血清的保存應(yīng)該注意:血清中的沉淀物、絮狀物:主要是血清中的脂蛋白變性及解凍后血清中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會影響血清本身的質(zhì)量,可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理,顯微鏡下"小黑點"。經(jīng)過熱處理過的血清,沉淀物的形成會明顯增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象"小黑點",常誤認(rèn)為血清受污染,一般情況下,此小黑點不會影響細(xì)胞生長,但如果懷疑血清質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號的血清。切勿將血清在37℃放置太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中的有效成分會破壞而影響血清質(zhì)量。血清的主要作用:提供基本營養(yǎng)物質(zhì):氨基酸、維生素、無機物、核酸衍生物等,是細(xì)胞生長必須的物質(zhì)。蘇州優(yōu)級血清品牌
因為制作工藝成熟和產(chǎn)量大的原因,實驗室常備血清一般都為牛血清。而牛血清種類也因適合培養(yǎng)不同種類的細(xì)胞分很多種了,同屬于牛血清為什么它們價格卻有天壤之別。我們就拿市面上應(yīng)用較為廣的胎牛血清和新生牛血清為例。除了生產(chǎn)成本和供應(yīng)來源不一樣外,兩種血清的成分也很不相同。胎牛血清是母牛在懷孕五至八月齡胎時,將胎牛取出并進行心臟穿刺取血。穿刺取血可較為大程度的避免外界的污染。而新生牛血清是從剛出生到2周內(nèi)的新生牛靜脈。和新生牛血清相比,胎牛血清顯然產(chǎn)量低,成本高。二者的成分也很不一樣。和新生牛血清相比,胎牛血消除了免疫球蛋白含量很低之外,還含有豐富的胚胎生長促進因子以及各種還未完全鑒定的成分,可滿足所培養(yǎng)細(xì)胞的特殊的代謝需求。蘇州優(yōu)級血清品牌血清在溶解過程中必須規(guī)則地?fù)u晃均勻。
胎牛血清的整個生產(chǎn)流程可以分為原料采集,原料加工以及冷鏈運輸。原料采集作為胎牛血清整個生產(chǎn)流程的第一步也是關(guān)鍵的一步,對產(chǎn)品的較為終質(zhì)量起了決定性的影響。采集過程一般要求在各個血源地相關(guān)部門認(rèn)證的農(nóng)場現(xiàn)場采集胎牛血漿,以確保采集對象為獸醫(yī)監(jiān)管下經(jīng)臨床檢查為健康的動物。同時,整個采集的過程還需要在無菌環(huán)境下進行,一些很好的供應(yīng)商甚至提供了全封閉的采集系統(tǒng),徹底避免血清與空氣的接觸,這樣較為終的血清產(chǎn)品內(nèi)的內(nèi)有毒的以及血紅蛋白等成分才會維持在一個極低的水平,確保了獲取的原始血漿質(zhì)量。采集到了很好的原料,下一步就是對采集到的原料進行加工。原料到加工往往會涉及運輸?shù)倪^程,由于生物制品需要冷鏈運輸?shù)奶厥庑裕谠a(chǎn)地直接對原料進行加工是較為理想的情況,這樣可以較為大程度地避免交叉污染。
血清為何要熱滅活,有必要對所有血清都滅活嗎?如何正確的進行滅活?加熱可以滅活補體系統(tǒng)。啟動的補體系統(tǒng)參與溶解細(xì)胞事件,刺激平滑肌收縮,細(xì)胞和血小板釋放組胺,啟動淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞活化。在免疫學(xué)研究中,培養(yǎng)ES細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和平滑肌細(xì)胞時,推薦使用熱滅清。實驗顯示,熱滅清對大多數(shù)的細(xì)胞而言是不需要的,對于非必須的細(xì)胞來說血清滅活對于細(xì)胞生長只有微小甚至無任何作用,還可能造成生長速率降低,沉淀物還會明顯增多,不利于細(xì)胞觀察。因此,若非必須,不需要對血清進行滅活處理。將需要進行處理的血清置于56℃水浴30min,建議加放空白對照(同體積水)使用溫度計測溫,以測得溫度為56℃時為計時起始點,加熱中可不時輕度旋轉(zhuǎn)混勻血清。血清中含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、無機物等。
添加胎牛血清的時候要注意避免把沉淀加入培養(yǎng)液,因為如果培養(yǎng)液有沉淀的存在,會使得其中培養(yǎng)的細(xì)胞產(chǎn)生大量的黑點,除此之外,細(xì)胞的表面還很可能會覆蓋一層油狀物質(zhì),總之出現(xiàn)這樣的情況會極其不利于細(xì)胞的正常生長。那么為了較為大程度減少血清的損失,可以把所有有沉淀的血清進行收集并做離心處理,之后便可將上清液加入培養(yǎng)液中使用。注意解凍的方法:再高質(zhì)量的胎牛血清也要在使用的時候堅持謹(jǐn)慎的原則,因此在解凍血清的時候,要細(xì)心地考慮到其解凍時體積一般會增大的特點,事先為血清預(yù)留出能夠容納膨脹體積的空間。如此一來,便不會發(fā)生污染或者容器凍裂的情況。另外較為好采用國際通用的解方式解凍血清。胎牛血清的蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%( w/v);血紅蛋白含量 ≤ 0.02%( w/v)。黃石去外泌體胎牛血清多少錢
胎牛血清中的物質(zhì)對促進細(xì)胞生長或抑制生長活性是達到生理平衡的。蘇州優(yōu)級血清品牌
血清的保存應(yīng)該注意:需要長期保存的血清必須儲存于-20℃-70℃低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時間切勿超過1個月,由于血清結(jié)冰時體積會增加約10%,因此,血清在凍入低溫冰箱前,必須預(yù)留一定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。瓶裝血清解凍需采用逐步解凍法:-20℃至-70℃ 低溫冰箱中的血清放入4℃冰箱中溶解1天。然后移入室溫,待全部溶解后再分裝。在溶解過程中需不斷輕輕搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一,減少沉淀的發(fā)生。切勿直接將血清從-20℃進入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而出現(xiàn)沉淀。蘇州優(yōu)級血清品牌
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