膜片鉗技術基本原理與特點：又由于玻璃微電極管徑很小，其下膜面積光約1 μm2，在這么小的面積上離子通道數量很少，一般只有一個或幾個通道，經這一個或幾個通道流出的離子數量相對于整個細胞來講很少，可以忽略，也就是說電極下的離子電流對整個細胞的靜息電位的影響可以忽略，那么，只要保持電極內電位不變，則電極下的一小片細胞膜兩側的電位差就不變，從而實現電位固定另外，高阻封接技術還很大降低了電流記錄的背景噪聲，從而戲劇性地提高了時間、空間及電流分辨率，如時間分辨率可達10 μs、空間分辨率可達1平方微米及電流分辨率可達10-12 A。膜片鉗使用的注意事項：打雷天氣必須禁止膜片鉗實驗。湖州細胞生物學腦定位膜片鉗網站

膜片鉗電生理技術的記錄方式：全細胞記錄法，膜穿孔記錄法（perforatedpatchclamp），巨膜片鉗記錄法（giantmembranepatchclamp），松散封接記錄法（loosepatchclamp）等技術應用：1.為了更換電極內液和從電極內施加藥物，發(fā)展了微電極內灌技術（micropipetteperfusiontechnique）2.在研究細胞間的縫隙連接（gapjunction）通路時，發(fā)展了雙膜片鉗記錄法（doublepatchrecording）3.將富含神經遞質受體的游離膜片鉗靠近突觸部位，可檢測遞質釋放和突觸活動，這一技術稱為膜片鉗探針技術（detector-patchtechnique）4.將特異的膜片探針插入卵母細胞，可檢測細胞內第二信使含量，此為膜片填塞技術（patchcrammingtechnique）5.為研究細胞的胞吞與胞吐機制，發(fā)展了膜電容測定法（membranecapacitancemeasurement）。福州細胞生物學腦片膜片鉗應用膜片鉗使用操作流程及注意事項：凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求。

膜片鉗電生理技術服務的數據如何處理：1.內面向外式膜片細胞內外和電極內的溶液均可調控,既能較容易地改變細胞內的離子或物質濃度,又能把酶等直接加于膜的內側面,適宜研究胞內物質對通道活動的影響。但實驗中難以改變膜外側物質,且需浸于低鈣液中。常用于研究依賴細胞內鈣的離子通道,如鈣敏感的鉀通道,還可用于細胞內和第二信使與通道的調節(jié)作用。2.外面向外式膜片能接觸膜的兩側,可以任意改變膜外物質的濃度,有利于研究離子、遞質對膜外表面的作用,多用于研究細胞膜外側受體控制的離子通道。這些受體直接作用于離子通道,而不需經過第二信使系統(tǒng)。因細胞外液容易更換,故加藥方便。缺陷是實驗中難以改變胞內成分,而且電極管內必須充以低鈣液。膜片鉗的數據如何處理：細胞鉗記錄的是許多通道的平均電流,有利于綜合分析。

膜片鉗實驗實驗，記錄和分析數據準備工作就緒后即可進行實驗操作，數據記錄和分析。對電極持續(xù)施加一個1mV、10～50ms的階躍脈沖刺激，電極入水后電阻約4～6MΩ，此時在計算機屏幕顯示框中可看到測試脈沖產生的電流波形。開始時增益不宜設得太高，一般可在1～5mV/pA，以免放大器飽和。由于細胞外液與電極內液之間離子成分的差異造成了液結電位，故一般電極剛入水時測試波形基線并不在零線上，須首先將保持電壓設置為0mV，并調節(jié)“電極失調控制“使電極直流電流接近于零。用微操縱器使電極靠近細胞，當電極尖銳端與細胞膜接觸時封接電阻指示Rm會有所上升，將電極稍向下壓，Rm指示會進一步上升。通過細塑料管向電極內稍加負壓，細胞膜特性良好時，Rm一般會在1min內快速上升，直至形成GΩ級的高阻抗封接。一般當Rm達到100MΩ左右時，電極尖銳端施加輕微負電壓(-30～-10mV)有助于GΩ封接的形成。此時的現象是電流波形再次變得平坦，使電極超極化由-40到-90mV，有助于加速形成封接。為證實GΩ封接的形成，可以增加放大器的增益，從而可以觀察到除脈沖電壓的首尾兩端出現電容性脈沖尖銳端電流之外，電流波形仍呈平坦狀。膜片鉗使用的注意事項：向玻璃微電極灌注內液時切勿灌太多，以防液體進入銀絲底部增加噪聲。

膜片鉗實驗難度大、技術要求高，要掌握有關技術和方法雖不是很困難的事，但要從一大批的實驗數據中，經過處理和分析，得出有意義、有價值的結果和結論，就顯得不那么容易，有許多需要注意和考慮的問題，包括減少噪音，避免電極前端的污染，提高封接成功率，具體實驗過程中還需要考慮如何選取記錄模式，為記錄特定離子電流如何選擇電極內、外液，如何選擇阻斷劑、激動劑，如何進行正確的數據采集等許多更為復雜的問題，還需在科研實踐中不斷地探索和解決。膜片鉗使用的注意事項：安裝玻璃微電極時，電極應與銀絲平行，防止刮蹭銀絲電極。湖州細胞生物學膜片鉗方案

膜片鉗技術的應用范圍：膜片鉗技術在通道中的研究。湖州細胞生物學腦定位膜片鉗網站

膜片鉗使用操作流程及注意事項：1.實驗結束后必須關閉實驗室的水電，檢查實驗室門窗。2.凡是在本平臺使用儀器的同學必須履行實驗室相關要求，完成值日等相關工作（值日生按照實驗室統(tǒng)一所發(fā)值日生要求履職）。3.在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。4.拉制儀提前預熱（至少30min）。且用完及時關閉。電熱加熱線溫度很高，在使用時注意避免燙傷。4.電腦里面的軟件不得隨意刪改，不得在本機電腦下載別的軟件，拷數據時需用實驗室配置的U盤。5.禁止私拉電線，如有實驗要求可與老師及時溝通。湖州細胞生物學腦定位膜片鉗網站

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