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外泌體PKH67

來源: 發(fā)布時間:2023-03-03

被特定部位的細(xì)胞獲取的瘤子外泌體可為腫細(xì)胞的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的腫細(xì)胞細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的腫細(xì)胞細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的腫細(xì)胞細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達(dá)譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá)。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測腫細(xì)胞轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。外泌體的提取的方式:PS親和法。外泌體發(fā)揮功能:將細(xì)胞或組織中多余的或者有害的分子排除,這為研究生物標(biāo)志物提供了可能。外泌體PKH67

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近年來,外泌體的捕獲技術(shù)越來越多,微流體系也被用于外泌體提取,此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高,且可及時獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測。在初次注射時外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面,并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜,所需的樣本量取決于流動通道的長度。另外,樣品量的注入速率比較低,因此,對于大樣品量,將需要較長的處理時間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前,研究人員已開發(fā)了多種方法來分離外泌體,離心技術(shù)仍然是常用方法,其他方法,例如過濾、磁珠分離和色譜法等,也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢,但目前仍然沒有一種公認(rèn)有效的提取方法,研究人員應(yīng)針對不同來源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。什么是細(xì)胞外泌體提取的外泌體的鑒定方式主要是通過形態(tài)學(xué)(電子顯微鏡技術(shù))、粒子大小以及標(biāo)志蛋白等方式實(shí)現(xiàn)的。

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被特定部位的細(xì)胞獲取的瘤子外泌體可為肉瘤的轉(zhuǎn)移準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移前微環(huán)境。用肺轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞來源的外泌體處理小鼠后可使骨轉(zhuǎn)傾向的肉瘤細(xì)胞重新定向。外泌體的蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)不同部位傾向性的肉瘤細(xì)胞來源的外泌體具有不同的整合素(integrin)表達(dá)譜,整合素α6β4和α6β1與肺轉(zhuǎn)有關(guān),而整合素αvβ5與肝轉(zhuǎn)有關(guān)。敲低整合素α6β4和αvβ5可減少外泌體被靶部位細(xì)胞獲取,進(jìn)而分別降低了肺和肝的轉(zhuǎn)移。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)外泌體整合素被細(xì)胞獲取后活躍了Src的磷酸化和促炎的S100基因的表達(dá)。通過臨床數(shù)據(jù)分析顯示外泌體整合素可作為預(yù)測肉瘤轉(zhuǎn)移的部位傾向性的診斷指標(biāo)。

細(xì)胞外小泡通過充當(dāng)脂肪組織、肝臟、骨骼肌和免疫細(xì)胞之間的細(xì)胞間通訊方式,在肥胖及其代謝并發(fā)癥的發(fā)展中發(fā)揮作用。外泌體可能在外周胰島素敏感性的調(diào)節(jié)中起作用,外周胰島素敏感性是T2D發(fā)病機(jī)理的主要組成部分。外泌體似乎通過至少兩種不同的機(jī)制來調(diào)節(jié)胰島素敏感性,即通過調(diào)節(jié)炎癥或通過與胰島素反應(yīng)性部位的直接相互作用。后者可通過與主要胰島素信號分子(例如磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/Akt信號通路)相互作用而影響胰島素信號通路而直接或間接發(fā)生。與對照組相比,糖尿病患者的血漿EV含量更高,并且與對照組相比,糖尿病小鼠的血漿外泌體數(shù)量也更高。然而,確定外泌體的作用及其在肝/腸軸通訊中的潛在作用將需要對它們的組成有更好的了解,特別是飲食是否會改變腸源性外泌體的含量,因此就胰島素反應(yīng)而言它們的生物學(xué)功能尚未研究。NTA技術(shù)已被作為外泌體表征手段之一。

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AFC自動收集器是將qEV分離法這一過程自動化的儀器,將用來收集外泌體樣本的微量離心管放置在AFC的中間轉(zhuǎn)盤內(nèi),根據(jù)稱重精確測量流體體積,可精確的測量到樣品中每一個液滴的重量并精確測量總重量。將在空隙體積之前從qEV柱洗脫的流體收集到AFC轉(zhuǎn)盤的單獨(dú)中心孔中并送至廢液桶,避免將不需要的空隙部分收集到微量離心管中。在提取期間,當(dāng)達(dá)到設(shè)定的提取體積后,轉(zhuǎn)盤會自動旋轉(zhuǎn)到下一個微量離心管繼續(xù)收集,到收集完成后自動停止。微滴式數(shù)字PCR技術(shù)不佳有效提高了核酸分子的擴(kuò)增效率,而且由于采用微滴計(jì)數(shù)的方法進(jìn)行定量,可以不依賴與RT-PCR的熒光信號和Ct值,對所測樣品中的核酸分子進(jìn)行一定定量。從研究上來講并不太嚴(yán)格區(qū)分外泌體或微泡。外泌體中常見的細(xì)胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶家族的一種。臍帶血外泌體

外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、唾液、尿液、乳汁等。外泌體PKH67

外泌體是指包含了復(fù)雜RNA和蛋白質(zhì)的小膜泡(30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn),1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中。所有培養(yǎng)的細(xì)胞類型均可分泌外泌體,且外泌體天然存在于體液中,包括血液、唾液、尿液、腦脊液和乳汁中。有關(guān)他們分泌和攝取及其組成、“運(yùn)載物”和相應(yīng)功能的精確分子機(jī)制剛剛開始研究。外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細(xì)胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體PKH67

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