基于聚合酶鏈反應的遺傳(或脫氧核糖核酸)指紋圖譜協議的發(fā)展已在法醫(yī)學中得到較廣應用：遺傳指紋以其辨別力的形式，可以從世界上所有人群中獨特地區(qū)分任何一個人。微小的DNA樣本可以從犯罪現場，和比較的從嫌疑人那里，或者從DNA資料庫早期的證據或罪犯。這些測試的簡單版本通常用于在刑事調查中快速排除嫌疑人。幾十年前的犯罪證據可以被檢驗，確認或免責很初被定罪的人。脫氧核糖核酸指紋中較小的區(qū)別有助于親子鑒定，在親子鑒定中，一個人和他的近親相匹配。可以測試未知人類遺骸的DNA，并與可能的父母、兄弟姐妹或兒童進行比較。類似的測試可以用來確認被收養(yǎng)(或)孩子的親生父母。新生兒的實際生父也可以被確認(或排除)。聚合酶鏈式反應的引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。珠海組織Real-time PCR網站

PCR的反應條件：dNTP濃度過高會加快反應速度，但同時還可以增加堿基的錯誤摻入率。引物濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增。TaqDNA聚合酶濃度過高會引起錯配和非特異性產物擴增，低則合成產物量減少。TaqDNA聚合酶無校正功能，摻入錯誤率達2*E-4個核苷酸，一個30個循環(huán)的擴增反應0.1%-0.25%總錯誤率。在90～95度下可使整個基因組的DNA變性為單鏈。一般94～95度30～60s。時間過長使TaqDNA聚合酶失活和dNTP破壞增多。DNA很快冷卻到40～60度使引物和模板結合。引物長度在15～25時退火溫度。珠海組織Real-time PCR網站如果基因的基因組DNA序列是已知的，逆轉錄-聚合酶鏈反應可以用來繪制基因中外顯子和內含子的位置。

聚合酶鏈反應：流聚合酶鏈反應:一種偽等溫PCR方法。將溶液置于熱梯度下，而不是反復加熱和冷卻聚合酶鏈反應混合物。由此產生的熱不穩(wěn)定性驅動對流流動自動將聚合酶鏈反應試劑從熱區(qū)域和冷區(qū)域打亂，從而反復啟動聚合酶鏈反應。通過利用混沌流場的出現，可以優(yōu)化熱邊界條件和PCR外殼的幾何形狀等參數，以產生特異和快速的PCR。這種對流聚合酶鏈反應設置明顯降低了設備功率需求和操作時間。逆轉錄聚合酶鏈反應(逆轉錄-聚合酶鏈反應):用于從RNA中擴增DNA。逆轉錄酶將核糖核酸逆轉錄成cDNA ，然后通過聚合酶鏈反應進行擴增。逆轉錄-聚合酶鏈反應較廣用于表達譜，以確定基因的表達或鑒定RNA轉錄物的序列，包括轉錄起始和終止位點。如果基因的基因組DNA序列是已知的，逆轉錄-聚合酶鏈反應可以用來繪制基因中外顯子和內含子的位置?；虻?’端(對應于轉錄起始位點)通常通過 RACE-PCR (快速擴增cDNA末端)中。

聚合酶鏈式反應：反應的控制：PCR反應的緩沖液 提供合適的酸堿度與某些離子；鎂離子濃度 總量應比dNTPs的濃度高，常用1.5mmol/L；底物濃度 dNTP以等摩爾濃度配制，20～200umol/L；TaqDNA聚合酶 2.5U(100ul）；引物濃度一般為0.1 ～ 0.5umol/L；反應溫度和循環(huán)次數；變性溫度和時間 95℃，30s；退火溫度和時間 低于引物Tm值5 ℃左右，一般在45～55℃；延伸溫度和時間 72℃，1min/kb(10kb內）；Tm值=4(G+C) +2(A+T)；循環(huán)次數 ：一般為25 ～ 30次。循環(huán)數決定PCR擴增的產量。模板初始濃度低，可增加循環(huán)數以便達到有效的 擴增量。但循環(huán)數并不是可以無限增加的。一般循環(huán)數為30個左右，循環(huán)數超過30個以后，DNA聚合酶活性逐漸達到飽和，產物的量不再隨循環(huán)數的增加而增加，出現了所謂的“平臺期”。聚合酶鏈反應具有定量合成產物的優(yōu)點。

聚合酶鏈反應的常見問題分析與解決方法：無擴增條帶：酶失活或在反應體系中未加入酶。Taq DNA聚合酶因保存或運輸不當而失活，往往通過更換新酶或用另一來源的酶以獲得滿意的結果。模板含有雜質。特別是對甲醛固定及石蠟包埋的組織常含甲酸，造成DNA脫嘌呤而影響PCR的結果。變性溫度是否準確：PCR儀指示溫度與實際溫度是否相符，過高酶在前幾個循環(huán)就迅速失活；過低則模板變性不徹底。反應系統中污染了蛋白酶及核酸酶，應在未加Taq酶以前，將反應體系95℃加熱5-10 min。引物變質失效。人工合成的引物是否正確。是否純化，或因儲存條件不當而失活。引物錯誤。利用BLAST檢查引物特異性或重新設計引物。 DNA凝膠電泳時加入陽性對照，確保不是DNA凝膠和PCR程序的問題。聚合酶鏈反應五要素：參加PCR反應的物質主要有五種即：引物、酶、dNTP、模板和緩沖液。珠海分子生物學數字PCR技術服務

聚合酶鏈式反應：模板的制備，PCR的模板可以是DNA，也可以是RNA。珠海組織Real-time PCR網站

聚合酶鏈反應同時擴增單個精子中幾個基因座的能力]增強了極大地增強了通過研究減數分裂后染色體交叉來進行基因定位的傳統任務。通過分析數千個單個精子，已經直接觀察到非常緊密基因座之間罕見的交叉事件。類似地，可以分析異常的缺失、插入、易位或倒位，所有這些都無需等待(或支付)漫長而艱苦的受精、胚胎發(fā)生等過程。定點突變：聚合酶鏈反應可用于產生突變基因，突變由科學家隨意選擇。可以選擇這些突變來理解蛋白質是如何完成其功能的，并改變或改善蛋白質功能。珠海組織Real-time PCR網站

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