密度梯度離心法根據(jù)在蔗糖、碘海醇或碘克沙醇等惰性溶液中的浮力密度將外泌體分成特定的層，目前普遍應(yīng)用的是蔗糖，這種方法可以成功地將亞細(xì)胞成分（例如過(guò)氧化物酶體，線粒體和核內(nèi)體）分離到密度梯度溶液中的不同層中。樣品被放置在梯度的頂部，當(dāng)施加離心力時(shí)，樣品中的顆粒以獨(dú)特的速率通過(guò)梯度，該梯度以從上到下的密度增加。樣品中的外泌體將在1.13-1.19g/ml的密度范圍富集，隨后可以通過(guò)分餾收集，密度梯度超速離心對(duì)從蛋白質(zhì)聚集體和非膜顆粒中分離出外泌體非常有效。此方法獲得的外泌體純度較高，但步驟繁瑣、費(fèi)時(shí)且會(huì)造成外泌體損失。免疫印跡或蛋白質(zhì)印跡是分析外泌體較常用的方法之一，其原理是外泌體上特異性抗原與抗體結(jié)合。外泌體的提取分離方法：PEG-base沉淀法。腹水提取試劑盒應(yīng)用

細(xì)胞攝取診療性外泌體：從樹突狀細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間充質(zhì)細(xì)胞中分離出的診療性外泌體可對(duì)靶細(xì)胞產(chǎn)生特定的作用，包括新抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)和藥物有效載荷傳遞。診療性外泌體對(duì)靶細(xì)胞的影響可能是通過(guò)不同的進(jìn)入或相互作用機(jī)制來(lái)控制的。完整的外泌體的進(jìn)入可能包括受體介導(dǎo)的內(nèi)吞作用、網(wǎng)格蛋白包被小凹、脂筏、吞噬作用、小凹和大胞飲作用。外泌體內(nèi)容物的進(jìn)入或外泌體信號(hào)的誘導(dǎo)可能涉及配體受體誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)或融合，從而將外泌體內(nèi)容物沉積到細(xì)胞質(zhì)中。成都外泌體融合實(shí)驗(yàn)隨著外泌體研究的不斷深入，它的應(yīng)用已經(jīng)涉及醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)和免疫領(lǐng)域、寄生蟲領(lǐng)域。

血漿中的外泌體蛋白既可以當(dāng)作標(biāo)志物，也可以進(jìn)行機(jī)理研究？首先，研究人員將慢性淋巴瘤（CLL）患者分為2個(gè)亞組：疾病進(jìn)展期和疾病慢性期。然后利用質(zhì)譜技術(shù)分析了患者血漿外泌體蛋白組，發(fā)現(xiàn)S100-A9蛋白在進(jìn)展期CLL患者中明顯高表達(dá)，可以作為CLL進(jìn)展期診斷的輔助標(biāo)志物。進(jìn)一步，研究人員通過(guò)生信分析發(fā)現(xiàn)進(jìn)展期CLL患者外泌體中的高表達(dá)蛋白質(zhì)主要與炎癥和氧化應(yīng)激有關(guān)，而NF-κB通路正是承接此效應(yīng)的關(guān)鍵通路。通過(guò)從進(jìn)展期CLL患者中分離富含S100-A9蛋白的外泌體加入CLL患者的PBMC細(xì)胞中，證實(shí)了S100-A9+外泌體能夠明顯促進(jìn)進(jìn)展期CLL患者PBMC細(xì)胞中IκBα蛋白的磷酸化上調(diào)，進(jìn)一步活躍NF-κB通路。該研究證通過(guò)血漿外泌體蛋白組分析不只找到輔助診斷進(jìn)展期CLL的標(biāo)志物，并證實(shí)了S100-A9+外泌體可通過(guò)形成正向反饋調(diào)控，不斷活躍進(jìn)展期CLL患者自身PBMC細(xì)胞中的NF-κB通路，促進(jìn)CLL進(jìn)展的特殊機(jī)理。

外泌體的納米球膜型結(jié)構(gòu)由雙層脂質(zhì)形成。它也由各種類型的脂質(zhì)和蛋白質(zhì)組成，這些脂質(zhì)和蛋白質(zhì)衍生自形成外泌體的親代細(xì)胞。根據(jù)外泌體數(shù)據(jù)庫(kù)ExoCarta的資料，目前已知約有8000種蛋白質(zhì)和194種脂質(zhì)與外泌體相關(guān)。外泌體通過(guò)生物體液被多種不同類型的細(xì)胞分泌，包括滑膜液，母乳，血液，尿液，唾液，羊水和血液中的血清，這表明它們?cè)诩?xì)胞間通訊和觸發(fā)生理反應(yīng)中起著重要的作用。外泌體功能在研究初期階段發(fā)現(xiàn)是參與細(xì)胞成熟過(guò)程中去除不必要的蛋白質(zhì)。簡(jiǎn)而言之，它們是天然膜囊泡，將蛋白質(zhì)，RNA，DNA和脂質(zhì)從一個(gè)細(xì)胞攜帶到另一個(gè)細(xì)胞，從而調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物功能。外泌體可以將PD-L1轉(zhuǎn)運(yùn)至其他PD-L1表達(dá)低或沒(méi)有PD-L1的細(xì)胞，并可能與PD-1結(jié)合。

近年來(lái)，外泌體的捕獲技術(shù)越來(lái)越多，微流體系也被用于外泌體提取，此方法能根據(jù)其物理和生化特性同時(shí)分離外泌體。采用這種方法獲得的樣品純度高，且可及時(shí)獲取外泌體用于疾病的相關(guān)檢測(cè)。在初次注射時(shí)外泌體粘附在微流控設(shè)備的內(nèi)表面，并在隨后的PBS注射中沖洗掉。此方法采用的設(shè)備復(fù)雜，所需的樣本量取決于流動(dòng)通道的長(zhǎng)度。另外，樣品量的注入速率比較低，因此，對(duì)于大樣品量，將需要較長(zhǎng)的處理時(shí)間。外泌體在包括瘤子在內(nèi)的各種疾病的發(fā)病機(jī)理中具有重要的功能。目前，研究人員已開發(fā)了多種方法來(lái)分離外泌體，離心技術(shù)仍然是常用方法，其他方法，例如過(guò)濾、磁珠分離和色譜法等，也顯示出獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，但目前仍然沒(méi)有一種公認(rèn)有效的提取方法，研究人員應(yīng)針對(duì)不同來(lái)源的樣本以及不同的下游分析選取較適宜的提取方案。外泌體的數(shù)量：人體中大約有1014個(gè)，近乎于平均每個(gè)細(xì)胞產(chǎn)生1000-10000個(gè)。galnac-sirna

超速離心法，這是目前外泌體提取較常用的方法。腹水提取試劑盒應(yīng)用

Exosome，中文名外泌體，是一種能被大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)，直徑大約40-100nm。盡管外泌體較初在1983年就被發(fā)現(xiàn)，但人們一直認(rèn)為它只是一種細(xì)胞的廢棄物。然而較近幾年，人們發(fā)現(xiàn)這種微小膜泡中含有細(xì)胞特異的蛋白、脂質(zhì)和核酸，能作為信號(hào)分子傳遞給其他細(xì)胞從而改變其他細(xì)胞的功能。這些發(fā)現(xiàn)點(diǎn)燃了人們對(duì)細(xì)胞分泌膜泡的興趣。2015年，隨著精確醫(yī)學(xué)概念的提出，越來(lái)越多的人開始關(guān)注如何能做到疾病的精確診斷和診療。外泌體作為一個(gè)新型的研究熱點(diǎn)，由于它在體內(nèi)存在的普遍性和獲取的便捷性，已經(jīng)成為了疾病診斷診療的潛在有效方式，在精確醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。外泌體的提取的方式：超速離心法。腹水提取試劑盒應(yīng)用

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