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南京細(xì)胞生物學(xué)離子通道網(wǎng)站

來源: 發(fā)布時間:2023-03-22

膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞記錄的實(shí)驗(yàn)流程:(1)破膜:加大微電極內(nèi)的負(fù)壓將細(xì)胞膜吸破,此時可見時間常數(shù)較大的全細(xì)胞膜電容電流的出現(xiàn),以及方波電流的輕微加大。①可用嘴吸;②也可用注射器施加負(fù)壓;③還可以在施加負(fù)壓的基礎(chǔ)上進(jìn)行電擊穿來破膜。若只用電擊穿破膜,形成的入口電阻Ra較大。(2)細(xì)胞破膜后,若所用浴液的滲透壓比電極內(nèi)液的滲透壓略高,則應(yīng)該將所施加的負(fù)壓力在幾秒內(nèi)或幾十秒內(nèi)去掉;反之,適當(dāng)保留一點(diǎn)負(fù)壓對破膜狀態(tài)及細(xì)胞的穩(wěn)定更有利。(3)全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償:調(diào)節(jié)全細(xì)胞膜電容補(bǔ)償板塊中的Cm和Rs進(jìn)行膜電容電流補(bǔ)償,使輸出電流信號中細(xì)胞膜電容電流成分消失或變至較小。(4)串聯(lián)電阻補(bǔ)償:打開串聯(lián)電阻補(bǔ)償鍵,調(diào)節(jié)串聯(lián)電阻補(bǔ)償至不產(chǎn)生震蕩為度。(5)漏減調(diào)節(jié)。(6)正式進(jìn)入標(biāo)本細(xì)胞的檢測。膜片鉗的數(shù)據(jù)如何處理:通過滲透很快改變胞漿成分并達(dá)到平衡。南京細(xì)胞生物學(xué)離子通道網(wǎng)站

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膜片鉗又稱單通道電流記錄技術(shù),用特制的玻璃微吸管吸附于細(xì)胞表面,使之形成10~100的密封(giga-seal),又稱巨阻封接,被孤立的小膜片面積為μm量級,內(nèi)中只有少數(shù)離子通道。然后對該膜片實(shí)行電壓鉗位,可測量單個離子通道開放產(chǎn)生的pA(10的負(fù)12次方安培)量級的電流,這種通道開放是一種隨機(jī)過程。通過觀測單個通道開放和關(guān)閉的電流變化,可直接得到各種離子通道開放的電流幅值分布、開放幾率、開放壽命分布等功能參量,并分析它們與膜電位、離子濃度等之間的關(guān)系。還可把吸管吸附的膜片從細(xì)胞膜上分離出來,以膜的外側(cè)向外或膜的內(nèi)側(cè)向外等方式進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。這種技術(shù)對小細(xì)胞的電壓鉗位、改變膜內(nèi)外溶液成分以及施加藥物都很方便。廣州藥理學(xué)實(shí)用膜片鉗哪家好膜片鉗的應(yīng)用:與藥物作用有關(guān)的心肌離子通道。

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膜片鉗技術(shù)是通過微玻管電極(膜片電極或膜片吸管)接觸細(xì)胞膜,用千兆歐姆以上的阻抗使之封接,在電學(xué)上分隔和電極尖開口處相接的細(xì)胞膜的小區(qū)域(膜片)以及其周圍,在此基礎(chǔ)上固定點(diǎn)位,對這膜片上的離子通道的離子電流(pA級)進(jìn)行監(jiān)測記錄的方法。測量回路的中心部分是使用場效應(yīng)管運(yùn)算放大器構(gòu)成的I-V轉(zhuǎn)換器。當(dāng)場效應(yīng)管運(yùn)算放大器的正負(fù)輸入端子是等電位,向正輸入端子施加指令電位時,因?yàn)槎搪坟?fù)端子以及膜片都可等電位地達(dá)到鉗制的作用,字膜片微電極與默片之間形成10GΩ以上封接時,其間達(dá)到Z小的分流電流。

膜片鉗的應(yīng)用:在心血管藥理研究中的應(yīng)用:隨著膜片鉗技術(shù)在心血管方面的普遍應(yīng)用,對血管疾病和藥物作用的認(rèn)識不只得到了不斷更新,而且在其病因?qū)W與藥理學(xué)方面還形成了許多新的觀點(diǎn)。正如諾貝爾基金會在頒獎時所說:“Neher和Sadmann的貢獻(xiàn)有利于了解不同疾病機(jī)理,為研制新的更為有效的藥物開辟了道路”。創(chuàng)新藥物研究與高通量篩選:在離子通道高通量篩選中主要是進(jìn)行樣品量大、篩選速度占優(yōu)勢、信息量要求不太高的初級篩選。較近幾年,分別形成了以膜片鉗和熒光探針為基礎(chǔ)的兩大主流技術(shù)市場。將電生理研究信息量大、靈敏度高等特點(diǎn)與自動化、微量化技術(shù)相結(jié)合,產(chǎn)生了自動化膜片鉗等一些新技術(shù)。膜片鉗技術(shù)的應(yīng)用范圍:在心血管藥理方面的研究。

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膜片鉗電生理技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)流程之標(biāo)本制備和膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng):標(biāo)本制備:根據(jù)研究目的的不同,可采用不同的細(xì)胞組織,如心肌細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞等,現(xiàn)在幾乎可對各種細(xì)胞進(jìn)行膜片鉗的研究。對所采用的細(xì)胞,必須滿足實(shí)驗(yàn)要求,一般多采用酶解分離法,也可采用細(xì)胞培養(yǎng)法;另外,由于與分子生物學(xué)技術(shù)的結(jié)合,現(xiàn)在也運(yùn)用分子克隆技術(shù)表達(dá)不同的離子通道,如利用非洲爪蟾卵母細(xì)胞表達(dá)外源性基因等。膜片鉗實(shí)驗(yàn)系統(tǒng):根據(jù)不同的電生理實(shí)驗(yàn)要求,可以組建不同的實(shí)驗(yàn)系統(tǒng),但有若干共同的基本部件,包括機(jī)械部分(防震工作臺、屏蔽罩、儀器設(shè)備架)、光學(xué)部分(顯微鏡、視頻監(jiān)視器、單色光系統(tǒng))、電子部件(膜片鉗放大器、刺激器、數(shù)據(jù)采集設(shè)備、計(jì)算機(jī)系統(tǒng))和微操縱器。膜片鉗是一種能夠直接觀察單一的離子通道蛋白質(zhì)分子對相應(yīng)離子通透難易程度等特性的一種實(shí)驗(yàn)技術(shù)。嘉興醫(yī)學(xué)膜片鉗技術(shù)設(shè)計(jì)公司

膜片鉗和電壓鉗的區(qū)別:膜電位固定的方法不同。南京細(xì)胞生物學(xué)離子通道網(wǎng)站

膜片鉗技術(shù)之全細(xì)胞式與細(xì)胞吸附式的區(qū)別:全細(xì)胞式記錄這個名字乍聽上去好像和細(xì)胞吸附式?jīng)]啥兩樣,無非就是把電極戳在細(xì)胞上然后記錄它的電活動。但事實(shí)是,這兩者存在天壤之別。首先的一大區(qū)別體現(xiàn)在外部構(gòu)型上:在cell-attached的記錄中,我們不需要用電極戳破細(xì)胞膜,只需將其懟在細(xì)胞膜上即可;但在whole-cell的記錄中,我們不只要將電極懟進(jìn)細(xì)胞膜內(nèi),而且還不能懟得過深或過淺,否則你就無法記錄到有用的電信號。概括一下就是,要形成全細(xì)胞記錄必須打破細(xì)胞膜,但由于這個操作比較厲害,所以要破膜時請相信玄學(xué)。其次,第二大區(qū)別在電阻補(bǔ)償上:在cell-attached的記錄中,由于我們無需打通細(xì)胞內(nèi)外膜,因此細(xì)胞膜上的各種離子通道或蛋白質(zhì)就沒有串聯(lián)在電路當(dāng)中,但是在whole-cell中,串聯(lián)電阻(Rs)就存在了,因此軟件輸出的命令電壓也就不等于細(xì)胞的跨膜電位,故我們需要對其進(jìn)行補(bǔ)償。這些注意事項(xiàng)包括:電極電容及細(xì)胞膜電容補(bǔ)償問題,漏電流問題,液接電位的校正問題,空間鉗位問題,細(xì)胞內(nèi)容物被電擊內(nèi)液稀釋問題,電極內(nèi)液的成分問題等。南京細(xì)胞生物學(xué)離子通道網(wǎng)站

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