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黃山全自動膜片鉗實驗服務

來源: 發(fā)布時間:2023-05-31

膜片鉗記錄的幾種形式:細胞吸附膜片(cell-attachedpatch)將兩次拉制后經加熱拋光的微管電極置于清潔的細胞膜表面上,形成高阻封接,在細胞膜表面隔離出一小片膜,既而通過微管電極對膜片進行電壓鉗制,高分辨測量膜電流,稱為細胞貼附膜片。由于不破壞細胞的完整性,這種方式又稱為細胞膜上的膜片記錄。此時跨膜電位由玻管固定電位和細胞電位決定。因此,為測定膜片兩側的電位,需測定細胞膜電位并從該電位減去玻管電位。從膜片的通道活動看,這種形式的膜片是極穩(wěn)定的,因細胞骨架及有關代謝過程是完整的,所受的干擾小。膜片鉗技術的應用范圍:在神經科學中的研究。黃山全自動膜片鉗實驗服務

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膜片鉗法的各種模式:細胞吸附模式:將膜片微電極吸附在細胞膜上對但離子通道電流進行記錄的模式。其優(yōu)點是在細胞內環(huán)境保持正常的條件下可以對離子通道活動進行觀察記錄。但是由于不能認為直接地控制細胞內環(huán)境條件也不能確切的潘明細胞內點位,所以其缺點是不清楚膜片上的實效點位。膜內面向外模式:從細胞吸附模式將已形成巨阻抗封接的膜片微電極向上提起時,則膜片即從細胞體上被切割分隔下來,形成膜內面向外的模式。常規(guī)全細胞模式:在細胞吸附模式上將膜打穿成孔,記錄膜片以外部位的全細胞膜的離子電流,這時全細胞模式。福州神經生物學膜片鉗實驗網站膜片鉗使用操作注意:封接范圍內細胞膜光有少數(shù)離子通道。

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膜片鉗的應用:與藥物作用有關的心肌離子通道:心肌細胞通過各種離子通道對膜電位和動作電位穩(wěn)態(tài)的維持而保持正常的功能。國外學者在人類心肌細胞離子通道特性的研究中取得了許多進展,使得心肌藥理學實驗由動物細胞模型向人心肌細胞成為可能。對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究:通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經細胞損害中作用機制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+介導現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進入細胞內就出現(xiàn)Ca2+超載,導致神經元及細胞膜損害,膜轉運功能障礙,嚴重的可使神經元壞死。

膜片鉗在通道研究中的重要作用:對離子通道生理與病理情況下作用機制的研究:通過對各種生理或病理情況下細胞膜某種離子通道特性的研究,了解該離子的生理意義及其在疾病過程中的作用機制。如對鈣離子在腦缺血神經細胞損害中作用機制的研究表明,缺血性腦損害過程中,Ca2+ 介導現(xiàn)象起非常重要的作用,缺血缺氧使Ca2+通道開放,過多的Ca2+進入細胞內就出現(xiàn)Ca2+超載,導致神經元及細胞膜損害,膜轉運功能障礙,嚴重的可使神經元壞死。膜片鉗使用操作注意:在儀器使用以前及使用之后按按照使用時長做好登記工作。

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膜片鉗電生理記錄技術:膜片鉗技術的基本原理:膜片鉗技術用特制的玻璃微吸管吸附于細胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級,因此封接范圍內細胞膜光有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實行電壓鉗位,測量單個離子通道開放產生的微小電流,這種通道的開放是一種隨機過程。通過觀測單個通道開放的電流幅值分布、開放概率、開放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關系。將該部分細胞采用負壓吸破,可以形成比較常見的全細胞記錄模式,可以研究整個細胞的生理功能和離子通道電生理功能。膜片鉗實驗要從一大批的實驗數(shù)據(jù)中,經過處理和分析,得出有意義、有價值的結果和結論。東莞醫(yī)學腦定位膜片鉗原理

膜片鉗使用的注意事項:在放大器打開時不能用手、金屬物品或其它導電的物品接觸電極絲。黃山全自動膜片鉗實驗服務

膜片鉗操作實驗:標本制備根據(jù)研究目的的不同,可采用不同的細胞組織,如心肌細胞、平滑肌細胞、細胞等,現(xiàn)在幾乎可對各種細胞進行膜片鉗的研究。對所采用的細胞,必須滿足實驗要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細胞培養(yǎng)法;另外,由于與分子生物學技術的結合,現(xiàn)在也運用分子克隆技術表達不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細胞表達外源性基因等。電極在實驗前要灌注電極液,由于電極較細,因此在充灌前,電極內液要用0.2 μm的濾膜進行過濾。一般電極充灌可分灌尖(tipfilling)和后充兩步灌尖時將電極浸入內液中5s即可。黃山全自動膜片鉗實驗服務

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