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來源: 發(fā)布時間:2022-05-27

隨著熒光標記技術(shù)和光學(xué)成像技術(shù)的發(fā)展, 在體生物光學(xué)成像(In vivo optical imaging)已經(jīng)發(fā)展 為一項嶄新的分子、 基因表達的分析檢測技術(shù),在 生命科學(xué)、 醫(yī)學(xué)研究及藥物研發(fā)等領(lǐng)域得到較多應(yīng)用, 主要分為在體生物發(fā)光成像(Bioluminescence imaging,BLI) , 和在體熒光成像,在體光纖成像記錄(Fluorescence imaging)兩種成像方式。 在體生物發(fā)光成像采用熒光素酶基因標記細胞或DNA, 在體熒光成像則采用熒光報告基團, 如綠色熒光蛋白, 紅色熒光蛋白等進行標記 , 利用靈敏的光學(xué)檢測儀器, 如電荷耦合攝像機 (CCD), 觀測活的物體動物體內(nèi)疾病的發(fā)生的發(fā)展、 壞掉的的生長及轉(zhuǎn)移、 基因的表達及反應(yīng)等生物學(xué)過程, 從而監(jiān)測活的物體生物體內(nèi)的細胞活動和基因行為。在體光纖成像記錄技術(shù)是在散射介質(zhì)(或稱為隨機介質(zhì))成像的基礎(chǔ)上發(fā)展。鎮(zhèn)江在體光纖記錄服務(wù)公司

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動物體內(nèi)很多物質(zhì)在受到激發(fā)光激發(fā)后,會發(fā)出熒光,產(chǎn)生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度。背景熒光主要是來源于皮毛和血液的自發(fā)熒光,皮毛中的黑色素是皮毛中主要的自發(fā)熒光源,其發(fā)光光線波長峰值在 500 一 520 nm 左右,在利用綠色熒光作為成像對象時,影響較為嚴重,產(chǎn)生的非特異性熒光會影響到檢測靈敏度和特異性。動物尿液或其他雜質(zhì)如沒有及時打掃,成像中也會出現(xiàn)非特異性信號。由于各廠商的圖像分析軟件不同,實驗數(shù)據(jù)分析方法也有區(qū)別?;畹奈矬w成像系統(tǒng)使用時,實驗者考慮到非特異性雜信號,以及成像圖片美觀等方面,可能會調(diào)節(jié)信號的閾值,因此在在體光纖成像記錄分析信號光子數(shù)或信號面積時,應(yīng)考慮閾值的改變對實驗結(jié)果的影響。正確選擇 ROI 區(qū)域,可提高分析實驗數(shù)據(jù)的準確性。蕪湖實時影像光纖在體光纖成像記錄為實現(xiàn)成像,需要將光束聚焦成很小的光點。

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在體光纖成像記錄就是生物樣本的造影技術(shù),依照樣本尺度大小可以概分為組織造影與細胞分子的顯微技術(shù)。這些大致都需要光學(xué)技術(shù)配合生物樣本的特性發(fā)展,少數(shù)會使用光以外的波動性質(zhì)將圖像光信號變?yōu)殡娦盘柕钠骷?,它是利用少?shù)載流子的注入、存儲和轉(zhuǎn)移等物理過程來完成幾種電路功能的器件,具有體積小、重量輕、功耗低、可靠性好、無損傷現(xiàn)象、能抗震以及光譜響應(yīng)寬等特點,是展示臺的輸入設(shè)備,是攝像頭的心臟。利用信號整形之類的技術(shù)可以得到高質(zhì)量數(shù)據(jù),此外高精度成像硬件也有助于保證較高的成像質(zhì)量。

小動物在體光纖成像記錄可根據(jù)實驗需要通過尾靜脈注射、皮下移植、原位移植等方法接種已標記的細胞或組織。在建模時應(yīng)認真考慮實驗?zāi)康暮瓦x擇熒光標記,如標記熒光波長短,則穿透效率不高,建模時不宜接種深部臟器和觀察體內(nèi)轉(zhuǎn)移,但可以觀察皮下瘤和解剖后臟器直接成像。深部臟器和體內(nèi)轉(zhuǎn)移的觀察大多選用熒光素酶標記。小鼠經(jīng)過常規(guī)麻醉(氣麻、針麻皆可)后放入成像暗箱平臺,軟件控制平臺的升降到一個合適的視野,自動開啟照明燈(明場)拍攝首先一次背景圖。下一步,自動關(guān)閉照明燈,在沒有外界光源的條件下(暗場)拍攝由小鼠體內(nèi)發(fā)出的特異光子。明場與暗場的背景圖疊加后可以直觀的顯示動物體內(nèi)特異光子的部位和強度,完成成像操作。值得注意的是熒光成像應(yīng)選擇合適的激發(fā)和發(fā)射濾片,生物發(fā)光則需要成像前體內(nèi)注射底物激發(fā)發(fā)光。實時觀測動物在進行復(fù)雜行為時的神經(jīng)投射活動。

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在體光纖成像記錄直接標記法不涉及細胞的遺傳修飾,標價能夠在體外培養(yǎng)時主動與細胞結(jié)合,也可以將標記直接注射到動物體內(nèi),間接標記法,將報告基因引入細胞,并翻譯成酶、受體、熒光或生物發(fā)光蛋白如果報告基因的表達是穩(wěn)定的,標記的細胞可以在整個細胞的生命周期中被觀察到。由于報告基因通常被傳遞給后代細胞,因此細胞增殖也能夠得到體現(xiàn)。體內(nèi)標記是指將探針直接注射進入機體,常用的標記方法是靜脈注射氧化鐵納米顆粒。光學(xué)成像方法可分為基于熒光的方法和基于生物發(fā)光的方法。在體光纖成像記錄在腦功能研究中具有較多的用途。鎮(zhèn)江在體光纖記錄服務(wù)公司

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在體光纖成像記錄在軟組織傳播而成像,由于無輻射、操作簡單、圖像直觀、價格便宜等優(yōu)勢在臨床上較多應(yīng)用。在小動物研究中,由于所達到組織深度的限制和成像的質(zhì)量容易受到骨或軟組織中的空氣的影響而產(chǎn)生假象。所以超聲不像其他動物成像技術(shù)那樣應(yīng)用較多,應(yīng)用主要集中在生理結(jié)構(gòu)易受外界影響的膀胱和血管,此外小動物超聲在轉(zhuǎn)基因動物的產(chǎn)前發(fā)育研究中有很大優(yōu)勢。隨著分子生物學(xué)及相關(guān)技術(shù)的發(fā)展,各種成像技術(shù)應(yīng)用更較多,成像系統(tǒng)要求能對的定量、分辨率高、標準化、數(shù)字化、綜合性、在系統(tǒng)中對分子活動敏感并與其他分子檢測方式互相補償及整合。與此同時,作為動物顯像的技術(shù)平臺,動物成像技術(shù)將在生命科學(xué)、醫(yī)藥研究中發(fā)揮著越來越重要的作用。鎮(zhèn)江在體光纖記錄服務(wù)公司

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