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來源: 發(fā)布時(shí)間:2023-07-25

膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學(xué)上分隔和電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對這膜片上的離子通道的離子電流(pA級)進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應(yīng)管運(yùn)算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器。當(dāng)場效應(yīng)管運(yùn)算放大器的正負(fù)輸入端子是等電位,向正輸入端子施加指令電位時(shí),因?yàn)槎搪坟?fù)端子以及膜片都可等電位地達(dá)到鉗制的作用,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時(shí),其間達(dá)到Z小的分流電流。膜片鉗使用的注意事項(xiàng):向玻璃微電極灌注內(nèi)液時(shí)切勿灌太多,以防液體進(jìn)入銀絲底部增加噪聲。莆田全自動(dòng)電生理膜片鉗網(wǎng)站

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膜片鉗記錄的幾種形式:內(nèi)面向外膜片(inside-outpatch)高阻封接形成后,在將微管電極輕輕提起,使其與細(xì)胞分離,電極端形成密封小泡,在空氣中短暫暴露幾秒鐘后,小泡破裂再回到溶液中就得到“內(nèi)面向外”膜片。此時(shí)膜片兩側(cè)的膜電位由固定電位和電壓脈沖控制。浴槽電位是地電位,膜電位等于玻管電位的負(fù)值。如放大器的電流監(jiān)視器輸出是非反向的,則輸出將與膜電流(Im)的負(fù)值相等。外面向外膜片(out-sidepatch)高阻封接形成后,繼續(xù)以負(fù)壓抽吸,膜片破裂再將玻管慢慢地從細(xì)胞表面垂直地提起,斷端游離部分自行融合成脂質(zhì)雙層,此時(shí)高阻封接仍然存在。而膜外側(cè)面接觸浴槽液。徐州全自動(dòng)實(shí)用膜片鉗研究方案膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:在心血管藥理方面的研究。

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膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的優(yōu)點(diǎn):與傳統(tǒng)的細(xì)胞內(nèi)記錄相比,全細(xì)胞記錄也有很多好處,比如電極尖銳端開口較大,電阻只2~20MΩ,易于進(jìn)行電壓/電流鉗制,噪聲很大程度下降,電極電壓降也變得很小,補(bǔ)償非常容易。與單通道記錄相比,單通道記錄無法獲得整個(gè)細(xì)胞的功能變化信息,而全細(xì)胞記錄(尤其是腦片或在體記錄)所獲信息則能反映細(xì)胞功能(甚至細(xì)胞之間信息傳遞)的改變,加之易于更換細(xì)胞外液,所以,全細(xì)胞記錄更適用于對離子通道的藥理學(xué)研究,即加各種通道blocker啦,激動(dòng)劑啦之類的。

膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:穿孔膜片(perforated patch)是為克服常規(guī)全細(xì)胞模式的胞質(zhì)滲漏問題,有學(xué)者將與離子親和的制霉菌素或二性霉素b經(jīng)微電極灌流到含有類甾醇的細(xì)胞膜上,形成只允許一價(jià)離子通過的孔,用此法在膜片上做很多導(dǎo)電性孔道,借此對全細(xì)胞膜電流進(jìn)行記錄。由于此模式的胞質(zhì)滲漏極為緩慢,局部串聯(lián)阻抗較常規(guī)全細(xì)胞模式高,所以鉗制速度很慢,也稱為緩慢全細(xì)胞模式。它適合于小細(xì)胞的電壓鉗位,對于直徑大于30μm的細(xì)胞很難實(shí)現(xiàn)鉗位。不足之處是由于電極與細(xì)胞間交換快,細(xì)胞內(nèi)環(huán)境很容易破壞,因此記錄所用的電極液應(yīng)與胞漿主要成分相同,如高k+,低na+和ca2+及一定的緩沖成分和能量代謝所需的物質(zhì)。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗的應(yīng)用:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道。

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膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):1.實(shí)驗(yàn)結(jié)束后必須關(guān)閉實(shí)驗(yàn)室的水電,檢查實(shí)驗(yàn)室門窗。2.凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求,完成值日等相關(guān)工作(值日生按照實(shí)驗(yàn)室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職)。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時(shí)長做好登記工作。4.拉制儀提前預(yù)熱(至少30min)。且用完及時(shí)關(guān)閉。電熱加熱線溫度很高,在使用時(shí)注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改,不得在本機(jī)電腦下載別的軟件,拷數(shù)據(jù)時(shí)需用實(shí)驗(yàn)室配置的U盤。5.禁止私拉電線,如有實(shí)驗(yàn)要求可與老師及時(shí)溝通。膜片鉗使用操作注意:封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。莆田藥理學(xué)腦定位膜片鉗研究方案

膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇。莆田全自動(dòng)電生理膜片鉗網(wǎng)站

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