細胞培養(yǎng)用到的胎牛血清需要滅活嗎:細胞培養(yǎng)胎牛血清是不可或缺重要培養(yǎng)基,胎牛血清中含有諸多細胞生長因子,維生素,氨基酸等物質(zhì)。我們常會看到胎牛血清的標注上有對產(chǎn)品滅活也有沒有滅活的,胎牛血清為什么不需要熱滅活便可以使用。事實上,熱滅活目的是為了去除血清中補體等對熱敏感的物質(zhì),但是在胎牛血清中對補體的滅活則明顯沒有必要。胎牛血清中含有的C1,C6單單達成年動物血清的1-3%,而其它補體成分單單有成年動物的5-50%,至于補體的主要成分C3在胎牛血清中則幾乎不能檢出。胎牛血清適合脈沖示蹤實驗(同位素標記研究細胞代謝)適合轉(zhuǎn)染CHO后的篩選。金華標準級血清
如何區(qū)別真假胎牛血清:外觀,拿到血清,較先接觸的是血清外觀,對于缺少細胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人來說,外觀的判斷尤為重要,顏色根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,我國的細胞培養(yǎng)用血清標準是不高于20mg/dl,實際上,血紅蛋白含量的高低對血清并無直接影響,這個指標的意義在于能體現(xiàn)出采的血過程的嚴謹規(guī)范程度,良好的操作能降低血清的溶血。國產(chǎn)血清的點很分散,大多是由屠戶采的血后馬上離心收集,所以很少會有溶血,表現(xiàn)出明亮的蠟黃色,當然,國產(chǎn)血清也很少有標準意義上的胎牛血清。進口胎牛血清或多或少總有點溶血,因為真正的胎牛血清凝血功能差,紅細胞容易破裂。總的來說,國產(chǎn)的血清呈現(xiàn)出蠟黃。進口的血清,質(zhì)量較好的呈現(xiàn)出談黃、微紅色,差點的呈現(xiàn)出橘紅色或鮮紅色。當然,熱滅活胎牛血清或保存不當?shù)难澹捎谘t蛋白的破壞氧化,會呈現(xiàn)出暗紅,甚至咖啡色。金華標準級血清胎牛血清是指懷孕3-8個月的母牛被屠宰后,通過一系列工藝處理獲得。
如何區(qū)別真假胎牛血清:免疫球蛋白,國產(chǎn)血清的只是定性檢測,結(jié)果也很不準確,進口胎牛血清大多定量檢測。免疫球蛋白的數(shù)值能完全體現(xiàn)出時的牛齡情況,國產(chǎn)血清,基本都是新生牛的,血清中容易產(chǎn)生IgM,IgG的含量也偏高,進口胎牛血清,不含IgM,IgG的含量也較低。其它不管是國產(chǎn)還是進口血清,都是不測Antibiotic的(無四環(huán)素胎牛血清之外)。國外,Antibiotic的使用很嚴格,用量也很少,每頭奶牛的產(chǎn)品包括血清都可以溯源的,因此可以做到胎牛血清中不含Antibiotic或含量極低;國內(nèi),Antibiotic的濫用已成了普遍現(xiàn)象,血清中殘留很高,對細胞培養(yǎng)極為不利,這是國產(chǎn)血清質(zhì)量差的根本原因。
胎牛血清:解凍胎牛血清時,請按照規(guī)定的的逐步解凍法(-20℃至4℃至室溫),若胎牛血清解凍時改變的溫度太大(如-20℃至37℃),實驗顯示非常容易產(chǎn)生沉淀物。解凍胎牛血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。請勿將胎牛血清置于37℃太久。若在37℃放置太久,胎牛血清會變得混濁,同時胎牛血清中許多較不穩(wěn)定的成分也會因此受到損害,而影響胎牛血清的質(zhì)量。胎牛血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。若必須做胎牛血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。透析胎牛血清主要用于可能需要關(guān)注小分子濃度的特殊研究。
如何挑選好的胎牛血清:好的胎牛血清是實驗的成功的前提是所有實驗人做細胞培養(yǎng)的共識,如何挑選好的胎牛血清,可以從以下幾個方面著手。1.外觀,好的血清應是透明清亮,土黃色或棕黃色,無沉淀或極少沉淀,比較粘稠。如發(fā)現(xiàn)血清渾濁,不透明,含許多沉淀物,說明血清污染或血清中的蛋白質(zhì)變性;若棕紅色,說明,血清中的血紅蛋白含量太高,有溶血現(xiàn)象。2、總蛋白含量,胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高,說明牛齡偏大,不是胎牛;數(shù)值偏低,表明血清可能摻水了。3、血紅蛋白,標準為不高于,20mg/dl,顏色越紅,數(shù)值越高;反之,數(shù)值越低。4、pH國產(chǎn)血清,大多高于7.5,進口胎牛血清,大多低于7.5,具體原因未知,可能和牛齡有關(guān)。胎牛血清含有一些小分子物質(zhì),如氨基酸、糖類、脂類及Hormone類物質(zhì)。金華標準級血清
胎牛血清保存避免反復凍融。金華標準級血清
胎牛血清的主要成分有哪些?脂聯(lián)素,有人發(fā)現(xiàn),將牛脂聯(lián)素注射入C57小鼠,可降低循環(huán)血糖水平和在高脂飲食后提高脂肪清理率。持續(xù)注射牛脂聯(lián)素兩周后,胰島素敏感性和葡萄糖耐受性明顯增強,高脂喂養(yǎng)小鼠肝臟脂質(zhì)堆積減少。這些結(jié)果提供了直接的證據(jù)表明內(nèi)源性牛脂聯(lián)素是一種調(diào)節(jié)脂肪和葡萄糖代謝的生理Hormone。以上可以看到,胎牛血清提供的一些活性因子參與營養(yǎng)的運輸、促進營養(yǎng)分子向細胞的轉(zhuǎn)運和利用,調(diào)節(jié)細胞的代謝和生理狀態(tài)。可見胎牛血清在細胞環(huán)境中發(fā)揮著積極的作用,這是人工合成的基礎(chǔ)培養(yǎng)基所比擬不了的。金華標準級血清
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