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蘇州醫(yī)學(xué)膜片鉗實(shí)驗(yàn)網(wǎng)站

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2023-05-28

膜片鉗電生理紀(jì)錄系統(tǒng)及記錄方法:細(xì)胞膜由雙層脂膜組成,具有密封絕緣的特性,因此當(dāng)紀(jì)錄 電極接觸到細(xì)胞膜時(shí)電阻會(huì)開(kāi)始上升,然后以人工方式對(duì)紀(jì)錄電極內(nèi)施加一個(gè)負(fù)壓,可以讓電極與胞膜之間吸附得更為緊密而電阻也會(huì)加速上升,當(dāng)紀(jì)錄電極的電阻達(dá)到千兆歐姆(Giga Ω)時(shí),意味著細(xì)胞膜與電極之間幾乎沒(méi)有電流漏出,之后對(duì)電極內(nèi)壓力施以一個(gè)快速的負(fù)壓將細(xì)胞膜吸破,這樣紀(jì)錄電極與細(xì)胞胞體之間會(huì)形成一個(gè)封閉的電容,此時(shí)就可以開(kāi)始對(duì)細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:電壓鉗技術(shù)只能用來(lái)研究整個(gè)細(xì)胞膜或一大塊細(xì)胞膜上所有離子通道活動(dòng)。蘇州醫(yī)學(xué)膜片鉗實(shí)驗(yàn)網(wǎng)站

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膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過(guò)處理和分析,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問(wèn)題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動(dòng)劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問(wèn)題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。南通醫(yī)學(xué)離子通道網(wǎng)站膜片鉗技術(shù)本質(zhì)上也屬于電壓鉗范疇。

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膜片鉗實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方法:膜片鉗實(shí)驗(yàn)難度大、技術(shù)要求高,要掌握有關(guān)技術(shù)和方法雖不是很困難的事,但要從一大批的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中,經(jīng)過(guò)處理和分析,得出有意義、有價(jià)值的結(jié)果和結(jié)論,就顯得不那么容易,有許多需要注意和考慮的問(wèn)題,包括減少噪音,避免電極前端的污染,提高封接成功率,具體實(shí)驗(yàn)過(guò)程中還需要考慮如何選取記錄模式,為記錄特定離子電流如何選擇電極內(nèi)、外液,如何選擇阻斷劑、激動(dòng)劑,如何進(jìn)行正確的數(shù)據(jù)采集等許多更為復(fù)雜的問(wèn)題,還需在科研實(shí)踐中不斷地探索和解決。

膜片鉗芯片技術(shù)是繼細(xì)胞芯片之后的又一種嶄新的分析細(xì)胞電生理參數(shù)的芯片技術(shù).由于該芯片除了具有傳統(tǒng)膜片鉗的高分辨和高準(zhǔn)確性特點(diǎn)外,還具有高通量、自動(dòng)化以及細(xì)胞多通道參數(shù)和細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)參數(shù)在線和實(shí)時(shí)檢測(cè)等優(yōu)點(diǎn).因此,該芯片技術(shù)將很大促進(jìn)細(xì)胞離子通道、細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)傳導(dǎo)以及藥物篩選的研究和應(yīng)用.文中具體介紹了膜片鉗芯片技術(shù)的發(fā)展及其應(yīng)用,結(jié)合作者的研究工作,著重介紹了膜片鉗芯片技術(shù)在味覺(jué)細(xì)胞研究的比較新進(jìn)展,并結(jié)合神經(jīng)芯片研究細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的方法,對(duì)采用膜片鉗芯片技術(shù)在細(xì)胞和分子水平上研究味覺(jué)的敏感機(jī)理和傳導(dǎo)機(jī)制的應(yīng)用前景進(jìn)行了展望。膜片鉗的應(yīng)用:對(duì)藥物作用機(jī)制的研究。

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膜片鉗電生理技術(shù)的記錄方式:全細(xì)胞記錄法,膜穿孔記錄法(perforatedpatchclamp),巨膜片鉗記錄法(giantmembranepatchclamp),松散封接記錄法(loosepatchclamp)等技術(shù)應(yīng)用:1.為了更換電極內(nèi)液和從電極內(nèi)施加藥物,發(fā)展了微電極內(nèi)灌技術(shù)(micropipetteperfusiontechnique)2.在研究細(xì)胞間的縫隙連接(gapjunction)通路時(shí),發(fā)展了雙膜片鉗記錄法(doublepatchrecording)3.將富含神經(jīng)遞質(zhì)受體的游離膜片鉗靠近突觸部位,可檢測(cè)遞質(zhì)釋放和突觸活動(dòng),這一技術(shù)稱為膜片鉗探針技術(shù)(detector-patchtechnique)4.將特異的膜片探針插入卵母細(xì)胞,可檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)第二信使含量,此為膜片填塞技術(shù)(patchcrammingtechnique)5.為研究細(xì)胞的胞吞與胞吐機(jī)制,發(fā)展了膜電容測(cè)定法(membranecapacitancemeasurement)。膜片鉗放大器工作模式可以是電壓鉗,也可以是電流鉗。莆田全自動(dòng)離子通道應(yīng)用

膜片鉗使用操作流程及注意事項(xiàng):凡是在本平臺(tái)使用儀器的同學(xué)必須履行實(shí)驗(yàn)室相關(guān)要求。蘇州醫(yī)學(xué)膜片鉗實(shí)驗(yàn)網(wǎng)站

膜片鉗電生理技術(shù)的基本原理:膜片鉗技術(shù)用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100MΩ的高阻封接,被孤立的小膜片面積為微米數(shù)量級(jí),因此封接范圍內(nèi)細(xì)胞膜只有少數(shù)離子通道。然后對(duì)該膜片實(shí)行電壓鉗位,測(cè)量單個(gè)離子通道開(kāi)放產(chǎn)生的微小電流,這種通道的開(kāi)放是一種隨機(jī)過(guò)程。通過(guò)觀測(cè)單個(gè)通道開(kāi)放的電流幅值分布、開(kāi)放概率、開(kāi)放壽命分布等功能參數(shù),并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。將該部分細(xì)胞采用負(fù)壓吸破,可以形成較常見(jiàn)的全細(xì)胞記錄模式,可以研究整個(gè)細(xì)胞的生理功能和離子通道電生理功能。更進(jìn)一步,還可以把吸管吸附放膜片從細(xì)胞膜上分離出來(lái),以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。這種技術(shù)對(duì)膜內(nèi)外溶液成分及施加藥物操作都很方便。蘇州醫(yī)學(xué)膜片鉗實(shí)驗(yàn)網(wǎng)站

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