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徐州醫(yī)學(xué)離子通道

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-06-18

膜片鉗技術(shù)基本原理與特點(diǎn):膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇,兩者的區(qū)別關(guān)鍵在于:①膜電位固定的方法不同;②電位固定的細(xì)胞膜面積不同,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。電壓鉗技術(shù)主要是通過(guò)保持細(xì)胞跨膜電位不變,并迅速控制其數(shù)值,以觀察在不同膜電位條件下膜電流情況。因此只能用來(lái)研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng)。目前電壓鉗主要用于巨大細(xì)胞的全性能電流的研究,特別在分子克隆的卵母細(xì)胞表達(dá)電流的鑒定中發(fā)揮著其他技術(shù)不能替代的作用。該技術(shù)的主要缺陷是必須在細(xì)胞內(nèi)插入兩個(gè)電極,對(duì)細(xì)胞損傷很大,在小細(xì)胞如神經(jīng)元,就難以實(shí)現(xiàn),又因細(xì)胞形態(tài)復(fù)雜,很難保持細(xì)胞膜各處生物特性的一致。全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):操作簡(jiǎn)單,全過(guò)程可自動(dòng)化。徐州醫(yī)學(xué)離子通道

徐州醫(yī)學(xué)離子通道,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗記錄的幾種形式:細(xì)胞吸附膜片(cell-attached patch) 將兩次拉制后經(jīng)加熱拋光的微管電極置于清潔的細(xì)胞膜表面上,形成高阻封接,在細(xì)胞膜表面隔離出一小片膜,既而通過(guò)微管電極對(duì)膜片進(jìn)行電壓鉗制,高分辨測(cè)量膜電流,稱(chēng)為細(xì)胞貼附膜片。由于不破壞細(xì)胞的完整性,這種方式又稱(chēng)為細(xì)胞膜上的膜片記錄。此時(shí)跨膜電位由玻管固定電位和細(xì)胞電位決定。因此,為測(cè)定膜片兩側(cè)的電位,需測(cè)定細(xì)胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動(dòng)看,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,因細(xì)胞骨架及有關(guān)代謝過(guò)程是完整的,所受的干擾小。徐州醫(yī)學(xué)離子通道膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。

徐州醫(yī)學(xué)離子通道,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的實(shí)驗(yàn)流程:(1)破膜:加大微電極內(nèi)的負(fù)壓將細(xì)胞膜吸破,此時(shí)可見(jiàn)時(shí)間常數(shù)較大的全細(xì)胞膜電容電流的出現(xiàn),以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸;②也可用注射器施加負(fù)壓;③還可以在施加負(fù)壓的基礎(chǔ)上進(jìn)行電擊穿來(lái)破膜。若只用電擊穿破膜,形成的入口電阻Ra較大。(2)細(xì)胞破膜后,若所用浴液的滲透壓比電極內(nèi)液的滲透壓略高,則應(yīng)該將所施加的負(fù)壓力在幾秒內(nèi)或幾十秒內(nèi)去掉;反之,適當(dāng)保留一點(diǎn)負(fù)壓對(duì)破膜狀態(tài)及細(xì)胞的穩(wěn)定更有利。(3)全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償:調(diào)節(jié)全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償板塊中的Cm和Rs進(jìn)行膜電容電流補(bǔ)償,使輸出電流信號(hào)中細(xì)胞膜電容電流成分消失或變至較小。(4)串聯(lián)電阻補(bǔ)償:打開(kāi)串聯(lián)電阻補(bǔ)償鍵,調(diào)節(jié)串聯(lián)電阻補(bǔ)償至不產(chǎn)生震蕩為度。(5)漏減調(diào)節(jié)。(6)正式進(jìn)入標(biāo)本細(xì)胞的檢測(cè)。

膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸,之后對(duì)微電極另一端開(kāi)口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開(kāi)口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入,如此在微電極開(kāi)口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會(huì)形成緊密的封接,它的電阻能夠達(dá)到數(shù)個(gè)或數(shù)十個(gè)千兆歐,這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開(kāi)口處的那一片膜同膜的其余部分,通過(guò)微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜光有少數(shù)離子通道。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電位固定的細(xì)胞膜面積不同,進(jìn)而所研究的離子通道數(shù)目不同。

徐州醫(yī)學(xué)離子通道,膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)

膜片鉗在通道研究中的重要作用:對(duì)離子通道生理與病理情況下作用機(jī)制的研究:通過(guò)對(duì)各種生理或病理情況下細(xì)胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過(guò)程中的作用機(jī)制。如對(duì)鈣離子在腦缺血神經(jīng)細(xì)胞損害中作用機(jī)制的研究表明,缺血性腦損害過(guò)程中,Ca2+ 介導(dǎo)現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開(kāi)放,過(guò)多的Ca2+進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)就出現(xiàn)Ca2+超載,導(dǎo)致神經(jīng)元及細(xì)胞膜損害,膜轉(zhuǎn)運(yùn)功能障礙,嚴(yán)重的可使神經(jīng)元壞死。膜片鉗的應(yīng)用:對(duì)單細(xì)胞形態(tài)與功能關(guān)系的研究。黃山全自動(dòng)電生理膜片鉗設(shè)計(jì)公司

全自動(dòng)膜片鉗系統(tǒng)技術(shù)指標(biāo):極大的減少了噪聲源,記錄數(shù)據(jù)的電噪音很低。徐州醫(yī)學(xué)離子通道

膜片鉗使用的注意事項(xiàng):工作原理膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對(duì)相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的基本原理是以一個(gè)光潔,直徑約為0.5~3um的玻璃微電極同神經(jīng)或肌細(xì)胞的膜接觸,之后對(duì)微電極另一端開(kāi)口處施加適當(dāng)?shù)呢?fù)壓用電極的纖細(xì)開(kāi)口將與電極接觸的那一小片膜輕度吸入,如此在微電極開(kāi)口處的玻璃邊沿以及這一小片膜周邊會(huì)形成緊密的封接,它的電阻能夠達(dá)到數(shù)個(gè)或數(shù)十個(gè)千兆歐,這世界上就是在化學(xué)上完全隔離了吸附在微電極開(kāi)口處的那一片膜同膜的其余部分,通過(guò)微電極記錄到的電流變化光光和該膜片中通道分子的功能狀態(tài)相關(guān)聯(lián)。徐州醫(yī)學(xué)離子通道

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