,操作時往往需要細胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標志性蛋白質包括四跨膜蛋白質CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2,尿液中)和凋亡誘導因子6相互作用蛋白(Alix)等,內參蛋白質可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛-3-磷酸脫氫酶,陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB,線粒體標志蛋白)或鈣聯結蛋白Calnexin。在酶聯免疫吸附析法中,外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質,隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題,相比較而言,酶聯免疫吸附分析法比蛋白質免疫印跡法更加快速,適用于高通量分析。外泌體功能的影像