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蘇州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)

來源: 發(fā)布時間:2023-06-19

膜片鉗技術(shù)的工作原理:膜片鉗技術(shù)是用于了解離了通道行為的通用型電生理工具,首先用微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,然后以千兆歐姆以上的阻抗使電極尖銳端與細(xì)胞膜封接,通過吸破或者電破的方式使與電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域與其周圍區(qū)域在電學(xué)上分隔,然后細(xì)胞膜破裂,進(jìn)而對此區(qū)域上的離子通道的離子電流進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法。該方法普遍應(yīng)用于神經(jīng)細(xì)胞,肌纖維細(xì)胞,心肌細(xì)胞及高表達(dá)單一通道的卵母細(xì)胞。主要用于監(jiān)測離子通道在正?;蛘呒膊顟B(tài)下如何表現(xiàn),以及不同藥物、離子或其他分析物如何改變這些狀態(tài)。膜片鉗技術(shù)的建立,對生物科學(xué)特別是神經(jīng)科學(xué)是一項具有重大意義的變革。這是一種通過離子通道記錄的離子電流來反映細(xì)胞膜單一的(或多個)的離子通道活動的技術(shù)。該技術(shù)的出現(xiàn)將生理學(xué)的細(xì)胞水平和分子水平聯(lián)系在一起,又將神經(jīng)科學(xué)的不同亞科融匯在一起,促進(jìn)了各個學(xué)科之間的聯(lián)系,加速了我們神經(jīng)科學(xué)的研究進(jìn)展,深入探討神經(jīng)活動的機(jī)制研究。膜片鉗的應(yīng)用:心肌細(xì)胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。蘇州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)

蘇州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗在通道研究中的重要作用:對離子通道生理與病理情況下作用機(jī)制的研究:通過對各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機(jī)制。如對鈣離子在腦缺血神經(jīng)細(xì)胞損害中作用機(jī)制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+ 介導(dǎo)現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)就出現(xiàn)Ca2+超載,導(dǎo)致神經(jīng)元及細(xì)胞膜損害,膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙,嚴(yán)重的可使神經(jīng)元壞死。蕪湖醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)膜片鉗使用操作注意:封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。

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膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)的數(shù)據(jù)如何處理:1.內(nèi)面向外式膜片細(xì)胞內(nèi)外和電極內(nèi)的溶液均可調(diào)控,既能較容易地改變細(xì)胞內(nèi)的離子或物質(zhì)濃度,又能把酶等直接加于膜的內(nèi)側(cè)面,適宜研究胞內(nèi)物質(zhì)對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側(cè)物質(zhì),且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細(xì)胞內(nèi)鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細(xì)胞內(nèi)和第二信使與通道的調(diào)節(jié)作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側(cè),可以任意改變膜外物質(zhì)的濃度,有利于研究離子、遞質(zhì)對膜外表面的作用,多用于研究細(xì)胞膜外側(cè)受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經(jīng)過第二信使系統(tǒng)。因細(xì)胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實驗中難以改變胞內(nèi)成分,而且電極管內(nèi)必須充以低鈣液。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:細(xì)胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。

膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)實驗流程之標(biāo)本制備和膜片鉗實驗系統(tǒng):標(biāo)本制備:根據(jù)研究目的的不同,可采用不同的細(xì)胞組織,如心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等,現(xiàn)在幾乎可對各種細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗的研究。對所采用的細(xì)胞,必須滿足實驗要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細(xì)胞培養(yǎng)法;另外,由于與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合,現(xiàn)在也運(yùn)用分子克隆技術(shù)表達(dá)不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細(xì)胞表達(dá)外源性基因等。膜片鉗實驗系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實驗要求,可以組建不同的實驗系統(tǒng),但有若干共同的基本部件,包括機(jī)械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設(shè)備架)、光學(xué)部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng))、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集設(shè)備、計算機(jī)系統(tǒng))和微操縱器。為了測量在不同藥物對細(xì)胞中的離子通道的影響,通常需要在膜片鉗實驗中實施灌流。

蘇州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù),膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗的應(yīng)用:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道:心肌細(xì)胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。國外學(xué)者在人類心肌細(xì)胞離子通道特性的研究中取得了許多進(jìn)展,使得心肌藥理學(xué)實驗由動物細(xì)胞模型向人心肌細(xì)胞成為可能。對離子通道生理與病理情況下作用機(jī)制的研究:通過對各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機(jī)制。如對鈣離子在腦缺血神經(jīng)細(xì)胞損害中作用機(jī)制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+介導(dǎo)現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)就出現(xiàn)Ca2+超載,導(dǎo)致神經(jīng)元及細(xì)胞膜損害,膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙,嚴(yán)重的可使神經(jīng)元壞死。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:通過滲透很快改變胞漿成分并達(dá)到平衡。徐州醫(yī)學(xué)腦片膜片鉗

膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:膜電位固定的方法不同。蘇州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)

膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:①膜片鉗技術(shù)在通道中的研究;②與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道研究;③對離子通道生理與病理作用機(jī)制的研究;④對單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究;⑤對藥物作用機(jī)制的研究;⑥在心血管藥理方面的研究;⑦創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選的研究;⑧在神經(jīng)科學(xué)中的研究?,F(xiàn)如今,膜片鉗技術(shù)已經(jīng)大為普及,并普遍活躍在離子通道相關(guān)的研究當(dāng)中。也許未來有1天,膜片鉗技術(shù)會過時,但兩百年來的探索歷程,數(shù)代學(xué)者們的心血,以及它在科學(xué)研究中的功績會一直被銘記。蘇州細(xì)胞生物學(xué)膜片鉗電生理技術(shù)

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